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Molecular Biology - Science Quotes आण्विक जीव -- विज्ञान उद्धरण

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Cell Lysis Method Protocol सेल Lysis तरीका प्रोटोकॉल

Information on the cell lysis technique here. सूचना तकनीक पर सेल lysis यहाँ है .

Cell Lysis Methods Table of Contents सेल Lysis तरीके की सामग्री तालिका

What is Cell Lysis? सेल Lysis क्या है ?

Cell lysis or cellular disruption is a cell biology method for the release of biological molecules including organelles, proteins, DNA, RNA and lipids from inside a cell. सेल lysis या सेलुलर विघटन है कोशिका जीव विज्ञान के लिए जारी की जैविक विधि सहित organelles अणु , प्रोटीन , डीएनए , शाही सेना और lipids से एक कोशिका के अंदर .

सेल lysis

Background on Cell Lysis? पृष्ठभूमि पर सेल Lysis ?

For most cells, mild osmosis is usually enough to lyze the cells. सबसे कोशिकाओं के लिए , हल्के osmosis करने के लिए पर्याप्त होता है lyze कोशिकाओं . This is done by lowering the ionic strength of the surrounding solution, causing the cells to swell and burst releasing their contents. यह द्वारा किया जाता है आयोनी ताकत घटाने के आसपास के समाधान , जिससे कोशिकाओं को अपनी सामग्री सूजना और फटना जारी है .

Mild surfactans are often used in addition to mechanical lysis methods. हल्के का इस्तेमाल किया जाता surfactans के अलावा lysis यांत्रिक तरीकों में है .

Mechanical or Physical Lysis Methods include: यांत्रिक या शारीरिक Lysis तरीके में शामिल हैं :

mechanical agitation यांत्रिक आंदोलन
pressure दबाव
sonication
nitrogen bomb or nitrogen burst lysis method नाइट्रोजन बम का फटना या नाइट्रोजन lysis विधि
ultrasound with small probes अल्ट्रासाउंड के साथ छोटे जांच

These steps are conducted to ensure complete dissociate of the cell and its cellular components including breakdown of organellar and nuclear membranes. इन चरणों का आयोजन कर रहे हैं यह सुनिश्चित करने के लिए पूरी तरह अलग प्रकोष्ठ के घटकों सहित सेलुलर और उसके टूटने के organellar और परमाणु झिल्लियों .

Due to the high costs of growing cells, usually only a small amount of cellular material is available. उच्च लागत की वजह से कोशिकाओं की बढ़ती है , आमतौर पर केवल एक छोटी मात्रा में सेलुलर सामग्री उपलब्ध है . It is thus necessary to be efficient when lysing cells to ensure the maximum of usable material is obtained. इस प्रकार यह आवश्यक हो तो कुशल lysing कोशिकाओं के अधिकतम उपयोग सुनिश्चित करने के लिए सामग्री प्राप्त की है . Often, several methods are used in combination to ensure almost complete lysis. अक्सर कई तरीके हैं संयोजन में उपयोग सुनिश्चित करने के लिए लगभग पूरा lysis .

Applications of Cell Lysis सेल के अनुप्रयोगों को Lysis

Cell lysis is vital for the extraction of DNA, RNA and Proteins from cells. सेल lysis के लिए महत्वपूर्ण है निष्कर्षण के डीएनए , शाही सेना और कोशिकाओं से प्रोटीन है . Therefore, it is needed in most cell biology techniques and even molecular biology techniques. इसलिए , यह आवश्यक है तकनीक में सबसे कोशिका जीव विज्ञान और यहाँ तक कि आण्विक जीव विज्ञान तकनीक है .

Limitations of Cell Lysis सेल की सीमाओं Lysis

Cell lysis is limited in its usage as it requires the cell membrane to be pierced and cell contents to be released. सेल तक सीमित है lysis में अपने प्रकोष्ठ के उपयोग की आवश्यकता होती है क्योंकि यह झिल्ली को बेधा और सेल सामग्री के लिए जारी की है . These lysed cells die and cannot be cultured or grown again. इन कोशिकाओं के मरने lysed और संवर्धित नहीं किया जा सकता है या फिर से वृद्धि हुई है .

Factors to Consider for Cell Lysis घटक पर विचार करने के लिए सेल Lysis

There are many factors to consider which cell lysis method to use or how to conduct it. ऐसे कई कारकों पर विचार करने का जो तरीका lysis कोशिका का उपयोग करने के लिए या आचरण को कैसे है .

Volume of Cells मात्रा की कोशिकाओं

The amount of cells to lyse is an important parameter in cell lysis. यह राशि की कोशिकाओं को lyse का एक महत्वपूर्ण परिमाण में सेल lysis . If you only have a very यदि आप के पास केवल एक बहुत

If only a few microliters of sample are available, care must be taken to minimize loss and to avoid cross-contamination. यदि कुछ ही microliters के नमूने उपलब्ध हैं , देखभाल से लिया जाना चाहिए और कम से कम करने के नुकसान से बचने के लिए पार से जारी है .

Disruption of cells, when hundreds or even thousands of liters of material are being processed in a production environment, presents a different challenge. कोशिकाओं का विघटन , जब सैकड़ों या हजारों लीटर की सामग्री का उत्पादन किया जा रहा है संसाधित वातावरण में , एक अलग प्रस्तुत चुनौती है . Throughput, efficiency, and reproducibility are key factors. Throughput , दक्षता , और reproducibility मुख्य कारक हैं .

