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SUBCULTURING CELLS SUBCULTURING कोशिकाओं

  • Get DMEM media 4C; Trypsin-20C; BSA-20C; 4C मीडिया प्राप्त DMEM ; Trypsin - 20C ; BSA - 20C ;
  • Put in 36mL of DMEM into conical tube plastic 36mL में डाल के DMEM शंक्वाकार में प्लास्टिक की नली
  • Add 4mL of BSA media to 36mL DMEM; जोड़ें 4mL के BSA मीडिया को 36mL DMEM ;
  • Get syringe and filter; सीरिंज प्राप्त करें और फिल्टर ;
  • Suck up media with syringe.  Add filter. चूसना तक मीडिया के साथ सीरिंज . फ़िल्टर जोड़ें .
  • Push out media through filter on syringe. पुश से बाहर मीडिया के माध्यम से फिल्टर पर सीरिंज .
  • Repeat twice to get all of volume. दो बार दोहराएँ प्राप्त करने के लिए सभी मात्रा .
  • Put into new plastic tube conical. प्लास्टिक की नली डाल में नई शंक्वाकार .
  • Remove old media by dumping into beaker; DO NOT USE ASPIRATOR (get contamination!!) पुराने निकालें मीडिया द्वारा डंपिंग में बीकर ; वातशोषक का प्रयोग न करें ( प्राप्त संदूषण ! ! )
  • Add 3mL typsin to culture.  Trypsin with pull cells off the culture container. 3mL typsin संस्कृति को जोड़ें . Trypsin खींचने की कोशिकाओं के साथ बंद कंटेनर की संस्कृति है .
  • Put container into incubator.  Wait 2 min; Take out;  look into microscope. incubator कंटेनर में रखें . 2 मिनट प्रतीक्षा करें ; निकाल लें ; विचार सूक्ष्मदर्शी .
  • Try to get less clumps.  More individual cells. कम clumps प्राप्त करने की कोशिश करें . अधिक व्यक्तिगत कोशिकाओं .
  • Remove most of trypsin by dumping into beaker. निकालें अधिकांश trypsin द्वारा डंपिंग में बीकर .
  • Put  back into incubator. पीठ में डाल incubator . Check frequently. अक्सर जाँच करें .
  • Slap container on sides to check bottom for less clumps; look into microscope. कंटेनर पर तमाचा पक्षों को रोकने के लिए नीचे के लिए कम clumps ; विचार सूक्ष्मदर्शी .
  • When see many individual cells floating along; Great! जब देखने के कई व्यक्तिगत कोशिकाओं के साथ चल ; महान है !
  • Add media to larger container; 1:5/ 1:3 dilution (3-5 containers larger). मीडिया को बड़े जोड़ें कंटेनर ; 1:5 / 1:3 के कमजोर पड़ने ( 3-5 बड़े कंटेनर ) .
  • Add 10mL to (T75)large container, 5mL to (T25)small container. 10mL को जोड़ें ( T75 ) बड़े कंटेनर , 5mL करने के लिए ( T25 ) छोटे कंटेनर .
  • Suck out Most (5mL of cells from T25). चूसना से अधिकांश ( 5mL की कोशिकाओं से T25 ) . Add to T75. T75 में जोड़ें .
  • Leave some cells in small container.  Add media to small container.  Check in microscope for single cells;  Incubate in 37C incubator. कुछ छोटे से कंटेनर में कोशिकाओं को छोड़ दें . जोड़ें करने के लिए मीडिया के छोटे से कंटेनर . की जाँच के लिए एकल कोशिकाओं में सूक्ष्मदर्शी ; सेने में 37C incubator .
  • See other Cell-protocols at our Cell Biology and Cell Culture Protocol Directory . अन्य सेल के प्रोटोकॉल पर देखें हमारे सेल बायोलॉजी और संस्कृति सेल प्रोटोकॉल निर्देशिका है .

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