protocoles spécifiques

Catégorie : Protocoles d'isolement et de culture de cellules primaires : Protocoles de Microdissection de saisie de laser : Préparation de tissu pour des protocoles de LCM

Les cellules ou les tissus spécifiques d'isolats de LCM des échantillons ont monté sur des glissières de microscope. Les échantillons sont visualisés par un film thermoplastique qui est fixé à un couvercle de tube de microcentrifuge. La chaleur localisée, provoquée par l'application d'une impulsion de laser, fond la membrane aux cellules d'intérêt, qui peuvent alors être moissonnées pour l'analyse approfondie. L'ARN et les protéines peuvent être épurés des cellules d'isolement, permettant l'analyse détaillée de l'expression de gène. Ce protocole est divisé en trois étapes. - [Lu (LCM) : Préparation et sectionnement des blocs gelés de tissu et purification de l'ARN du cel d'isolement]

Catégorie : Protocoles d'ARN : ' l'amplification rapide de RACE 3 du cDNA termine des protocoles

Le cycle d'ACP fait un pas, protocole utilisant le transcriptase renversé de l'exposant II (technologies de la vie) et la polymérase de Taq, l'amorce spécifique de gène, amorce de l'adaptateur T17 et une amorce d'adaptateur. Dr.Dawson, Nottingham. - [Lu ' l'amplification 3 rapide du cDNA termine le protocole (de RACE)]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Pour produire de « 3 ' - clones partiels de cDNA d'extrémité », ADN messagère renversé-est transcrit utilisant une amorce « hybride » (Qtotal, quart) qui se compose de deux bases mélangées (GATC/GAC suivi [T] de 17) et d'un ordre de base de l'oligonucléotide seuls 35 (QI-QO).  L'amplification est alors exécutée utilisant une amorce contenant une partie de cet ordre (Qouter, Qo) (qui lie maintenant à chaque cDNA à ses 3 ' - extrémité) et une amorce dérivée du gène d'intérêt, GSP1 (amorce gène-spécifique 1). - [' - Amplification lue de cDNA d'extrémité 3 utilisant le protocole classique de RACE]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Pour produire de « 5 ' - clones partiels de cDNA d'extrémité » utilisant RACE classique, les produits de premier-brin sont produits par la transcription renversée (extension d'amorce) d'une amorce gène-spécifique connue (GSP-RT).  Puis, un poly (A) la queue est ajoutée utilisant le deoxynucleotidyltransferase terminal (Tdt) et le dATP.  L'amplification est effectuée utilisant trois amorces. - [' - Amplification lue de cDNA d'extrémité 5 utilisant le protocole classique de RACE]

Catégorie : Protocoles de levure : Protocoles d'acide nucléique de levure : Protocoles d'ACP de levure

Protocole pour l'ACP de levure de confirmation de 96 puits. Inclut : Purification clonale ; Produisez d'un plat principal (format 96-well) ; Fabrication des actions de sauvegarde figées ; ACP de confirmation pour une ligne ; ACP spécifique de confirmation de cadre ouvert de lecture --> amorces de « A-B » (jonction ascendante) ; ADN de descripteur de transfert au plat d'ACP de multipuits ; Préparez et distribuez le mélange principal pour l'ACP d'A-B. - [Protocole lu d'ACP de levure de confirmation 96-Well]

Catégorie : Protocoles d'ARN : purification ARN-contraignante de protéine

Une méthode élevée de purification d'affinité de rendement pour les protéines ARN-contraignantes spécifiques : isolement du facteur de normalisation de fer du placenta humain. Neupert 1990. - [Méthode élevée lue de purification d'affinité de rendement d'A pour les protéines ARN-contraignantes spécifiques.]

Catégorie : Protocoles de biologie moléculaire : Protocoles d'hydrate de carbone

La méthode permet la détection et la quantification de l'activité de glycosyltransferase utilisant un procédé ELISA-basé et des anticorps monoclonaux hydrate de carbone-spécifiques. Évite l'utilisation des substrats radioactifs. Bruce A. Macher~Professor de chimie et de biochimie, université de l'Etat de San Francisco, San Francisco, CA - [lu une analyse ELISA-Basée sensible pour Glycosyltransferases]

Catégorie : Protocoles de protéine : Protocoles d'Ubiquitination de protéine

Une analyse spécifique de point final pour l'ubiquitin. Rose et autres, Proc Acad national Sci Etats-Unis. 1987. Des analyses simples de point final pour l'ubiquitin libre (Ub) et pour l'enzyme de Ub-lancement sont décrites. - [Analyse spécifique lue de point final d'A pour l'ubiquitin.]

