Bioinformatics, Protocoles, Protéine Proteomics d'ARN d'ADN
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L'aspect le plus triste de la vie est en ce moment que la science recueille la connaissance plus rapidement que la sagesse de rassemblements de société. ~Isaac Asimov, livre d'Isaac Asimov de la Science et de nature Quotations, 1988
Écrit et mis à jour mars 2008 par Moleculardude. Copyright 2007/2008.
Définition : SDS-PAGE est une abréviation pour l'électrophorèse de gel de polyacrylamide du sulfatedodécyliquede sodium ( SDS).
SDS-PAGE est une technique moléculaire de biologie employée pour séparer des protéines en conséquence par taille. SDS-PAGE peut également séparer des molécules d'ADN et d'ARN.
Dans ce qui est probablement la technique la plus puissante pour résoudre des mélanges de protéine, des protéines sont exposées au détergent ionique SDS (le dodecylsulfate de sodium) avant et pendant l'électrophorèse de gel. Le SDS dénature des protéines, faisant dissocier les protéines multimric dans leurs sous-unités, et toutes les chaînes de polypeptide sont obligatoires dans des conformations étendus avec les taux semblables de charge:mass. Le traitement de SDS élimine donc les effets des différences dans la forme de sorte que la portée, qui reflète la masse, soit la cause déterminante unique de la cadence de transfert des protéines dans l'électrophorèse de polyacrylamide de SDS.
Même des chaînes qui diffèrent dans le poids moléculaire par moins de 10 pour cent peuvent être séparées par cette technique. D'ailleurs, le poids moléculaire d'une protéine peut être déterminé par comparaison à une échelle de protéine ou à l'échelle de poids moléculaire qui sont exécutées sur le même gel.
(voir le schéma 1)
Le schéma 1. Ce gel d'acrylamide est employé pour séparer des protéines. Les taches colorées sont des repères de standard-taille, qui sont prestained. Ceci est habituellement employé pour faire une tache occidentale. Les protéines sont transférées à une membrane et puis détectées avec de l'anticorps à une protéine spécifique.
SDS-PAGE, électrophorèse de gel de polyacrylamide de sulfate dodécylique de sodium, est une technique employée dans la biochimie, la génétique et la biologie moléculaire pour séparer des protéines selon leur mobilité électrophorétique (une fonction de longueur de chaîne de polypeptide ou de poids moléculaire aussi bien que le pliage de protéine d'ordre plus supérieur, les modifications de posttranslational et d'autres facteurs).
La solution des protéines à analyser est d'abord mélangée à SDS, un détergent anionique qui dénature secondaire et non–les structures–tertiaires jointes par bisulfure, et applique une charge négative à chaque protéine proportionnellement à sa masse. Sans SDS, les différentes protéines avec les poids moléculaires semblables passeraient différent en raison des différences dans le taux de masse de charge, car chaque protéine a un détail de point isoélectrique et de poids moléculaire à sa structure primaire. Ceci est connu en tant que PAGE indigène. Ajouter le SDS résout ce problème, car il lie à et dévoile la protéine, donnant une charge négative uniforme proche sur la longueur du polypeptide.
Grippage de SDS en un rapport approximativement de 1.4 g SDS par protéine de 1.0 g (bien que les taux obligatoires peuvent changer 1.1-2.2 de la protéine de g SDS/g), donnant un taux approximativement uniforme de mass:charge pour la plupart des protéines, de sorte qu'on puisse assumer que la distance du transfert par le gel soit directement liée seulement à la taille de la protéine. Un colorant de cheminement peut être ajouté à la solution de protéine pour permettre à l'expérimentateur de dépister le progrès de la solution de protéine par le gel pendant le passage électrophorétique.
L'électrophorèse est une technique pour séparer, ou les molécules de résolution dans un mélange sous l'influence d'un champ électrique appliqué, également appelée la mobilité électrophorétique. Les molécules dissoutes dans un mouvement de champ électrique, ou passent à une vitesse déterminée par leur taux de charge:mass. Par exemple si deux ont la même masse et forment, celle avec la charge nette plus grande se déplacera plus rapidement vers une électrode. La séparation de petites molécules, telles que des acides aminés et des nucléotides, est l'une des nombreuses utilisations de l'électrophorèse. Dans ce cas-ci, une petite baisse d'échantillon est déposée sur une bande de papier filtre ou de tout autre substrat poreux, qui est imbibé de une solution de conduite. Quand un champ électrique est appliqué comme extrémités de la bande, les petites molécules se sont dissoutes dans le mouvement de conduite de solution le long de la bande à une cadence correspondant à leur importance de leur charge.
Puisque beaucoup de protéines ou acides nucléiques qui diffèrent dans la taille et la forme ont des taux presque identiques de charge:mass, l'électrophorèse de ces macromolécules en solution a comme conséquence peu ou pas de séparation des molécules de différentes longueurs. Cependant, la séparation réussie des protéines et des acides nucléiques peut être accomplie par l'électrophorèse dans divers gels (suspensions semisolid dans l'eau) plutôt que dans une solution liquide. La séparation électrophorétique des protéines le plus généralement est exécutée en gels de polyacrylamide. Ces gels sont moulés entre une paire de glaces en polymérisant une solution des monomères d'acrylamide dans des polyacrylamidechains et simultanément l'édition absolue les chaînes dans une matrice semisolid. La taille de pore d'un gel peut être changée en ajustant la concentration du polyacrylamide et du réactif de réticulation.
