Protocoles de Transfection de Phosphate de Calcium

Cette méthode de transfection de phosphate de calcium fonctionne mieux dans les lignes de cellules qui sont 1) fortement transformé et 2) l'adhérent (hela, U2OS, SAOS2, AdAH, NPC-KT et obtiennent de l'efficacité 20% à 100% de transfection selon la ligne de cellules). Des travaux bien pour des expériences passagères mais des précautions devraient être utilisés dans la conception et la traduction des expériences basées sur la discussion ci-dessous. Travaille en outre très bien pour produire des lignes stables de cellules. Cette méthode est tout à fait sensible à la quantité de plasmide d'entrée. - [Méthode Lue de Transfection de Phosphate de Calcium]

Ce protocole, est basé sur la méthode vénérable de Graham et de van der Eb (1973). Le procédé est employé principalement pour produire des lignes stables des cellules portant les copies chromosomiquement intégrées du transfected l'ADN. - [Transfection Calcium-phosphate-négocié lu des cellules avec de l'ADN à poids moléculaire élevé de Genomic]

Le phosphate de calcium forme un précipité insoluble avec de l'ADN, qui attache à la surface de cellules et est prise dans les cellules par endocytosis. Le protocole est facilement adapté pour l'usage avec d'autres types de cellules, adhérentes et nonadherent. Ce protocole est une version modifiée d'une méthode éditée par la Jordanie et autres (1996) qui les méthodes calcium-phosphate-basées rigoureusement optimalisées de transfection pour les cellules chinoises d'ovaire de hamster et la ligne 293 des cellules embryonnaires humaines de rein. - [Transfection Calcium-phosphate-négocié lu des cellules d'Eukaryotic avec plasmide DNAs]

Ce protocole décrit deux méthodes de transfection pour exprimer l'actine GFP-étiquetée dans des neurones primaires. La méthode du réactif DOTAP (diagnostic de lipide de Roche) produit actine-GFP-exprimer les neurones hippocampal qui survivent bien pendant de longues périodes dans la culture. La méthode de phosphate de calcium peut être utilisée aux neurones de transfect qui déjà s'étaient développés sur des lamelles in vitro. Des cellules de Transfected appropriées à la formation image peuvent être obtenues en cultures jusqu'à 15 jours in vitro. - [neurones lus de Hippocampal cultivés par Transfecting avec un plasmide d'Actine-GFP]

Ce protocole décrit le transfection de l'ADN de plasmide dans les neurones hippocampal primaires en utilisant le coprecipitation de DNA/calcium-phosphate (CaPO4). Le pH précis du support de transfection et la période d'incubation des cellules avec le coprécipité sont critiques pour le transfection reproductible et efficace. Une fois que ces paramètres sont optimalisés pour un plasmide donné, la méthode est facilement adaptée pour le transfection d'autres lignes établies de cellules. - [Transfection lu des neurones de Hippocampal avec de l'ADN de plasmide en utilisant phosphate de calcium Coprecipitation]