Catégorie : La génétique et génomique : Protocoles de la génétique de Cancer

Décrivez les méthodes pour identifier et doser la transcription spécifique d'A/E9a dans t (8 ; 21) échantillons de patients relativement à la transcription d'AML1-ETO encodant 752 la protéine intégrale bien connue de l'acide aminé AML1-ETO (EA). Inclut : Préparation d'ARN et RT-PCR ; Quantitation relative de l'AE9a et des transcriptions des EA. - [Lu un Isoform alternativement épissé de t (8 ; 21) La transcription favorise Leukemogenesis]

Catégorie : Protocoles de technologie de RNAi

Le protocole décrit la préparation d'un vecteur de shRNA-expression d'entrée de Gateway.  Ce processus est précédé par la conception et la synthèse du sens gène-spécifique de cible et des oligonucléotides antisens qui, quand recuit, constituera une cassette de shRNA. - [Recuit, clonage, et ordonnancement lus des éditeurs de liens de shRNA dans le protocole de plasmides pEN_H1]

Catégorie : Protocoles d'elegans de C. : Elegans de C. souillant des protocoles

Le soin extrême devrait être employé pour identifier et vérifier des réactions positives, cependant, parce que les réactions croisées sont communes. Counterstaining est essentiel pour les vers de terre de examen par l'immunofluorescence et est utilisé pour identifier la cellule exacte en laquelle un antigène apparaît. Les méthodes pour counterstaining incluent étiqueter toutes les cellules avec un colorant fluorescent qui est spécifique pour les acides nucléiques (iodure par exemple, de DAPI ou de propidium) et l'usage de GFP conduit par les instigateurs tissu-spécifiques. - [Ajout et détection lus d'anticorps pour souiller le protocole d'elegans de Caenorhabditis]

Catégorie : Protocoles de transfection : Protocoles stables de transfection

L'AFCS utilise la technologie antisens pour manipuler l'expression de protéine de signalisation dans les 264.7 CRUS macrophage-comme la variété de cellule. Ceci peut être réalisé par la transfection des oligonucléotides antisens gène-spécifiques (ASOs). Le procédé suivant implique la transfection d'ASOs dans les 264.7 cellules CRUES utilisant le réactif de transfection de FuGENE 6. Ultérieurement, le tout le ARN ou protéine d'isolement de ces cellules transfected peut être employé pour évaluer le niveau de la précipitation d'ADN messagère ou de protéine, respectivement. - [Transfection antisens lue d'oligonucléotide des 264.7 cellules CRUES avec FuGENE 6 dans un paraboloïde 24-Well]

Catégorie : Protocoles de cytogénétique : Protocoles spectraux de CIEL de Karyotyping

Le CIEL a été appliqué à de divers groupes de tumeur comprenant les malignités hématologiques, sarcomes, carcinomes et tumeurs cérébrales, avec l'intention d'identifier les anomalies chromosomiques spécifiques qui peuvent fournir la perspicacité aux gènes impliqués dans le processus de la maladie aussi bien qu'identifier les repères cytogénétiques récurrents pour le diagnostic clinique et l'estimation pronostique. - [Applications lues de CIEL en cytogénétique de Cancer]

Catégorie : Protocoles de la livraison de gène : Protocoles d'ADN Nanoparticles

Ce protocole décrit un procédé par étapes pour préparer les acides nucléiques encapsulés dans un polyéthylène glycol (CHEVILLE) - le nanolipoparticle protégé (NLP) qui contiennent un lipide et un ligand bioresponsive. Ce processus fournit plusieurs avantages pour la livraison systémique de gène. Le temps in vivo de circulation est étendu. En outre, les bas lipides pH-sensibles améliorent l'éclatement d'ADN et l'évasion endosomal. En conclusion, les ligands insérés dans la surface de NLP peuvent viser la livraison de gène aux tissus ou aux cellules spécifiques in vivo. - [Vésicules neutres indiquées de lipide de charge visées par Bioresponsive pour le protocole systémique de la livraison de gène]

Catégorie : Protocoles d'Immunohistochemistry : Blocage des protocoles

Protocole pour le blocage de la souillure non spécifique non désirée. Inclut : Blocage des enzymes endogènes ; Blocage des fluorochromes endogènes ; Blocage de la biotine endogène ; Blocage du blocage endogène de Fc ; Blocage des antigènes crossreactive dans le tissu. - [Blocage lu du protocole de souillure non spécifique non désiré]

Catégorie : Formation image moléculaire : Microscopie d'immunofluorescence

Blocage de la souillure non spécifique non désirée dans l'immunofluorescence. Blocage des enzymes endogènes, blocage des fluorochromes endogènes, bloquant la biotine endogène, blocage de Fc endogène bloquant, blocage des antigènes crossreactive dans le tissu. Cattoretti. Université de Columbia - [blocage lu de la souillure non spécifique non désirée dans l'immunofluorescence.]

