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Phosphorimaging

Phosphorimaging

This technique has several advantages over standard autoradiography, but the most important is that it is much more accurate in quantifying the amount of radioactivity in a substance.  This is because its response to radioactivity is far more linear than that of an x-ray film.  With standard autoradiography, a band with 50,000 radioactive disintegrations per minute (dpm) may look no darker than one with 10,000 dpm because the emulsion in the film is already saturated at 10,000 dpm.  But the phosphorimager collects radioactive emissions and analyzes them electronically, so the difference between 10,000 dpm and 50,000 dpm would be obvious.  Here is how the technique works:  We start with a radioactive sample- a blot with DNA bands that have hybridized with a labeled probe, for example.  We place this sample in contact with a phosphorimager plate, which absorbs B-rays.  These rays excite molecules on the plate, and these molecules remain in an excited state until the phosphoimager scans the plate with a laser.  At that point, the B-ray energy trapped by the plate is released and monitored by a computerized detector.  The computer converts the energy it detects to an image.  This is a false color image, where the different colors represent different of radioactivity, from the lowest (yellow) to the highest (black). इस तकनीक से अधिक मानक autoradiography ने कई फायदे हैं , लेकिन सबसे महत्वपूर्ण यह है कि यह कहीं ज्यादा सटीक में quantifying में रेडियोधर्मिता की राशि का एक पदार्थ है . ऐसा इसलिए है कि अपनी प्रतिक्रिया रेडियोसक्रियता है रैखिक की तुलना में कहीं अधिक है कि एक एक्सरे फिल्म है . मानक autoradiography के साथ , एक बैंड के साथ 50000 रेडियोधर्मी disintegrations प्रति मिनट ( dpm ) नहीं देख सकते के साथ एक गहरे रंग की तुलना में 10000 dpm पायस क्योंकि फिल्म में पहले से ही संतृप्त में 10000 dpm . लेकिन phosphorimager इकट्ठा रेडियोधर्मी उत्सर्जन विश्लेषण करती है और उन्हें इलेक्ट्रॉनिक है , इसलिए 10000 और 50000 के बीच अंतर dpm होगा dpm स्पष्ट है . यहां तकनीक कैसे काम करती है : हम शुरू से रेडियोधर्मी नमूने के डीएनए के साथ एक धब्बा है कि बैंड ने hybridized लेबल के साथ एक जांच , उदाहरण के लिए है . हम इस स्थान के संपर्क में एक नमूना phosphorimager प्लेट , जो अवशोषित रे बी . उत्तेजित रे ये अणु प्लेट पर , और इन अणुओं में बने एक राज्य तक उत्साहित phosphoimager स्कैन के साथ एक प्लेट लेजर . उस समय , ऊर्जा के बी रे फंस द्वारा जारी की है और प्लेट निगरानी एक कम्प्यूटरीकृत डिटेक्टर . कंप्यूटर धर्मान्तरित करने के लिए ऊर्जा का पता लगाता है वह एक छवि है . यह एक गलत छवि रंग , जहां अलग अलग रंग की रेडियोधर्मिता का प्रतिनिधित्व करते हैं , में से सबसे कम ( पीला ) के सर्वोच्च ( काला ) .