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FACS

The FACS Technique इस तकनीक FACS

Resting lymphocytes comprise many functional subpopulations, which are identified and distinguished from each other on the basis of heir differential expression of cell surface proteins, which can be detected using specific antibodies. आराम lymphocytes समाविष्ट कई कार्यात्मक subpopulations , जो एक दूसरे से और विशिष्ट पहचान के आधार पर विभेदक वारिस कोशिका की सतह प्रोटीन की अभिव्यक्ति है , जो विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करते हुए पकड़ा जा सकता है .

Flow Cytometry फ्लो Cytometry

A powerful tool for defining and quantifying lymphocytes is the flow cytometer, which detects and counts individual cells passing in a stream through a laser beam. परिभाषित करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण और quantifying lymphocytes प्रवाह cytometer है , जो व्यक्ति का पता लगाता है और देश की कोशिकाओं में पारित एक धारा के माध्यम से एक लेजर बीम . A flow cytometer equipped to separate the identified cells is called a fluorescence-activated cell sorter (FACS). प्रवाह से सज्जित करने के लिए एक अलग पहचान cytometer कोशिकाओं कहा जाता है प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल सॉर्टर ( FACS ) . These instruments are used to study the properties of cell subsets identified using monoclonal antibodies to cell-surface proteins. इन उपकरणों का उपयोग किया जाता के गुणों का अध्ययन करने के लिए कैंपेन्स कोशिका का उपयोग करके मोनोक्लोनल प्रतिपिण्डों की पहचान की कोशिका की सतह के लिए प्रोटीन है . Individual cells within a mixed population are first tagged by treatment with specific monoclonal antibodies labeled with fluorescent dyes, or by specific antibodies followed by labeled anti-immunoglobulin antibodies. व्यक्तिगत कोशिकाओं के भीतर एक मिश्रित आबादी पहले पताका द्वारा उपचार के साथ लेबल के साथ विशिष्ट मोनोक्लोनल प्रतिपिण्डों फ्लोरोसेंट रंजक , या उसके बाद एंटीबॉडी द्वारा विशिष्ट लेबल विरोधी immunoglobulin एंटीबॉडी . The mixture of labeled cells is then forced with a much arger volume of saline through a nozzle, creating a fine stream of liquid containing cells spaced singly at intervals . इस मिश्रण के साथ लेबल की कोशिकाओं को मजबूर है तो काफी मात्रा में लवण arger नोजल के माध्यम से एक है , एक अच्छा बनाने के प्रवाह को रोकने के तरल कोशिकाओं के स्थान पर अकेले अंतराल है . As each cell passes through a laser beam it scatters the laser light, and any dye molecules bound to the cell will be excited and will fluoresce. जैसा कि प्रत्येक कोशिका से होकर यह एक लेजर बीम बिथराता के लेसर प्रकाश , और कोई भी अणु रंजक कोशिका को बाध्य किया जाएगा और उत्साहित होंगे प्रतिदीप्ति होना है .

