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Protocole de Ligature d'ADN

Le protocole de ligature d'ADN décrit ici contient les étapes exigées pour se joindre ensemble en utilisant des fragments d'ADN de plasmide d'enzymes de ligase et d'ADN d'insertion afin de créer un nouveau plasmide. Ce nouveau plasmide ligaturé peut être transformé ensuite en bactéries compétentes pour produire l'ADN pour mini, le Midi ou l'isolement de maxi-prep.

Electrotransformation de BMH 81-17mut S pour isoler les mutants Site-Dirigés de dsDNA

Ce protocole décrit l'electroporation de la contrainte du mut S de BMH 81-17 qui est recommandée pour le tranformation du site a dirigé la mutagénèse du dsDNA (voir le protocole relatif à la mutagénèse Site-Dirigée sur la double ADN échouée). Le mut S de BMH 81-17 sont une réparation d'erreur d'assortiment défectueuse (contrainte de mut S) Escherichia coli. La probabilité que les deux mutations veulent le cosegregate pendant le premier rond de la réplique d'ADN est augmentée dans cette contrainte.

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