protocoles de membrane

Catégorie : Protocoles d'isolement et de culture de cellules primaires : Protocoles de Microdissection de saisie de laser : Préparation de tissu pour des protocoles de LCM

Cellules ou tissus spécifiques d'isolats de LCM des échantillons montés sur des glissières de microscope. Les échantillons sont visualisés par un film thermoplastique qui est fixé à un couvercle de tube de microcentrifuge. La chaleur localisée, provoquée par l'application d'une impulsion de laser, fond la membrane aux cellules d'intérêt, qui peuvent alors être moissonnées pour l'analyse approfondie. L'ARN et les protéines peuvent être épurés des cellules d'isolement, permettant l'analyse détaillée de l'expression de gène. Ce protocole est divisé en trois étapes. - [Lu (LCM) : Préparation et sectionnement des blocs gelés de tissu et purification de l'ARN du cel d'isolement]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles sous-cellulaires de fractionnement

Le protocole décrit les systèmes dans lesquels on permet aux les membranes de flotter par un gradient de densité d'une zone dense de chargement. C'est un format idéal. - [Lu un gradient Self-generated pour distinguer un emplacement cytosolique ou de membrane de grand complexe de protéine]

Catégorie : Protocoles de protéine : Trafic de protéine

Le protocole est basé sur des méthodes pour la résolution de GLUT4 contenant des vésicules et l'identification de la kinase de phosphoinositide contenant des vésicules dans les adipocytes 3T3-L1. Ils peuvent avoir une application plus large à toutes les membranes de densité de bas-support. Le protocole incorpore la stratégie d'utiliser une fraction de microsome de faible densité comme entrée de gradient, utilisée généralement dans les études de la SURABONDANCE 4 qui peuvent avoir une application plus large à d'autres investigations. - [Analyse lue du trafic de membrane et de la signalisation intracellulaire dans des gradients Self-Generated d'Iodixanol]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles de mitochondries

La technique de la souillure JC-1 a été développée avec l'intention pour détecter Dy dedans intact, cellules viables. À cette fin JC-1 agit en tant que repère d'activité mitochondrique, depuis la formation des J-agrégats, qui donnent l'émission rouge, est réversible. Les cellules avec du haut Dy sont ceux qui forment des J-agrégats, de ce fait affichant la fluorescence rouge élevée. D'une part, les cellules avec du bas Dy sont ceux dans lesquelles JC-1 met à jour (ou re-acquire) la forme monomérique, de ce fait qui affichent seulement la fluorescence verte. - [Analyse lue de potentiel mitochondrique de membrane avec la sonde fluorescente sensible JC-1]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement : Protocoles d'Apoptosis Cytometry

Annexin V, appartenant à une famille récemment découverte des protéines, les annexins, avec des propriétés d'anticoagulant s'est avéré être un outil utile en détectant les cellules apoptotic puisqu'il lie préférentiellement négativement - les phospholipides chargés comme la picoseconde en présence de Ca2+ et affiche l'attache minimale à la phosphatidylcholine et au sphingomyeline. Change en asymétrie de picoseconde, qui est analysée en mesurant Annexin V liant à la membrane de cellules, ont été détectés avant les modifications morphologiques liées à… - [Protocole lu d'Annexin V]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules

Ce protocole d'analyse de chimiotactisme est basé sur les lieux de créer un gradient de l'agent chimiotactique et de permettre à des cellules d'être executé par une membrane vers l'agent chimiotactique. Une analyse de chimiotactisme peut déterminer si votre protéine ou petite molécule d'intérêt a l'activité chimiotactique sur un type spécifique de cellules. Le chimiotactisme est alors la capacité d'une protéine de diriger le transfert d'une cellule spécifique. - [Protocole lu d'analyse de chimiotactisme]

Catégorie : Protocoles de pharmacologie et de toxicologie : Protocoles de cytotoxicité

Le protocole décrit l'automatisation de l'analyse homogène d'intégrité de membrane de CytoTox-ONE. - [Protocole homogène lu d'analyse d'intégrité de membrane de CytoTox-ONE]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles de mitochondries

Protocole pour la détection des changements du potentiel mitochondrique de membrane sur le FACSCalibur. - [Détection lue des changements du potentiel mitochondrique de membrane sur le FACSCalibur]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles d'Apoptosis : Analyse d'Apoptosis

