L'analyse occidentale de tache peut détecter une protéine spécifique dans un mélange de tout nombre de protéines tout en te fournissant des informations sur la taille de la protéine. Il peut faire ceci basé sur l'utilisation d'un anticorps monoclonal spécifique ou de l'anticorps polyclonal. Il n'importe pas si la protéine ait été synthétisée in vitro ou extraite à partir des cellules in vivo ou du vivo ex. Cette méthode dépend, cependant, de l'utilisation d'un anticorps de haute qualité dirigé contre une protéine désirée. Ainsi, vous devez pouvoir produire au moins une petite partie de la protéine à partir d'un fragment copié d'ADN ou avez épuré la protéine qui est alors injectée dans une souris ou un lapin pour produire d'un anticorps monoclonal ou d'un anticorps polyclonal respectivement. Vous emploierez cet anticorps comme sonde pour détecter la protéine d'intérêt.
Éponger occidental t'indique combien la protéine a accumulé en cellules. Si vous êtes intéressé par la cadence de la synthèse d'une protéine, la Radio-immunoprécipitation (DÉCHIRURE) peut être la meilleure analyse pour vous. En outre, si une protéine est dégradée rapidement, éponger occidental ne la détectera pas bien ; vous devrez utiliser (DÉCHIRURE). Voyez la section sur la DÉCHIRURE pour plus d'information, aussi bien qu'un diagramme comparatif utile qui illustre les différences entre ces deux techniques.
Remplissez SEULEMENT mémoire tampon courante jusqu'au bas des plaques de verre. (ceci empêche la fuite actuelle de l'appareil des fissures et des défauts)
Chargez le repère de protéine (également appelé l'échelle de protéine) (dans différentes ruelles en exécutant plusieurs gels pour différencier différents gels entre eux)
Exécution du gel de SDS-PAGE pour la tache occidentale
Le gel de passage à 100V à 110 V pour le fonctionnement rapide OU pour une meilleure résolution exécutent le gel à 35 - 40 mA (courant constant) afin d'obtenir les bandes pointues. Ceci prend 2 - 2 heures de 1/2 au passage.
Des bulles devraient être vues si l'appareil fonctionne bien.
Signez 5-10 minutes le transfert de l'échelle de protéine en bas.
Références
`Laemmli, R-U, fendage de † d'â des protéines structurales pendant l'assemblage de la tête du bactériophage T4. Nature 227, 680-685, (1970)
`Laemmli, R-U, fendage de † d'â des protéines structurales pendant l'assemblage de la tête du bactériophage T4. Nature 227, 680-685, (1970)
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