Protocoles bactériophages de manipulation de Lamda

Déplacement des 5 ' - des groupes de phosphate des terminus internes des bras du bactériophage {lambda} est employés pour empêcher l'individu-ligature et pour supprimer le fond des bactériophages nonrecombinant pendant le clonage. - [Traitement lu de phosphatase alkaline de protocole d'ADN de vecteur de bactériophage lambda]

Le protocole décrit la teneur en ADN des stocks du bactériophage lambda peut être facilement et a rapidement estimé. - [Lu analysant la teneur en ADN des stocks et de Lysates de bactériophage lambda par protocole de Gel Electrophoresis]

Le protocole décrit comment (1) copier a copié des ordres encodant les trames de lecture ouvertes dans les plasmides portant des instigateurs de pL du bactériophage {lambda}, (2) pour optimaliser l'expression des protéines de cible dans les transformants portant ces recombinants, et (3) mesurez-vers le haut la production des protéines étrangères. - [Expression lue des gènes copiés dans Escherichia coli utilisant le protocole d'instigateur de bactériophage lambda pL]

Le formamide peut être employé au lieu de la protéinase K pour dissocier des protéines de manteau du bactériophage {lambda} du viral {lambda}. Le procédé est rapide et fonctionne bien avec les préparations de grande puissance du bactériophage {lambda}. - [Extraction lue de l'ADN de bactériophage lambda des cultures de grande puissance utilisant le protocole de formamide]

L'ADN mieux est isolée dans des particules de lambda de bactériophage en assimilant les protéines virales de manteau avec de la protéase puissante telle que la protéinase K, suivie de l'extraction avec du phénol : chloroforme. Ce procédé est facilement adapté pour l'usage avec les préparations sur une échelle plus petite du bactériophage lambda. - [Extraction lue de l'ADN de bactériophage lambda des cultures de grande puissance utilisant protéinase K et protocole de SDS]

Le protocole décrit comment identifier les cDNAs copiés encodant les protéines qui lient aux ordres spécifiques d'ADN. Les méthodes employées sont très semblables à ceux utilisées pour le criblage immunologique des bibliothèques d'expression sauf que les filtres de nitrocellulose portant les protéines immobilisées sont examinés avec de l'ADN 32P-labeled bicaténaire plutôt qu'avec des anticorps. - [Lu identifiant les protéines ADN-contraignantes dans le protocole de bibliothèques d'expression d'ambda de bactériophage]

Le protocole décrit une méthode de plat qui donne le rendement très bon pour le clonage. Inclut : Medias de T-TYN + Mg+2 ; Plats de T-TYN ; Agarose supérieure de T-TYN. - [Protocole lu de préparation d'ADN de lambda]

Protocole pour le criblage de lambda gt22a. Inclut : Medias de T-TYN + Mg+2 ; Plats de T-TYN ; Agarose supérieure de T-TYN ; Mémoire tampon bactériophage de dilution (APB) ; mémoire tampon de la kinase 10X (- DTT) ; ADN de thymus de veau. - [Protocole lu de criblage de lambda gt22a]

Des réactions pilotes de ligatures et d'empaquetage sont employées pour établir les quantités de bras genomic réduits en fragments d'ADN et de bactériophage {lambda} qui rapportent le nombre maximum des recombinants. Des réactions supplémentaires de ligature et d'empaquetage peuvent alors être installées pour rapporter une bibliothèque complète de l'ADN genomic. - [Ligature lue des bras de bactériophage lambda aux fragments du protocole étranger d'ADN de Genomic]

Les vecteurs du bactériophage {lambda} qui permettent la sélection génétique des bactériophages de recombinaison (par exemple, la série d'EMBL, {lambda} 2001, le TIRET {lambda}, {lambda} ZAP, et {lambda} gt10) peuvent être préparés pour copier par digestion simple par un ou plusieurs enzymes de restriction. - [Préparation lue de l'ADN de bactériophage lambda fendue avec un protocole simple d'enzymes de restriction]

Beaucoup de vecteurs de remplacement (par exemple, la série, {lambda} 2001 d'EMBL, et TIRET {lambda}) contiennent une série de sites de restriction, disposée dans des orientations opposées, à chaque extrémité du fragment central de stuffer. Digestion de ces vecteurs avec deux de restriction d'enzymes de rendements bras différents à gauche et à droite, un fragment de stuffer, et des segments courts des sites polycloning. Ceux-ci peuvent facilement être retirés des bras par la précipitation différentielle avec la chromatographie d'isopropanol ou de tourner-colonne. - [Préparation lue de l'ADN de bactériophage lambda fendue avec le protocole de deux enzymes de restriction]

Le protocole est employé pour purifier un peu d'ADN du bactériophage {lambda} qui conviennent pour l'usage comme substrats pour des enzymes de restriction et descripteurs pour des ARN polymérases d'ADN et. - [Analyse rapide lue des isolats de bactériophage lambda : Purification de l'ADN de lambda du plat Lysates]