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Not fact-finding, but attainment to philosophy is the aim of science. वास्तव में ऐसा नहीं है ढूँढने की है , लेकिन प्राप्ति करने के उद्देश्य को विज्ञान के दर्शन है . ~Martin H. Fischer मार्टिन ~ एच. फिशर

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Lowry Protein Assay Protocol Lowry प्रोटीन परख प्रोटोकॉल

Protein Concentration Determination by the Lowry Prtoein Assay Protocol प्रोटीन निर्धारण एकाग्रता द्वारा परख Lowry Prtoein प्रोटोकॉल

Materials सामग्री

1. 1 . Complex-forming reagent: Prepare immediately before use by mixing the following stock solutions in the proportion 100:1:1 (by vol), respectively: कॉम्प्लेक्स बनाने के अभिकर्मक : ठीक पहले की तैयारी के मिश्रण का प्रयोग द्वारा निम्नलिखित स्टॉक समाधान के अनुपात में 100:1:1 ( वॉल्यूम द्वारा ) , क्रमश :
Solution A: 2% (w/v) Na2CO3 in distilled water. एक समाधान : 2 % ( w / v ) Na2CO3 आसुत जल में है .
Solution B: 1% (w/v) CuSO4·5H2O in distilled water. समाधान बी : 1 % ( w / v ) CuSO4 5H2O आसुत जल में है .
Solution C: 2% (w/v) sodium potassium tartrate in distilled water. सी समाधान : 2 % ( w / v ) सोडियम पोटेशियम टार्ट्रेट आसुत जल में है .

2. 2 . Prepare 2 N NaOH. 2 N NaOH तैयार है .

3. 3 . Folin reagent (commercially available): Use at 1 N concentration. Folin अभिकर्मक ( व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ) : एन 1 से एकाग्रता का प्रयोग करें .

4. 4 . Standards: Use a stock solution of standard protein (eg, bovine serum albumin fraction V) containing 2 mg/mL protein in distilled water, stored frozen at –20°C. मानक : समाधान के मानक का उपयोग करें स्टॉक प्रोटीन ( eg , गोजातीय सीरम albumin अंश वी ) 2 मिलीग्राम / एम एल में प्रोटीन आसुत जल , पर संग्रहित फ्रोजन -20 ° C. Prepare standards by diluting the stock solution with distilled water as follows: मानक तैयार किया है कि शेयर कमजोर आसुत जल के साथ समाधान के रूप में है :

Stock solution (µL) 0 2.5 5 12.5 25 50 125 250 500 स्टॉक समाधान ( μ एल ) 0 2,5 5 12,5 25 50 125 250 500

Water (µL) 500 498 495 488 475 450 375 250 0 जल ( μ एल ) 500 498 495 488 475 450 375 250 0
Protein conc. प्रोटीन सान्द्र . (µg/mL) 0 10 20 50 100 200 500 1000 2000 ( g μ / एम एल ) 0 10 20 50 100 200 500 1000 2000

Method विधि

1. 1 . To 0.1 mL of sample or standard, add 0.1 mL of 2 N NaOH. 0,1 करने के लिए मानक या एम एल के नमूने , 0,1 जोड़ने के 2 एम एल एन NaOH . Hydrolyze at 100°C for 10 min in a heating block or boiling water bath. Hydrolyze से 100 डिग्री सेल्सियस के लिए 10 मिनट में एक खंड या गर्म पानी गर्म पानी से स्नान है .

2. 2 . Cool the hydrolysate to room temperature and add 1 mL of freshly mixed complex-forming reagent. कूल के कमरे के तापमान और hydrolysate को जोड़ने 1 एम एल के ताजा मिश्रित जटिल बनाने के अभिकर्मक . Let the solution stand at room temperature for 10 min. आइए कमरे के तापमान पर खड़े के समाधान के लिए 10 मिनट .

3. 3 . Add 0.1 mL of Folin reagent, using a vortex mixer, and let the mixture stand at room temperature for 30–60 min (do not exceed 60 min). जोड़ें 0,1 एम एल के Folin अभिकर्मक , vortex मिश्रक का प्रयोग कर रहे हैं , और लश्कर के कमरे के तापमान पर खड़े मिश्रण के लिए 30-60 मिनट ( 60 मिनट से अधिक नहीं है ) .

4. 4 . Read the absorbance at 750 nm if the protein concentration was below 500 µg/mL or at 550 nm if the protein concentration was between 100 and 2000 µg/mL. 750 एनएम पर पढ़ें absorbance तो नीचे दी गई थी प्रोटीन एकाग्रता 500 μ g / एम एल या 550 एनएम यदि प्रोटीन एकाग्रता किया गया था और 2000 के बीच 100 μ g / मिली है .

5. 5 . Plot a standard curve of absorbance as a function of initial protein concentration and use it to determine the unknown protein concentrations. वक्र के भूखंड एक मानक के रूप में एक समारोह के प्रारंभिक absorbance एकाग्रता और प्रोटीन का उपयोग यह निर्धारित करने के प्रोटीन की मात्रा अज्ञात है .

Lowry Method References Lowry तरीका सन्दर्भों

Based on protocol by Jakob H. Waterborg. प्रोटोकॉल के आधार पर किया Jakob एच. Waterborg .

Lowry et al. J. अल Lowry एट . जे Biol. Biol . Chem . Chem . 193: 265-275 (1951) 193 : 265-275 ( 1951 )

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