Catégorie : Protocoles d'Immunohistochemistry : Blocage des protocoles

Protocoles pour bloquer des solutions. Inclut : Peroxydase endogène bloquant la solution (H2O2-Azide) ; Fond non spécifique d'anticorps bloquant la solution : sérum de porcs ; Fond non spécifique d'anticorps bloquant la solution : LAIT ; Solution enzymatique de recherche d'antigène ; Non-conjugué, biotine et solutions (primaires) fluorochrome-conjuguées d'anticorps ; Non-conjugué, biotine et solutions (secondaires) fluorochrome-conjuguées d'anticorps ; solutions secondaires Enzyme-conjuguées d'anticorps. ; etc… - [lu bloquant des protocoles de solutions]

Catégorie : Protocoles d'Immunohistochemistry : Blocage des protocoles

Protocole pour le blocage de la souillure non spécifique non désirée. Inclut : Blocage des enzymes endogènes ; Blocage des fluorochromes endogènes ; Blocage de la biotine endogène ; Blocage du blocage endogène de Fc ; Blocage des antigènes réactifs en travers dans le tissu. - [Lu bloquant le protocole de souillure non spécifique non désiré]

Catégorie : Protocoles d'elegans de C. : Protocoles de la génétique d'elegans de C.

Le procédé est de mutagenize une grande population des vers de terre avec trimethylpsoralen et l'irradiation uv, a installé 1152 sous-populations, ADN d'écran faite à partir de cette bibliothèque pour des suppressions dans les gènes spécifiques par ACP emboîté, et récupérer alors les vers de terre simples portant les suppressions par un procédé de SIB-sélection. - [Protocole lu de coup de grâce de gène d'elegans de C.]

Catégorie : Protocoles de biologie moléculaire : Protocoles d'hydrate de carbone

Le protocole détecte l'adhérence spécifique de cellules aux glycolipides résolus des plats de chromatographie sur couche mince. Adhérence Hydrate de carbone-Spécifique des cellules intactes aux glycolipides Resolved des plats de chromatographie sur couche mince. Ronald L. Schnaar~Professor, Faculté de Médecine d'Université John Hopkins, Baltimore, le Maryland. Glycotech. - [Adhérence Hydrate de carbone-Spécifique lue des cellules intactes aux glycolipides Resolved des plats de chromatographie sur couche mince]

Catégorie : Protocoles de protéine : Extraction de protéine à partir des cellules

Extraits de Lysate de cellules. Grands protocoles pour la préparation de lysis de cellules à partir d'une série de types de cellules. Il y a de nombreuses méthodes de stimulation et de lysis de cellules. Pour une protéine donnée, les laboratoires d'Upstate’s déterminent le traitement spécifique sur le test initial de ses produits. Il est important de choisir la variété de cellule, le procédé de stimulation (le cas échéant), et le protocole corrects de lysis. Hors de la ville. - [Extraits lus de Lysate de cellules]

Catégorie : Protocoles de neurologie : Protocoles de fixage de correction

Principes derrière les techniques : techniques de détail de canal. - [Techniques spécifiques de la Manche lue]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement

Le protocole utilise les anticorps spécifiques couplés à un de quatre fluorochromes : isothiocyanate de fluorescéine (FITC), R-phycoérythrine (PE), chlorophylle-un de peridinin (PcP), et allophycocyanin (RPA). Ces fluorochromes peuvent être employés simultanément pour souiller et analyser les configurations d'expression de quatre protéines différentes dans le même échantillon. Les populations souillées par fluorochrome de cellules sont analysées utilisant un cytometer d'écoulement de duel-laser de FACSCalibur. - [Caractérisation lue des cellules par protocole de Cytometry d'écoulement]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules

Ce protocole d'analyse de chimiotactisme est basé sur les lieux de créer un gradient de l'agent chimiotactique et de permettre à des cellules d'être executé par une membrane vers l'agent chimiotactique. Une analyse de chimiotactisme peut déterminer si votre protéine ou petite molécule d'intérêt a l'activité chimiotactique sur un type spécifique de cellules. Le chimiotactisme est alors la capacité d'une protéine de diriger le transfert d'une cellule spécifique. - [Protocole lu d'analyse de chimiotactisme]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles d'immunoprécipitation de chromatine

Protocole d'analyse de puce avec 2 étapes : édition absolue in vivo de formaldéhyde des cellules et la protéine-protéine et les interactions protéine-ADN entières, suivie d'immunoprécipitation des complexes protéine-ADN avec des anticorps spécifiques des extraits soniqués. Laboratoire de Breeden - [IP lu de chromatine (analyse de PUCE)]