Number of Cell Samples to Lyze सेल की संख्या नमूनों को Lyze

Often there are many cell samples to lyze. अक्सर कई सेल के नमूनों को lyze . There are many issues to consider when doing this including cross contamination of samples, the speed of processing, and equipment cleaning after each sample is lysed. ऐसे कई मुद्दों पर विचार करने के लिए जब इस काम को करने सहित पार संदूषण के नमूनों , की गति के प्रसंस्करण , सफाई और उपकरणों के बाद प्रत्येक lysed नमूना है .

Difficulty of Cells to Lyze कोशिकाओं की कठिनाई को Lyze

Some cells are quite difficult to lyse. कुछ कोशिकाओं हैं lyse करने के लिए काफी मुश्किल है . As the lysis difficulty increases, a greater lysis force or higher ionic strength of buffers is required to efficiently disrupt the cells. जैसा कि lysis परेशानी बढ़ जाती है , एक या अधिक बल lysis आयोनी उच्च शक्ति की आवश्यकता है buffers कोशिकाओं को कुशलतापूर्वक बाधित है .

For more difficult lysis of cell samples such as yeast samples, there is a steep increase in the processing power, time and cost required. अधिक जानकारी के लिए मुश्किल lysis सेल के नमूने के रूप में इस तरह के नमूनों खमीर , खड़ी है शक्ति में वृद्धि की प्रक्रिया , समय और लागत आवश्यक है .

For the most difficult samples to lyze, such as bacterial spores, these require mechanical forces combined with chemical or enzymatic efforts. नमूनों के लिए सबसे कठिन lyze करने के लिए , जैसे बैक्टीरिया स्पोरों , यांत्रिक बल की आवश्यकता होती इन संयुक्त प्रयासों के साथ रासायनिक या एंजाइमी . The problem is even with multiple and harsher methods, usually one achieves limited disruption efficiencies. समस्या यह है और कई harsher विधियों के साथ भी , आमतौर पर एक achieves विघटन क्षमता सीमित है .

Efficiency of Cell Lysis सेल की क्षमता Lysis

Depending on what part of the cell, organelle or fraction you need to isolate, over-lysis may affect your desired product. क्या भाग के आधार पर सेल , organelle की आवश्यकता है या आप को अलग अंश है , जरूरत से ज्यादा प्रभावित कर सकता है lysis अपने वांछित उत्पाद है .

If subcellular fractionation is used, it is more important to have a delicate lysis to achieve an intact subcellular organelle components. यदि subcellular fractionation का प्रयोग किया जाता है , यह ज्यादा महत्वपूर्ण है नाजुक lysis हासिल करने के लिए एक अक्षुण्ण subcellular organelle घटक हैं . Obviously, you will achieve a lower efficiency of lysis and thus will require more cells. जाहिर है , आप कम दक्षता हासिल की lysis की आवश्यकता होगी और इस प्रकार की कोशिकाओं में अधिक है . To scale these cell lysis processesses, the time to disrupt the cells and the reproducibility of the method become more important factors. सेल lysis processesses पैमाने पर इन करने के लिए , समय बाधित करने की कोशिकाओं की विधि और reproducibility अधिक महत्वपूर्ण कारक बन गया है .

Cell Lysis vs Molecule to be Isolated सेल Lysis बनाम अणु को आइसोलेटेड

It is very important to cater the lysis method to the protein you need isolated. यह बहुत महत्वपूर्ण है lysis की विधि को पूरा करने के लिए आपको पृथक प्रोटीन है . If it is a nuclear protein, care is required to lyse the cell first and then isolate the nuclear membrane. यदि यह एक परमाणु प्रोटीन , देखभाल की जरूरत है lyse सेल के पहले और उसके बाद अलग परमाणु झिल्ली . After the nuclear membrane is isolated, then one may lyse the nuclear membrane and release the molecule of interest. झिल्ली के बाद परमाणु पृथक है , फिर से एक हो सकता है lyse परमाणु झिल्ली को प्राप्त होते हैं और ब्याज की अणु है . This methodology decreases the contamination of molecules that are from other cellular compartments/organelles. यह पद्धति की घटती जाती है संदूषण के अणुओं से कर रहे हैं कि अन्य डिब्बों सेलुलर / organelles .

Furthermore, depending on the molecule care must be taken to use or not use certain lysis solutions or methods. इसके अलावा , अणु की देखभाल के आधार पर लिया जाना चाहिए या नहीं उपयोग का उपयोग करने के लिए कुछ समाधान lysis या तरीकों में है . For example, if you are trying to isolate a phospho-protein that is sensitive to phosphatases, it is not a good idea to lyse and expose the phospho-protein to thousands of proteases and phosphatase enzymes. उदाहरण के लिए , यदि आप एक अलग करने की कोशिश कर रहे हैं phospho प्रोटीन के प्रति संवेदनशील है कि phosphatases , तो यह एक अच्छा विचार नहीं है और lyse पर्दाफाश करने के लिए प्रोटीन के phospho करने के लिए हजारों proteases और एंजाइमों phosphatase . Protecting your molecule from harsh or enzymatic conditions is important. अणु या अपनी सुरक्षा से कठोर परिस्थितियों एंजाइमी महत्वपूर्ण है . The temperature (low temperature of lysis), and usage of inhibitory molecules (such as protease and phosphatase inhibitors) is important in these lysis cases. इस तापमान ( कम तापमान के lysis ) , और उपयोग के अणुओं inhibitory ( जैसे protease और phosphatase inhibitors ) lysis इन मामलों में महत्वपूर्ण है .