protocoles de plasmide

Catégorie : Protocoles viraux de culture et d'isolement : Protocoles viraux d'isolement

Le protocole décrit les méthodes typiques qui sont employées pour propager et épurer des vecteurs d'AAV pour des expériences in vitro et in vivo. Inclut : Principes du système triple de transfection de plasmide ; Plasmides ; Transfection et extraction de virus ; Purification du vecteur d'AAV. - [Lu un protocole pour la production et la purification de vecteur d'AAV]

Catégorie : Protocoles de clonage : Protocoles de vecteur

Le protocole est employé pour propager et épurer des vecteurs d'AAV pour des expériences in vitro et in vivo. Inclut : Principes du système triple de transfection de plasmide ; Plasmides ; Transfection et extraction de virus ; Purification du vecteur d'AAV. - [Production de vecteur d'AAV et protocole lus de purification]

Catégorie : Microbiologie : Mini-Préparez la purification de plasmide

Moisson et lysis des bactéries. Mini-préparez la purification de plasmide utilisant la solution I, la solution II et la solution III. Le laboratoire de Preuss. Université Chicago. - [le lysis alkalin lu Mini-Préparent le protocole]

Catégorie : Protocoles de biologie d'usine : Protocoles de transformation d'Arabidopsis

Electrotransformation d'agrobactérie avec un plasmide qui avait reproduit dans Escherichia coli. Croissance de thaliana d'Arabidopsis. Tremper d'Arabidopsis. Moisson de graine. Culture de tissu végétal. Protocole très détaillé. Laboratoire de Stockinger. Pdf - [transformation lue d'Arabidopsis avec le pdf d'agrobactérie]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

L'analyse pour la ß-galactosidase se fonde sur la capacité de l'enzyme de catalyser l'hydrolyse d'ONPG (galactopyranoside o-nitrophénylique-ß-d) pour libérer l'o-nitrophénol, qui absorbe la lumière à 420 nanomètre. Dans ce protocole, des extraits des cellules transfected avec un plasmide de journaliste de ß-galactosidase sont incubés avec ONPG. - [Analyse lue pour la ß-galactosidase en extraits des cellules mammifères]

Catégorie : Protocoles de levure : Protocoles de la génétique de levure : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

Dans ce protocole, des extraits des cellules transfected avec un plasmide de journaliste de ß-galactosidase sont incubés avec ONPG. - [Analyse lue pour la ß-galactosidase en extraits de protocole de cellules mammifères]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de Luciferase

Dans ce protocole, des cellules transfected avec un plasmide de journaliste de luciferase sont lysées dans une mémoire tampon contenant un détergent. Luciferase dans l'extrait catalyse une réaction d'oxydation dans laquelle D-luciferin est converti en oxyluciferin, à la production de la lumière à 556 nanomètre qui peuvent être mesurés dans un luminometer. - [Analyse lue pour Luciferase en extraits de protocole de cellules mammifères]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

La quantité recommandée de plasmide de RSV-ß-Galactosidase à utiliser pour la transfection des cellules (paraboloïde de 60 millimètres ou de 100 millimètres) est le µg 1-2. La quantité optimale d'ADN de plasmide sera déterminée par l'efficacité de la transfection, qui dépend très du protocole particulier de variété de cellule et de transfection. - [Protocole lu d'analyse de galactosidase de b]

Catégorie : Microbiologie : Milieux de culture et plats bactériens d'Escherichia coli

agar, actions d'ampicilline, solution alkaline de lysis, medias de SANGLOT, de SOC, et solutions X-gallon courantes. Donis Keller. - [Solutions et stocks bactériens lus de medias]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles de clonage d'ACP

