Le laser saisissent des protocoles de Microdissection

Protocole pour la 2-D électrophorèse de gel de polyacrylamide. Inclut : 50 mémoire tampon de lysis de ml IEF ; mémoire tampon courante de l'électrophorèse 10X (10 L) ; Actions d'acrylamide de 30% (1 litre) ; Séparation du gel d'acrylamide ; mémoire tampon I d'équilibration de 50 ml ; mémoire tampon II d'équilibration de 50 ml ; Mémoire tampon de transfert ; Préparation témoin ; Traitement de tissu ; Reswelling ; Préparez le gel d'acrylamide de gradient (9-18%) ; Transfert et ordonnancement des protéines. - [2-D protocole lu d'électrophorèse de gel de polyacrylamide]

Trois kits d'Ambion ont été employés pour doser les miRNAs spécifiques et pour détecter l'expression différentielle de miRNA dans diverses régions de cerveau de souris et types de cellules d'isolement par le microdissection de saisie de laser (LCM). Ces techniques peuvent être appliquées à étudier le miRNA dans d'autres espèces, tissus, et types de cellules. Inclut : Obtenez les échantillons de Microdissected de saisie de laser ; Isolez le miRNA des échantillons de LCM ; Dosez le miRNA par qRT-ACP. - [Lu détectez et dosez MicroRNA dans des échantillons de Microdissection de saisie de laser]

Après fixation, des sections congelées immunostained dans des conditions RNase-libres utilisant une technique en trois étapes rapide de streptavidin-biotine suivie de déshydratation. Les sections immunostained sont prêtes pour LCM. Inclut : Développement d'Immuno-LCM. - [Protocole lu de Microdissection de saisie Immuno-Laser]

Protocole pour Immunoblot. Inclut : Souillure et saisie Microdissection de laser ; Séparation de protéine par l'électrophorèse de gel de polyacrylamide ; Transfert électrophorétique à une membrane (nylon, PVDF ou nitrocellulose) ; Incubations primaires et secondaires d'anticorps ; Visualisation. - [Protocole lu d'Immunoblot]

Les techniques utiles pour éviter l'interruption de la structure de tissu dans l'analyse de l'expression de gène sont LCM et LDM. Tandis qu'elles exigent les microscopes et les systèmes spécialisés, elles sont semblables dans celle frais-coupent les sections gelées de tissu peuvent microdissected utilisant une tache histologique générale (comme H&E) ou par la souillure avec des anticorps fluorescent conjugués. Le système de LCM par Arcturus implique… - [Souillure immunofluorescente lue pour le laser Microdissection du protocole individuel de cellules]

LCM utilise un laser infrarouge intégré dans un microscope standard. Un chapeau transparent est fixé à une membrane transparente thermoplastique qui se trouve directement sur la surface d'une section par habitude préparée de tissu sur une plaque en verre. L'investigateur examine la section de tissu au microscope et lance le laser quand les cellules désirées sont à la base de la cible. Ceci lance alternativement la membrane avec l'attache ultérieure et la fourniture des cellules d'intérêt. - [Saisie lue Microdissection (LCM) de laser]

La technologie de LCM peut moissonner les cellules d'intérêt directement ou peut isoler les cellules spécifiques en coupant les cellules non désirées parties pour donner les populations enrichies histologiquement pures de cellules. Une série d'applications descendant existent : Genotyping d'ADN et l'analyse de la perte-de-hétérozygotie (LOH), le protocole etc. fournit à une description complète des techniques de LCM, une emphase sur des extrémités et le conseil de dépannage dérivés des utilisateurs de LCM. Tout le temps requis pour effectuer ce protocole est en général 1-1.5 H. - [lu Laser-saisissez le protocole de Microdissection]

Des tissus humains sont composés des populations de interaction multiples de cellules dans un agencement tridimensionnel complexe avec chaque phénotype cellulaire déterminé par un seul profil d'expression d'ADN messagère et de protéine. Avant que des techniques de microdissection aient été développées, les seuls outils d'analyse pour des études phénotypiques étaient hybridation principalement immunohistochemistry et in-situ. Tandis qu'utiles, ces outils sont limités pour choisir l'analyse de gène et, généralement ne permettez pas les études qualitatives. - [Vue d'ensemble lue de Microdissection]

Le protocole pour la préparation de LCM de paraffine a inclus des sections de tissu. Inclut : Fixation ; Traitant, encastrant et sectionnant de tissu ; Souillure ; Transfert de laser ; Protocole d'extraction d'ADN de tissu de LCM et d'ACP pour l'analyse d'ADN ; Protocole d'extraction d'ARN de tissu de LCM et de RT-PCR pour l'analyse d'ADN messagère. - [Préparation lue et LCM de protocole de sections de tissu inclus par paraffine]

Protocole pour la préparation, l'extraction de LCM et de RNA/DNA des sections gelées de tissu. Inclut : Encastrer, découpage et souiller. - [Extraction lue de préparation, de LCM et de RNA/DNA de protocole gelé de sections de tissu]

L'information sur le traitement du tissu microdissected pour l'analyse moléculaire. Inclut : Plus de 10.000 cellules ; Moins de 10.000 cellules ; Formaline-fixe ; tissu Paraffine-encastré ; D'autres fixatifs ; Synchronisation. - [Traitement lu du tissu de Microdissected pour l'analyse moléculaire]

La méthodologie et les mémoires tampons utilisées pour traiter les échantillons microdissected pour des études à base de protéines est variable selon la méthode d'analyse moléculaire descendant. - [Traitement lu du tissu de Microdissected pour des études Proteomics-basées par analyse moléculaire]

études ARN-basées du traitement du tissu microdissected pour l'analyse moléculaire. Inclut : Isolement total d'ARN ; Traitement facultatif de DNase. - [Traitement lu du tissu de Microdissected pour des études ARN-basées par analyse moléculaire]

Protocoles pour la préparation et l'analyse de LCM. Inclut des protocoles : Extraction de préparation, de LCM et de RNA/DNA des sections gelées de tissu ; Préparation et LCM des sections de tissu incluses par paraffine ; Protocoles standard pour l'analyse de tissu de Microdissected. - [Protocoles lus pour la préparation et l'analyse de LCM]