transfection de siRNA

protocole de transfection de siRNA

 protocole de transfection de siRNA : Transfect 6 plats bons

1. appliquez le premier traitement de siRNA quand les cellules sont 60% confluents (confluency de mesure avec le voltmètre) ; plaquez les cellules 1.5x10^6 le vendredi, transfect le mercredi. Pour chacun puits :

1. Diluez 2.5 ug de siRNA (20uM est approximativement 0.26ug/ul. UL 9.62 par bien d'un plat de 6 puits) avec des milieux de culture à un volume final d'UL 100. Utilisez les extrémités de pipette de barrière. Vous pouvez faire un mélange principal si tous les puits transfected avec le même siRNA. Faites ceci dans un tube en plastique stérilisé à l'autoclave stérile.
2. Ajoutez 12 l'UL RNAiFect (Qiagen - ou n'importe quel autre réactif de transfection d'ARN, voient le protocole du constructeur) par tube de mastermix de siRNA et mélangez doucement.
3. Incubez pendant 15 minutes à la température ambiante pour permettre la formation complexe entre le siRNA et les lipides.
4. Aspirez les medias des cellules et ajoutez les medias 900ul frais à chacun bien.
5. Ajoutez le mélange de siRNA (UL 112 par puits) goutte-à-goutte tandis que plat doucement de tourbillonnement.

• Appliquez le deuxième traitement de siRNA pendant 2 jours plus tard, après les étapes tracées les grandes lignes ci-dessus. La deuxième transfection ajoutera à l'expression de diminution du gène d'intérêt.

D'autres protocoles de siRNA

Voir également notre siRNA et page de RNAi