home > protein-microarrays > protein-chip-attachment > index.php घर > प्रोटीन microarrays > की चिप प्रोटीन अनुलग्नक > index.php
 |
|---|
 |  |  |  |  |  |
|---|---|---|---|---|---|
Protein Array Protocols प्रोटीन एरे प्रोटोकॉल | Protein Array Bioinformatics प्रोटीन एरे Bioinformatics | Learn about Protein Arrays Arrays प्रोटीन के बारे में जानें | Protein Array Kits and Products प्रोटीन एरे किटों और उत्पाद | Protein Array Forum प्रोटीन एरे फोरम | Proteomic News Proteomic समाचार |
Protein and Antibody Microarrays प्रोटीन और एंटीबॉडी Microarrays
Attachment अनुलग्नक
To attach proteins to a solid surface, the surface of the substrate has to be modified to achieve maximum binding capacity (8,27). The proteins are attached to the chip on a protein attachment layer (see Figure 3). This layer is typically an organic film which varies with the nature of the application. A variety of materials have been studied including agarose (39), dextran-based hydrogel (40), porous polyacrylamide hydrogel hydrophilic polymers and polyamino acids (41). संलग्न करने के लिए प्रोटीन के लिए एक ठोस सतह की सतह के सब्सट्रेट संशोधित किया जाना चाहिए हासिल करने के लिए बाध्य अधिकतम क्षमता ( 8,27 ) . संलग्न हैं प्रोटीन को चिप पर एक प्रोटीन अनुलग्नक परत ( देखें चित्र 3 ) . परत है यह आमतौर एक जैविक जो फिल्म के साथ अलग अलग आवेदन की प्रकृति के हैं . कई प्रकार की सामग्री के एक अध्ययन किया गया है जिनमें agarose ( 39 ) , dextran आधारित hydrogel ( 40 ) , छिद्रित polyacrylamide hydrogel hydrophilic polymers और polyamino एसिड ( 41 ) .
A convenient attachment method used nitrocellulose-membrane or poly-L-Lysine coated glass such that proteins could be passively absorbed onto the surface through non-specific interactions (34,42,43). The attached proteins bind onto the surface in random orientations and can be washed off under stringent washing conditions. However, the noise level is usually higher because of the non-specific absorption/adsorption. संलग्नक का एक सुविधाजनक तरीका इस्तेमाल किया nitrocellulose की झिल्ली या पॉली - l - Lysine लेपित ग्लास है कि इस तरह के प्रोटीन की जा सकती है passively अवशोषित की सतह पर विशेष चर्चा के माध्यम से गैर ( 34,42,43 ) . संलग्न प्रोटीन की सतह पर बाध्य में झुकाव और यादृच्छिक बंद किया जा सकता है धोकर धोने कड़ी शर्तों के अधीन है . बहरहाल , शोर है , आमतौर पर उच्च स्तर के कारण गैर विशिष्ट अवशोषण / adsorption .
A more specific and stronger attachment is achieved by creating reactive surfaces on glass that can covalently cross-link to proteins (31,36,26). A bifunctional silane cross-linker is used to form a self-assembled monolayer (SAM), which has one functional group that reacts with the hydroxyl groups on glass the glass surface, and another group which is free to react with primary amine groups of proteins or can be further chemically modified to reach maximum specificity (44,45). Another variation is gold-coated glass (46,47). The advantage of gold-coated chips is that SPR and mass spectrometry can be integrated as detection methods to monitor the dynamics of the reaction, and to identify the captured molecules. एक अधिक विशिष्ट और मजबूत बनाने के द्वारा प्राप्त किया जाता है अनुलग्नक प्रतिक्रियाशील कर सकते हैं कि सतह पर कांच covalently पार से लिंक करने के लिए प्रोटीन ( 31,36,26 ) . bifunctional silane पार से एक का प्रयोग किया जाता है श्रृंखलक के रूप में स्वयं को इकट्ठा monolayer ( एसएएम ) है , जो कार्य समूह ने एक प्रतिक्रिया है कि समूहों के साथ hydroxyl सतह पर कांच के गिलास , और एक अन्य समूह के लिए स्वतंत्र है जो प्रतिक्रिया amine समूहों के प्रोटीन के साथ प्राथमिक या रासायनिक संशोधित किया जा सकता है और आगे तक पहुँचने के लिए अधिक से अधिक विशिष्टता ( 44,45 ) . विभिन्नता है एक और स्वर्ण कोटिड ग्लास ( 46,47 ) . सोने का लाभ यह है कि SPR लेपित चिप्स और मास स्पेक्ट्रोमेट्री के रूप में एकीकृत किया जा सकता है तरीकों का पता लगाने के लिए निगरानी की गतिशीलता की प्रतिक्रिया है , और अणुओं का पता लगाने के लिये ले लिया .
The above-mentioned covalent cross-linking approaches however have a disadvantage. इन covalent पार से जोड़ने का एक दृष्टिकोण है लेकिन नुकसान है . Due to the fact that reactive ligands also exist in the side chains of proteins it is possible that their random attachment may alter the native confirmation of proteins, reduce the activity of proteins, or make them inaccessible to probes (8,27). इस तथ्य के कारण है कि प्रतिक्रियाशील ligands भी टीम में मौजूद प्रोटीन की श्रृंखला यह संभव है कि उनके यादृच्छिक अनुलग्नक बदल सकते प्रोटीन की पुष्टि के मूल निवासी है , कम गतिविधि के प्रोटीन , या उन्हें बनाने की जांच करने के लिए दुर्गम ( 8,27 ) .
