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Mycoplasma Contamination | Cell Culture Mycoplasma कंटैमिनेशन | सेल संस्कृति

We include here for cell culture labs, information on mycoplasma contaminations and the latest mycoplasma forum discussions for all your contamination questions and discussions. हम कोशिका के लिए यहाँ संस्कृति लैब्स में शामिल हैं , के बारे में जानकारी mycoplasma contaminations और नवीनतम mycoplasma मंच चर्चा के लिए अपने सभी प्रश्नों के संदूषण और चर्चा है .

Mycoplasma Background Mycoplasma पृष्ठभूमि

Mycoplasmas are a genus of bacteria that lack a cell wall. Mycoplasmas के जीवाणुओं को नष्ट कर रहे हैं कि एक जाति के एक सेल की दीवार की कमी है . Due to a lack of a cell wall, they are resistant to many antibiotics including penicillin or other beta-lactam antibiotics that target cell wall synthesis. कमी के कारण एक सेल में एक दीवार है , वे हैं प्रतिरोधी सहित कई एंटीबायोटिक पेनिसिलिन या अन्य lactam बीटा सेल का लक्ष्य है कि एंटीबायोटिक दवाओं की दीवार संश्लेषण .

Mycoplasma are either parasitic or saprophytic. Mycoplasma हैं या परजीवी या तो saprophytic . Several Mycoplasma are disease-causing in humans, including M. pneumoniae, which is an important cause of atypical pneumonia and other respiratory disorders, and M. genitalium, which is believed to be involved in pelvic inflammatory diseases. कई Mycoplasma रोग के कारण मानव शरीर में हैं , जिनमें एम. pneumoniae है , जो एक महत्वपूर्ण कारण श्वसन atypical न्यूमोनिया और अन्य विकार , और एम. genitalium है , जो विश्वास में शामिल होने की बीमारियों के भड़काऊ श्रोणीय . They may cause or contribute to some cancers. योगदान करने का कारण हो सकता है या वे कुछ तरह के कैंसरों .

Genus Mycoplasma वंश Mycoplasma

The genus Mycoplasma is one of several genera within the class Mollicutes. Mycoplasma से एक है इस जाति के कई वर्ग के भीतर उत्पन्न Mollicutes . Mollicutes are bacteria which have small genomes, lack a cell wall and have a low GC-content (18-40 %). Mollicutes जीवाणु हैं जो छोटे जीनोम , एक कोशिका की दीवार की कमी है और कम GC - सामग्री ( 18-40 % ) .

There are over 100 recognized species of the genus Mycoplasma. मान्यता प्राप्त हैं 100 से अधिक प्रजातियों के जीनस Mycoplasma . Their genome size ranges from 0.58 1.38 megabase-pairs. जीनोम उनके आकार से लेकर 0,58 1,38 megabase की जोड़ी है . Mollicutes are parasites or commensals of humans, animals (including insects), and plants; the genus Mycoplasma is by definition restricted to vertebrate hosts. Mollicutes हैं या commensals परजीवियों के मानव , पशु ( कीड़ों सहित ) , और पौधों ; जीनस Mycoplasma है परिभाषा द्वारा प्रतिबंधित करने के लिए मेजबान कशेरुकीय . Cholesterol is required for the growth of species of the genus Mycoplasma as well as certain other genera of mollicutes. कोलेस्ट्रॉल की आवश्यकता है के विकास के लिए प्रजातियों के जीनस Mycoplasma के साथ ही कुछ अन्य mollicutes उत्पन्न की है . Their optimum growth temperature is often the temperature of their host if warmbodied (eg 37 degrees Celsius in humans) or ambient temperature if the host is unable to regulate its own internal temperature. उनके विकास के तापमान अधिकतम तापमान से होती है , तो उनके होस्ट warmbodied ( उदा. 37 डिग्री सेल्सियस तक मानव में ) या परिवेश के तापमान में असमर्थ है तो मेजबान को विनियमित करने के लिए अपने स्वयं के आंतरिक तापमान है . Analysis of 16S ribosomal RNA sequences as well as gene content strongly suggest that the mollicutes, including the mycoplasmas, are closely related to either the Lactobacillus or the Clostridium branch of the phylogenetic tree (Firmicutes sensu stricto). दृश्य का विश्लेषण 16S ribosomal शाही सेना के साथ ही सुझाव है कि जीन सामग्री जोरदार mollicutes सहित mycoplasmas , निकट से संबंधित हैं या तो लैक्टोबैसिलस या Clostridium शाखा के पेड़ जातिवृत्तीय ( Firmicutes sensu stricto ) .