Sensitive photomultiplier tubes detect both the scattered light, which gives information on the size and granularity of the cell, and the florescence emissions, which give information on the binding of the labeled monoclonal antibodies and therefore on the expression of cell-surface proteins by each cell. दोनों संवेदनशील photomultiplier नलियों का पता लगाने के प्रकाश में बिखरे हुए हैं , जो के आकार के बारे में जानकारी देता है और सेल के granularity , और फूल आना उत्सर्जन है , जो जानकारी देने के लेबल पर बाध्यकारी है और इसलिए मोनोक्लोनल प्रतिपिण्डों पर अभिव्यक्ति के द्वारा प्रत्येक कोशिका की सतह प्रोटीन कोशिका . In the cell sorter, the signals passed back to the computer are used to generate an electric charge, which is passed from the nozzle through the liquid stream at the precise time that the stream breaks up into droplets, each containing no more than a single cell; droplets containing a charge can then be deflected from the main stream of droplets as they pass between plates of opposite charge, so that positively charged droplets are attracted to a negatively charged plate, and vice versa. सेल में सॉर्टर के संकेतों को पारित करने के लिए कंप्यूटर का उपयोग किया जाता है एक बिजली पैदा आरोप है , जो पारित नोजल के माध्यम से तरल स्ट्रीम में सटीक समय तक कि इस धारा में बूंदों को तोड़ता है , जिनमें से प्रत्येक एक ही कोशिका से अधिक नहीं ; बूंदों चार्ज किया जा सकता है जिसमें एक deflected से मुख्य धारा की बूंदों के रूप में वे पास के विपरीत प्लेटों के बीच आरोप है , ताकि सकारात्मक शुल्क लिया जाता है बूंदों की ओर आकर्षित करने के लिए एक नकारात्मक प्लेट का आरोप लगाया है , और इसके ठीक विपरीत है . In this way, specific subpopulations of cells, distinguished by the binding of the labeled antibody, can be purified from a mixed population of cells. इस तरह , विशिष्ट subpopulations की कोशिकाओं , विशिष्ट बंधन के द्वारा लेबल एंटीबॉडी , शुद्ध किया जा सकता है कोशिकाओं से मिश्रित आबादी है . Alternatively, to deplete a population of cells, the same fluorochrome can be used to label different antibodies directed at marker proteins expressed by the various undesired cell types. वैकल्पिक रूप से , खाली करने के लिए कोशिकाओं की आबादी है , वही fluorochrome लेबल करने के लिए प्रयोग किया जा सकता है पर मार्कर प्रोटीन के निर्देश अलग अलग एंटीबॉडी द्वारा व्यक्त की गई विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं अनिच्छित .

Cell Sorting सेल से अनुक्रमित

The cell sorter can be used to direct labeled cells to a waste channel, retaining only the unlabeled cells. सेल का इस्तेमाल किया जा सकता है सॉर्टर प्रत्यक्ष लेबल की कोशिकाओं को बर्बाद करने के लिए एक चैनल , unlabeled कोशिकाओं को बनाए रखने के ही हैं . When cells are labeled with a single fluorescent antibody, the data from flow cytometer are usually displayed in the form of a histogram of fluorescence intensity vs. cell numbers. जब कोशिकाओं हैं लेबल के साथ एक ही फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी , डाटा प्रवाह से cytometer आमतौर से एक के रूप में प्रदर्शित हिस्टोग्राम प्रतिदीप्ति तीव्रता का बनाम सेल संख्या है . If two or more antibodies are used, each coupled to different fluorescent dye, then the data are more usually displayed in he form of a two-dimensional scatter diagram or as a contour diagram, where the fluorescence of one dye-labeled antibody is plotted against that of a second, with the result that a population of cells labeling with one antibody can be further subdivided by its labeling with the second antibody. यदि दो या अधिक एंटीबॉडी उपयोग किया जाता है , प्रत्येक के लिए अलग युग्मित फ्लोरोसेंट रंजक , तो आमतौर पर अधिक डेटा के रूप में प्रदर्शित उन्होंने दो आयामी छितरा समोच्च चित्र या चित्र के रूप में , जहां एक प्रतिदीप्ति रंजक के लेबल के खिलाफ साजिश है एंटीबॉडी कि एक दूसरे के साथ , एक का परिणाम है कि जनसंख्या के लेबल के साथ एक एंटीबॉडी कोशिकाओं की जा सकती है और इसके द्वारा subdivided लेबल के साथ दूसरा एंटीबॉडी . By examining large numbers of cells, flow cytometry can give quantitative data on the percentage of cells bearing different molecules. बड़ी संख्या में कोशिकाओं का परीक्षण करके , प्रवाह cytometry दे सकते हैं पर मात्रात्मक डेटा के प्रतिशत में विभिन्न कोशिकाओं बेयरिंग अणु है . As the power of FACS technology has grown, progressively more antibodies labeled with distinct fluorescent dyes can be used at the same time. FACS की शक्ति के रूप में विकसित प्रौद्योगिकी , क्रमशः अधिक एंटीबॉडी लेबल के साथ अलग फ्लोरोसेंट रंजक प्रयोग किया जा सकता है एक ही समय में .

Three, four and even five color analyses can now be handled by very powerful machines तीन , चार और पांच रंग भी विश्लेषण किया जा सकता है मशीनों द्वारा बहुत ही शक्तिशाली

FACS Protocols FACS प्रोटोकॉल