In order to orient proteins uniformily away from the surface of the chip, proteins may be fused with a high-affinity tag at their amino or carboxy termini. With this method, immobilized proteins/antibodies are more likely to remain in their native conformation, thus allowing the analytes efficient access to the active sites of the proteins. This method was first successfully demonstrated with the attachment of 5800 fusion proteins containing a His tag onto a nickel-coated glass slide (26). Other affinity methods such as glutathione/GST have also been used (48). uniformily करने के लिए प्रोटीन के अनुकूल की सतह से दूर के लिए चिप , प्रोटीन हो सकता है नयुदम्मा टैग के साथ एक उच्च संबंध में या अपने अमीनो carboxy termini . साथ इस विधि , प्रोटीन immobilized / एंटीबॉडी की संभावना अधिक होती है रहने के लिए अपने conformation का मूल निवासी है , इस प्रकार कुशल पहुँच की अनुमति analytes को सक्रिय साइटों के प्रोटीन है . इस विधि का प्रदर्शन पहली बार सफलतापूर्वक अनुलग्नक के साथ 5800 के संलयन प्रोटीन युक्त एक टैग उनकी निकल कोटिड ग्लास पर एक स्लाइड ( 26 ) . तरीकों जैसे अन्य आकर्षण glutathione / GST हैं का भी इस्तेमाल किया गया ( 48 ) .
Streptavidin based immobilization methods have been also widely employed to attach any biotinylated biological element to the array surface (49). Streptavidin के आधार पर भी किया गया है स्थिरीकरण तरीकों को व्यापक रूप से संलग्न किसी भी नियोजित biotinylated जैविक तत्व को सतह सरणी ( 49 ) .
The chip support material is important because proteins are highly sensitive to physiochemical properties. For example, polar arrays are chemically treated to bind to hydrophilic proteins however such surfaces are unsuitable for cell membrane proteins (eg G-protein coupled receptors) as they possess hydrophobic domains (9). चिप में सहायता सामग्री महत्वपूर्ण है क्योंकि प्रोटीन उच्च संवेदनशील होते हैं physiochemical गुण हैं . उदाहरण के लिए , ध्रुवीय arrays हैं रासायनिक उपचार करने के लिए बाध्य करने के लिए प्रोटीन hydrophilic सतहों हैं लेकिन इस तरह के अनुपयुक्त सेल झिल्ली के लिए प्रोटीन ( जैसे प्रोटीन युग्मित रिसेप्टर्स जी ) के अधिकारी के रूप में वे hydrophobic डोमेन ( 9 ) .
Proteins do not behave like nucleic acids, and different proteins will behave in different ways when exposed to the same surface chemistry. Different types a surface chemistries will thus promote the retention of some proteins and cause denaturation or loss of activity of others. Therefore, the proper choice of surface chemistry is important as this will allow immobilized proteins of diverse types to retain their secondary and tertiary structures, and thus their biological activity. This problem is magnified when the number of different spots on the chip increases, as there may be 100 different ways to immobilize 100 different proteins in order to obtain proper folding and function of all the proteins. Also a significant problem is because the functions of most proteins are currently unknown, so there is no method to actually test whether they are still functional on the chip (7). प्रोटीन की तरह व्यवहार नहीं nucleic एसिड , प्रोटीन होगा और विभिन्न तरीकों से अलग व्यवहार में , जब एक ही उजागर करने के लिए रसायन शास्त्र की सतह . विभिन्न प्रकार की सतह इस प्रकार होगा chemistries बढ़ावा देने के प्रोटीन और कुछ को बनाए रखने के कारण विकृतीकरण की हानि या अन्य गतिविधियों की है . इसलिए , रसायन विज्ञान की सतह उचित विकल्प के रूप में महत्वपूर्ण है इससे immobilized विविध प्रकार के प्रोटीन को बनाए रखने के अपने माध्यमिक और तृतीयक संरचनाओं , जैविक है और इस तरह उनकी गतिविधियों . magnified जब यह समस्या यह है की संख्या के विभिन्न स्थलों पर चिप बढ़ जाती है , के रूप में हो सकता 100 100 अलग अलग तरीके से immobilize प्रोटीन प्राप्त करने के लिए समुचित वलन और समारोह के सभी प्रोटीन है . भी एक महत्वपूर्ण समस्या यह है क्योंकि के कार्यों में सबसे अधिक प्रोटीन वर्तमान में अज्ञात रहे हैं , इसलिए कोई तरीका नहीं है वास्तव में परीक्षण करने के लिए कि क्या वे अभी भी काम पर चिप ( 7 ) .
Next: Protein Chip Delivery Methods अगला : प्रोटीन चिप तरीके डिलिवरी
References for Protein and Antibody Microarrays संदर्भ के लिए प्रोटीन और एंटीबॉडी Microarrays
Back to: पर वापस जाएँ :
Introduction and Background to Protein Chips and Antibody Chips. परिचय और पृष्ठभूमि के लिए प्रोटीन चिप्स और एंटीबॉडी चिप्स .
Types of Antibody and Protein Chips चिप्स और प्रोटीन के प्रकार एंटीबॉडी
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. अस्वीकरण / सेवा की शर्तें | गोपनीयता नीति | © 2005-2007 आण्विक Station.com , सभी अधिकार आरक्षित .
Send this page to a friend इस पृष्ठ को अपने एक मित्र को भेजें
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