Détection d'externalisation de phosphatidylsérine pendant l'Apoptosis. Shailaja Kasibhatla et autres. Un événement tôt dans l'apoptosis est l'externalisation de la phosphatidylsérine (picoseconde), un phospholipide normalement limité au feuillet intérieur de la membrane de plasma. Cet événement apoptotic peut être surveillé utilisant Annexin V, une protéine obligatoire Picoseconde-spécifique. Ce protocole utilise Annexin V-FITC comme sonde, mais la V-biotine d'Annexin est également disponible, et lier peut être indiqué utilisant le streptavidin-FITC ou transhorizon - [détection lue d'externalisation de phosphatidylsérine pendant l'Apoptosis (abonnement requis)]

Catégorie : Protocoles de Xenopus : Protocoles d'injection de Xenopus

Différences dans l'injection des laevis de X. et du X. tropicalis. Inclut : X. les configurations tropicalis eggs environ 4 heures après une poussée de hCG ; La fertilisation in vitro n'est pas presque comme efficace dans les trops comparés aux laevis ; X. les embryons tropicalis sont beaucoup plus mous que des embryons de laevis de X. ; X. des embryons tropicalis dont la gelée enduit sont retirés par la cystéine ont une membrane collante lâche de vitelline ; X. tropicalis n'ayez pas une « récession d'été ». - [Différences lues dans l'injection des laevis de X. et du X. tropicalis]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles d'extraction d'ADN : Protocoles d'extraction d'ADN de gel d'agarose

L'extraction d'ADN à partir de l'agarose gélifie le protocole. La page inclut couper la bande d'ADN du gel, et décrit trois méthodes comprenant 1) des Tourner-colonnes (colonnes de purification d'acide nucléique), 2) suivre la tuyauterie de dialyse (membrane semi-perméable, tuyauterie de Visking), et 3) la méthode de bande article. Matt Lewis, service de la pathologie, université de Liverpool. - [L'extraction lue d'ADN à partir de l'agarose gélifie le protocole]

Catégorie : Protocoles de détection d'acide nucléique : Protocoles épongeants d'acide nucléique

Protocole pour l'hybridation de point et de fente de l'ARN purifié. Éponger de point de l'ARN mieux est effectué utilisant les préparations épurées de l'ARN qui sont dénaturées avec le glyoxal ou le formaldéhyde juste avant le chargement sur une membrane en nylon par une tubulure de vide. - [Hybridation lue de point et de fente de protocole épuré d'ARN]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement

FIXATION et ADN souillant pour le protocole d'analyse de cycle de cellules. Cette méthode de souillure d'ADN utilise l'éthanol pour fixer les cellules et pour permeabilize la membrane, qui permet au colorant (iodure de Propidium) d'écrire les cellules.  L'iodure de Propidium (pi) est un fluorochrome ADN-contraignant qui intercale dans la double-spirale.  La Ribonucléase-Un est employée pour éliminer la souillure de l'ARN bicaténaire. - [FIXATION lue et ADN souillant pour l'analyse de cycle de cellules]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles de mitochondries

Le protocole décrit une méthode pour l'évaluation de la fonction mitochondrique utilisant le fluorochrome CMXRos. CMXRos est séquestré par les mitochondries activement de respiration, mais effacé quand le potentiel mitochondrique de membrane est détruit. Cette analyse peut être combinée avec la technique de TUNEL ou immunocytochemistry. - [Analyse lue de Cytometric d'écoulement de potentiel mitochondrique de transmembrane ({delta} {PSI} m)]

Catégorie : Protocoles de microscopie

FM 4-64 est un colorant liphophile de styryl et une tache essentielle : il brille par fluorescence seulement en cellules vivantes, ainsi des cellules ne peuvent pas être fixées alors ont souillé ni ont souillé alors fixe. Vous devez souiller et observer les cellules vivantes. FM 4-64 n'imprègne pas des membranes de cellules mais, au lieu de cela, les intercale dans la membrane de plasma est alors pris dans les cellules par endocytosis. - [Écriture de labels lue de FM 4-64 du protocole de membranes de vacuole de levure]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles sous-cellulaires de fractionnement : Protocoles d'isolement de membrane

