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Des gels d'ARN ont été employés pendant des décennies pour séparer dehors et pour évaluer qualitativement la qualité de l'ARN d'isolement des échantillons. Si vous n'êtes pas sûr quel ARN est contrôle :
L'ACOUSTIQUE
écoutent une explication détaillée d'ARN ! et voir le notre article d'encyclopédie d'ARN.
Après isolement des échantillons d'ARN, la qualité de la préparation d'isolement d'ARN est habituellement évaluée par l'électrophorèse sur un gel de dénaturisation d'agarose. Bien que les résultats soient principalement qualitatifs, vous pouvez obtenir quelques informations sur le rendement de l'ARN aussi bien.
Dénaturant des gels sont utilisés parce que l'ARN tend à se plier sur lui-même et à former la structure secondaire étendue et stable par l'intermédiaire de l'appareillement de base intramoléculaire. Cette structure secondaire de l'ARN l'empêche d'être executé principalement selon sa taille.
Assurez-vous que vous incluez une commande positive d'ARN sur le gel, dans le cas que vous obtenez des résultats peu communs que vous pouvez alors déterminer si le problème était avec le gel ou était un problème avec l'ARN vous analysez. Vous pouvez également utiliser des repères de poids moléculaire d'ARN, un échantillon d'ARN connu pour être intact, ou tous les deux, peuvent être utilisés à cette fin.
Des gels d'ARN sont visualisés avec du bromure d'éthidium souillant pendant que le bromure d'éthidium intercale entre la structure secondaire des molécules d'ARN et permet à l'ARN d'être vu sous la lumière UV.
L'ARN est séparé dehors par l'électrophorèse de gel (habituellement électrophorèse de gel d'agarose). Après exécution d'un gel d'ARN vous pouvez conduire une tache nordique avec le transfert ultérieur à la membrane, à l'hybridation avec la sonde, et finalement à la détection. Ou simplement (et beaucoup plus rapide), tache pour l'ARN utilisant le bromure d'éthidium ou SYBR (ou colorant semblable - meilleur en tant que lui est non-toxique et plus sûr).
Car il est beaucoup plus pénible terminer les taches nordiques que des gels d'ARN et l'ACP en temps réel, elles ne sont pas utilisées autant que des gels d'ARN.
L'électrophorèse de gel d'ARN et ses variations sont utilisées dans la recherche de biologie moléculaire :
Les inconvénients d'utiliser l'électrophorèse de gel d'ARN inclut :
Les avantages des gels d'ARN incluent :
Pour vérifier l'intégrité de votre ARN vous devriez faire une analyse « de tache nordique ». Afin d'accomplir ceci vous devez exécuter un gel de dénaturisation.
Pour des Mini-gels aux Midi-gels de l'utilisation d'ARN : Faites 50 mL-100mL
Pour des Méga-gels faites 400 ml.
Pour le gel 100mL (le plus généralement exécuté) vous devez ajouter 1g de l'agarose pour faire la solution d'agarose de 1%.
| Pour préparer : | 500mls | 750 mls | 1.5 litre |
mémoire tampon de 1X E (50X) - ci-dessous |
10 ml | 15 ml | 30 ml |
| formaldéhyde de 0.66M (1/19 du vol.) | 26.3 ml | 39.5 ml | 79 ml |
Ajoutez ce qui suit :
Ajoutez :
Exécutez toujours un gel d'agarose de votre ARN pour évaluer la qualité. Comptent non seulement seulement les résultats UV de spectrophotométrie.
* Utilisez l'eau traitée par DEPC et la verrerie cuite au four pour toutes les étapes. Les mémoires tampons doivent être RNase librement ou utiliser l'eau épurée par Milipore si vous êtes dans une précipitation. La RNase est partout ! Portez les gants, la verrerie cuite au four d'utilisation seulement, ou le plastique vierge. Festin de DePC votre eau, mémoires tampons (excepté Tris). Faites attention très.
Si vous avez actuel une méthode préférée pour exécuter l'ARN, continuez à l'utiliser.
Discutez et problème ou questions de poteau au sujet des gels d'ARN dans le forum de protocoles d'ARN.
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