Le protocole est pour bi-directionnel, clonage d'émoussé-fin des fragments d'ADN.  L'ADN de cible est ACP amplifié et 3 ' - des extensions sont polies avec de l'ADN polymérase de Pfu.  L'amplicon est ligaturé à une ADN émoussé-terminée de plasmide, et les produits de la réaction de ligature sont employés pour transformer Escherichia coli compétent.  Une enzyme de restriction est ajoutée à la réaction de ligature pour relinearize n'importe quelle ADN de vecteur d'individu-religating. - [Clonage bi-directionnel lu de protocole de produits d'ACP]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles de clonage d'ACP

Protocole pour le clonage d'émoussé-fin des produits d'ACP. L'incubation d'une réaction de ligature d'émoussé-fin en présence d'un montant en excédent d'une enzyme appropriée de restriction peut considérablement augmenter le rendement de plasmides de recombinaison.  Le rôle de l'enzyme de restriction est de fendre les concatémères circulaires et linéaires aux sites de restriction qui sont reformés quand les molécules linéaires et émoussé-terminés de plasmide ligaturent à eux-mêmes.  I - [clonage lu d'Émoussé-fin de protocole de produits d'ACP]

Catégorie : Protocoles de clonage : Protocoles de vecteur

Protocole pour le clonage émoussé-terminé dans des vecteurs de plasmide. - [Le clonage Émoussé-terminé lu dans le plasmide dirige le protocole]

Catégorie : Protocoles d'elegans de C. : Protocoles de la génétique d'elegans de C.

Protocole pour des elegans RNAi de C. Inclut : Transformation des cellules compétentes ; ligature d'Émoussé-fin ; Préparation des cellules compétentes ; Dephosphorylation de l'ADN linéaire de plasmide ; Sommaire de restriction : EcoRV ; Insérez l'amplification du gDNA ; Purification de gel : Kit de purification de gel de QiaQuick ; Mini-préparez ; Criblage de Transformant ; Préparation et induction bactériennes ; Préparation des vers de terre pour l'alimentation de RNAi. - [Protocole lu de RNAi d'elegans de C.]

Catégorie : Protocoles de transfection : Protocoles de transfection de phosphate de calcium

Cette méthode de transfection de phosphate de calcium fonctionne bien dans les variétés de cellule qui sont 1) fortement transformé et 2) l'adhérent (hela, U2OS, SAOS2, AdAH, NPC-KT et obtiennent de l'efficacité 20% à 100% de transfection selon la variété de cellule). Des travaux bien pour des expériences passagères mais des précautions devraient être utilisés dans la conception et la traduction des expériences basées sur la discussion ci-dessous. Fonctionne également très bien pour produire des variétés de cellule stables. Cette méthode est tout à fait sensible à la quantité de plasmide d'entrée. - [Méthode lue de transfection de phosphate de calcium]

Catégorie : Protocoles de transfection : Protocoles de transfection de phosphate de calcium

Le phosphate de calcium forme un précipité insoluble avec de l'ADN, qui attache à la surface de cellules et est prise dans les cellules par endocytosis. Le protocole est facilement adapté pour l'usage avec d'autres types de cellules, adhérentes et nonadherent. Ce protocole est une version modifiée d'une méthode éditée par la Jordanie et autres (1996) qui les méthodes calcium-phosphate-basées rigoureusement optimalisées de transfection pour les cellules chinoises d'ovaire de hamster et la ligne 293 des cellules embryonnaires humaines de rein. - [Transfection Calcium-phosphate-négociée lue des cellules eucaryotiques avec plasmide DNAs]

Catégorie : Protocoles d'ARN : bibliothèque de bibliothèques de cDNA

Protocole pour la synthèse de cDNA et cDNA de clonage dans le vecteur de plasmide. ęr Échouez la synthèse de cDNA, et déterminez l'efficacité de la première synthèse de cDNA de brin. Inclut également la deuxième synthèse de cDNA de brin. Dr.Frank - [synthèse et clonage lus de cDNA]

Catégorie : Protocoles d'ADN : protocoles de bibliothèque de cDNA : protocoles de construction de bibliothèque de cDNA