Cell Lines and Mycoplasmas सेल लाइनों और Mycoplasmas

In cell cultures, mycoplasmas may induce cellular changes, including chromosome aborations, changes in metabolism and cell growth. सेल में संस्कृतियों , mycoplasmas सेलुलर परिवर्तनों को उत्पन्न हो सकता है , जिनमें गुणसूत्र aborations , चयापचय और सेल में परिवर्तन की वृद्धि दर्ज की गई . Severe mycoplasma infections may destroy a cell line or render expensive or precious cell lines useless. mycoplasma नाश एक गंभीर संक्रमण हो सकता है या सेल लाइन देना या महंगी कीमती कोशिका लाइनों व्यर्थ है .

Cell Culture Contamination with Mycoplasma सेल संस्कृति के साथ कंटैमिनेशन Mycoplasma

Mycoplasmas are often found in research laboratories as contaminants in cell culture. Mycoplasmas में पाया जाता में कोशिका अनुसंधान प्रयोगशालाओं के रूप में contaminants संस्कृति है . Mycoplasmal cell culture contamination occurs due to contamination from individuals or contaminated cell culture medium ingredients. सेल Mycoplasmal संस्कृति संदूषण के कारण होता है या दूषित संदूषण व्यक्तियों से संस्कृति के माध्यम सेल तत्व है .

Mycoplasma Detection Methods Mycoplasma पहचान विधि

Mycoplasma cells are usually smaller than 1 µm and therefore quite difficult to detect with conventional microscopy methods. Mycoplasma कोशिकाओं आमतौर से छोटी μ 1 मीटर है और इसलिए का पता लगाने के लिए काफी मुश्किल माइक्रोस्कोपी के साथ पारंपरिक तरीकों में है . Detection techniques include: पहचान तकनीकों में शामिल हैं :

• PCR पीसीआर
• Real-time PCR भू समय पीसीआर
• Plating on sensitive Agar अगर संवेदनशील पर कलई
• DNA stains including DAPI or or Hoescht Stain DAPI सहित या डीएनए के धब्बे या Hoescht Stain

Hoechst Stain Mycoplasma Contamination Detection Protocol Hoechst Stain Mycoplasma कंटैमिनेशन पहचान प्रोटोकॉल

A Hoechst (Sigma, catalog #:H6024) staining method for Mycoplasma: एक Hoechst ( सिग्मा , catalog # : H6024 ) staining विधि Mycoplasma के लिए :

1. For Adherent cells, place a sterile cover glass in petri dish. Adherent कोशिकाओं के लिए , एक गिलास में कवर बाँझ पेट्री डिश है . Add 2-3 drops of cell suspension in the middle of coverglass (depending on the growth rate of your cells). सेल जोड़ें 2-3 गिराने के निलंबन के मध्य में coverglass ( विकास दर के आधार पर आपके कोशिकाओं ) .
2. Then carefully add 2-3 ml of medium without disturbing the cells. तब सावधानी से जोड़ने के माध्यम से मिली 2-3 की कोशिकाओं को बिना परेशान है . Grow the cells until they are 50 -70% confluent. बढ़ना कोशिकाओं तक वे 50 -70 % संगामी .