Quand un mélange des protéines est appliqué à un gel et à un courant électrique appliqués, de plus petites protéines passent plus rapidement des protéines que plus grandes par le gel. La vitesse le déplacement est influencée par la taille’de pore du gel s et la force du champ électrique. Les pores dans un gel de polyacrylamide fortement réticulé sont tout à fait petits. Un tel gel pourrait résoudre de petits protéines et peptides, mais les grandes protéines ne pourraient pas se déplacer par lui.
Comme mentionné, les protéines sont mélangées au SDS un détergent anionique que les grippages aux protéines et dénature leur structure tertiaire secondaire et non-bisulfure-jointe avec l'ajout de la chaleur. Le SDS applique également une charge électrique négative uniforme à chaque protéine proportionnellement à sa masse.
Si le SDS n'était pas utilisé dans la séparation, les protéines avec les poids moléculaires semblables passeraient différemment dans le gel dû aux différences dans leur masse pour charger des taux. Car des protéines sont séparées en utilisant le courant électrique et étudient à fond taille de la matrice de gel, les différences dans les frais (en plus de la masse) joueraient un rôle dans la séparation.
Un colorant de cheminement peut être ajouté à la solution de protéine pour permettre à l'expérimentateur de dépister le progrès de la solution de protéine par le gel pendant le passage électrophorétique.
Dissappearing d'Immidiate des bandes sur l'ADN
ordonnançant des gels après que l'argent bonjour
le souillure de mon ami fasse face à un problème
avec la souillure argentée de l'ordonnancement gélifie dans ce qui
sont les bandes témoin d'ADN avec les bandes du repère...
Deux bandes de passer étroitement sur SDS-PAGE
gélifient
bonjour. Je pas maintenant
pourquoi mais je vois deux bandes étroites de passer sur le gel
sds-page. pourquoi deux bandes très étroitement ?
Habituellement i aucun obtiennent deux bandes, habituellement
une bande...
Ébullition de SDS des échantillons des
méthodes alternatives ?
je déteste bouillir mes
échantillons pendant que j'obtiens des agrégats des protéines
fonctionnant près du dessus des gels également si vous utilisez
dyes/probes spécifique etc.. que vous voulez...
Le rewet I la membrane en méthanol... est ab
allé ?
Sur une exposition durant la nuit essayant
de détecter une basse protéine d'abondance, ma membrane desséchée
autour des bords ainsi du rewet de I c'en méthanol... est mon non de
ab...
Le SDS PAGINENT l'évaluation de
concentration en protéine
satisfont l'aide cette
personne : J'ai un problème avec ma PAGE de SDS. J'estime
la concentration en protéine par des dilutions de l'utilisation deux
de BCA method.I de la protéine pour...
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Démystifier Le Vidéo de SDS-Page
Un vidéo d'instruction a visé à enseigner le processus de SDS-PAGE aux étudiants d'université avec les vues biochimiques de base www.sdspage.net du mattbrewbaker d'utilisateur de Youtube.
Ajouté par : kiki06
Étiquettes : électrophorèse de gel de
SDS-PAGE
Date : 2008-04-28
Vidéo d'Électrophorèse de Gel de SDS-PAGE
Gelelectrophoresis de dodecylsulphate de sodium d'électrophorèse de gel de SDS-PAGE de l'utilisateur pr6655321 de Youtube
Ajouté par : kiki06
Étiquettes : méthode de protocole
d'électrophorèse de gel de SDS-PAGE
Date : 2008-04-28
Retirer Empilant Le Vidéo du Gel SDS-PAGE
Retirer Empilant Le Gel SDS-PAGE
Ajouté par : kiki06
Étiquettes : retirer d'empilement
d'électrophorèse de gel de SDS-PAGE
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Vidéo de Résolution Versant de Gel de
SDS-PAGE
Un vidéo sur verser le gel de résolution pour SDS-PAGE. De l'utilisateur be115 de Youtube.
Ajouté par : timjum
Étiquettes : méthode versante de résolution de
protoocl d'électrophorèse de gel de SDS-PAGE
Date : 2008-04-28
Vidéo de Résolution du Gel SDS de SDS-PAGE
Gel de Résolution SDS de SDS-PAGE. Ajouter le SDS sur le gel de résolution. De l'utilisateur be115 de Youtube.
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Étiquettes : méthode de résolution de
protocole d'électrophorèse de gel de SDS-PAGE
Date : 2008-04-28
Vidéo 3 Protéiforme Se réunissant de Mini
Gels de SDS-PAGE
Un vidéo montrant les étapes pour assembler le minigel 3 protéiforme. De l'utilisateur be115 de youtube.
Ajouté par : timjum
Étiquettes : minigel protéiforme de SDS-PAGE de
gel d'assemblage
Date : 2008-04-28
Vidéo de Faute de Temps d'Électrophorèse
De Gel de SDS-PAGE
Faute de Temps d'Électrophorèse de Gel de SDS-PAGE. Exécution d'un gel de SDS-PAGE avec le temps.
Ajouté par : timjum
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de gel de SDS-PAGE
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Vidéo de Gel du Chargement SDS-PAGE
Gel du Chargement SDS-PAGE
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Étiquettes : échantillon d'électrophorèse de
gel de SDS-PAGE de chargement
Date : 2008-04-28
l'Électrophorèse Se réunissante de
SDS-PAGE Plaque Le Vidéo
Plats Se réunissants d'Électrophorèse de SDS-PAGE. De l'utilisateur be115 de youtube.
Ajouté par : oBWhat
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protocole d'électrophorèse de gel de SDS-PAGE
Date : 2008-04-28
Exécution d'un vidéo de gel de SDS-PAGE
Exécution d'un utilisateur be115 de SDS-PAGE GelFrom Youtube.
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Étiquettes : méthode de protocole
d'électrophorèse de gel de SDS-PAGE
Date : 2008-04-27
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