Protocole pour des gènes de clonage d'une bibliothèque bactériophage. Inclut : Titre et de plat bactériophage dehors ; Soulevez les plaques sur des filtres et préparez-les pour le criblage ; Faites une sonde ; Hybridez la sonde aux filtres ; Lavez les filtres et l'exposition pour filmer ; Épurez les plaques putatives ; Excisez le plasmide du bactériophage désiré. - [Gènes lus de clone d'un protocole bactériophage de bibliothèque]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles de clonage d'ACP

Des paires d'amorces d'oligonucléotide utilisées dans l'ACP sont souvent conçues avec des sites de restriction dans leurs 5 ' régions.  Dans beaucoup de cas, les sites sont différents dans les deux amorces.  Dans ce cas-ci, l'amplification produit d'un fragment de cible dont les terminus portent maintenant les nouveaux sites de restriction qui peuvent être utilisés pour le clonage directionnel dans des vecteurs de plasmide.  Le fragment épuré et le vecteur sont assimilés avec des enzymes appropriées de restriction, ensemble ligaturés, et transformés en Escherichia coli. - [Produits de clonage lus d'ACP par Addition des sites de restriction aux terminus du protocole amplifié d'ADN]

Catégorie : Microbiologie : Préparation compétente bactérienne Escherichia coli de cellules

Protocole gentil pour la préparation des cellules bactériennes pour permettre la prise des vecteurs de plasmide. Dr. Peter Kille. Métaux chauds Cardiff. - [Préparation compétente lue de cellules [CaCl2]]

Catégorie : Protocoles de purification d'acide nucléique : Protocoles d'isolement d'ADN : Le plasmide d'ADN prépare des protocoles

Protocole pour la préparation de CsCl de l'ADN de plasmide. C'est une préparation standard de large échelle.  Pour l'ADN de plasmide qui donne un rendement de 0.5 mg 1.0. - [Préparation lue de CsCl de protocole d'ADN de plasmide]

Catégorie : Protocoles de levure : Protocoles de la génétique de levure

Protocole pour le traitement des contraintes du plasmide endogène de 2 microns. - [Lu traitant des contraintes du protocole endogène de plasmide 2-Micron]

Catégorie : Protocoles d'ADN : ADN ordonnançant des protocoles

Protocole pour des réactions d'ordre de cycle pour de grands descripteurs de plasmide d'insertion. Inclut : CycleSequenceConditions ; Amorces utiles pour des vecteurs de CCB et de PAC. - [Réactions lues d'ordre de cycle pour le grand protocole de descripteurs de plasmide d'insertion]

Catégorie : Protocoles de clonage : Protocoles de vecteur

Le clonage directionnel exige que le vecteur de plasmide soit fendu avec deux enzymes de restriction qui produisent des terminus incompatibles et qui le fragment de l'ADN à copier porte les terminus qui sont compatibles avec ceux du vecteur doublement fendu. - [Le clonage directionnel lu dans le plasmide dirige le protocole]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles de clonage d'ACP

Le protocole est pour le clonage directionnel d'émoussé-fin des fragments d'ADN.  L'ADN de cible ACP-est amplifiée, 3 ' - des extensions sont polies avec de l'ADN polymérase de Pfu, et l'amplicon est ligaturé à une ADN émoussé-terminée de plasmide.  Les produits de la réaction de ligature sont employés pour transformer Escherichia coli compétent.  Une enzyme de restriction est ajoutée à la réaction de ligature pour relinearize n'importe quelle ADN de vecteur d'individu-religating. - [Clonage directionnel lu de protocole de produits d'ACP]

Catégorie : Protocoles de biologie moléculaire : Protocoles de ligature d'ADN

Clonage d'ADN. Calculatrice de clonage pour l'insertion de taux au vecteur/au plasmide. Station moléculaire. - [Clonage lu d'ADN]