Fixing Cells: फिक्सिंग कोशिकाओं :

1. Prepare cell Fixative which is a mix fo 3:1 Methanol : glacial acetic acid (M:AA). सेल की तैयारी का मिश्रण है जो Fixative मेथनॉल के लिए 3:1 : बर्फ एसिटिक एसिड ( एम : AA ) . Make sure you prepare this fresh before use. सुनिश्चित कर लें कि आप इस नए सिरे से तैयार करने से पहले प्रयोग में है .
2. Discard medium from growing cells. त्यागें कोशिकाओं के माध्यम से बढ़ रही है . Add 2 ml of the Methanol : glacial acetic acid M:AA solution dropwise onto the side of the plate (not directly onto the cells). 2 मिली मेथनॉल के जोड़ें : बर्फ एसिटिक एसिड एम : dropwise पर AA समाधान की ओर प्लेट ( कोशिकाओं पर सीधे नहीं है ) . Swirl the plate and discard solution. Swirl की प्लेट और त्यागने के समाधान है .
3. Add 2 ml of M:AA, swirl and leave on for 2-3 minutes at room temperature. 2 एम मिली में जोड़ें : AA , swirl और 2-3 मिनट के लिए छुट्टी पर कमरे के तापमान पर है .
4. Discard M: AA solution and rinse with water त्यागें एम : AA समाधान और पानी के साथ खंगालना
5. Leave to air dry (you can keep the plate until you are ready to stain) Hoecht stain (cat# 33258 from Sigma) stock concentration = 0.1 mg/ml in water You can filter sterilize at this stage using a 0.2uM filter Wrap container in aluminium foil Store at 4 oC Working solution Prepare fresh each time as necessary Make 1:1000 dilution (0.1 µg/ml) of stock in water सूखी हवा को छोड़ दें ( आप कर सकते हैं जब तक आप प्लेट रखने के लिए तैयार हैं stain ) Hoecht stain ( 33258 # बिल्ली से सिग्मा ) स्टॉक एकाग्रता = 0,1 मिलीग्राम / मिलीलीटर पानी में sterilize फ़िल्टर कर सकते हैं आप इस स्तर पर फिल्टर 0.2uM का उपयोग कर एक कंटेनर में लपेटें एल्युमिनियम पर्ण स्टोर में कार्यकारी 4 oC हर बार नए सिरे से तैयार समाधान के रूप में आवश्यक बनाएँ 1:1000 तनुकरण ( 0,1 μ g / मिली ) के स्टॉक में पानी

Staining Cells: Staining कोशिकाओं :

1. Add enough Hoechst stain to cover the entire cover slip (use 1-2ml for a small Petri dish). जोड़ें पर्याप्त Hoechst stain को कवर करने के लिए पूरी कवर पर्ची ( 1 2ml उपयोग के लिए एक छोटा पेट्री डिश ) .
2. Leave the stain on for 45 minutes - 1 hour (in the dark). इस पर छोड़ stain के लिए 45 मिनट का समय -- 1 घंटे ( अंधेरे में है ) .
3. Rinse well with water. पानी से धुली है .
4. Mount on a microscope slide (mountant mix: 22 mM Citric Acid; 55.6 mM disodium phosphate; 50% glycerol, pH mix to 5.5) place a drop or two on cover slip (cells up) and place cover slip (cells down) on slide. पर्वत पर एक सूक्ष्मदर्शी स्लाइड ( mountant मिश्रण : 22 मिमी साइट्रिक एसिड , 55,6 मिमी disodium फॉस्फेट ; 50 % ग्लिसरॉल , पीएच मिश्रण से 5.5 ) के स्थान पर एक या दो बूंद कवर पर्ची ( कोशिकाओं तक ) और स्थान पर कवर पर्ची ( कोशिकाओं के नीचे ) पर स्लाइड .
5. Visualise under fluorescence microscope कल्पना के तहत प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी

Note: store Hoechst stain at 4oC at least, or aliquot into the freezer for long-term storage. नोट : Hoechst stain स्टोर में कम से कम 4oC , या अशेष भाजक फ्रीजर में लंबी अवधि के भंडारण के लिए .