Le protocole décrit dans ce protocole a été utilisé principalement pour analyser le Golgi, le bonnet endoplasmique et le réseau transport-Golgi mais des repères pour d'autres compartiments (par exemple ERGIC et endosomes) ont été également analysés. Les modifications à l'intervalle de densité de gradient ou aux conditions de centrifugation influencent la capacité du gradient de résoudre les compartiments multiples. - [Fractionnement lu de Golgi, d'ER, de TGN et d'autres compartiments de membrane dans des gradients préformés d'Iodixanol]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles sous-cellulaires de fractionnement : Protocoles d'isolement de mitochondries

Généralement dans des gradients d'iodixanol la densité des organelles diminue de la série : les peroxisomes, mitochondries, les lysosomes, ER, Golgi, bien que dans le discoideum de Dictyostelium, les lysosomes sont plus denses que les mitochondries. Les gradients d'Iodixanol peuvent habituellement fournir la résolution satisfaisante de toutes ces particules de membrane bien qu'il puisse être nécessaire de moduler les paramètres de gradient ou de centrifugation afin d'optimaliser une séparation particulière. - [Fractionnement lu des mitochondries, des Lysosomes, du Peroxisomes, de l'ER et du Golgi dans le gradient préformé d'Iodixanol]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles sous-cellulaires de fractionnement : Protocoles d'isolement de membrane

Ce protocole est concerné par l'utilisation des gradients d'iodixanol en mode analytique d'étudier la localisation de membrane d'une protéine ou d'une fonction particulière. Des gradients continus best suited à cette tâche. Un des protocoles décrits dans ce protocole commence par un gradient discontinu, mais puisque le gradient est centrifugé à 174,000g pour 16 h il deviendra continu par diffusion. - [Fractionnement lu des membranes de levure dans des gradients continus préformés d'Iodixanol]

Catégorie : Protocoles de pharmacologie et de toxicologie : Protocoles de cytotoxicité : La cytotoxicité spécifique de cellules analyse des protocoles

L'accumulation des substances liphophiles dans la membrane de plasma peut affecter la commande de lipide de membrane et par conséquent affecter la fonction de ces protéines.  Change dans l'activité du Na+/K+ - l'atpase, qui est le système de transport actif principal responsable du potentiel électrochimique en cellules mammifères, peut donc être une indication de l'effet qu'un produit chimique peut avoir sur la viabilité de la membrane de cellules et probablement de la cellule entière. - [Cellule lue NA+/K+ - essai d'ovaire de hamster d'atpase]

Catégorie : Protocoles de microscopie : Protocoles de formation image de Vivre-Cellule

Utilisant les protéines confocal de microscope de laser-lecture et de fusion de GFP dans la formation image de temps-faute visualiser le comportement des organelles et le dépister membrane-bondissent les intermédiaires de transport qui bourgeonnent hors fonction des organelles. Les issues pratiques ont associé à la construction et l'expression des protéines de fusion de GFP sont discutées. Essentiel pour optimaliser les niveaux d'éclat et d'expression des protéines de fusion de GFP de sorte qu'intracellulaire membrane-bondissiez les structures contenant ces protéines de fusion peut être aisément visualisé. - [Formation image lue des systèmes de membrane d'organelle et du trafic de membrane en cellules vivantes]

Catégorie : Protocoles d'isolement et de culture de cellules primaires : Protocoles de Microdissection de saisie de laser

Protocole pour Immunoblot. Inclut : Souillure et saisie Microdissection de laser ; Séparation de protéine par l'électrophorèse de gel de polyacrylamide ; Transfert électrophorétique à une membrane (nylon, PVDF ou nitrocellulose) ; Incubations primaires et secondaires d'anticorps ; Visualisation. - [Protocole lu d'Immunoblot]

Catégorie : Protocoles occidentaux de tache : Protocoles de méthodes de détection d'antigène

La tache est bloquée pour empêcher l'adsorption non spécifique des réactifs immunologiques.  Des anticorps sont alors liés aux protéines immobilisées sur la membrane, et l'antigène est détecté en étiquetant les anticorps avec les étiquettes commodément identifiées.  Les méthodes de écriture de labels communes pour la détection chimioluminescente incluent les enzymes anticorps-couplées parimmunoglobuline telles que la peroxydase de raifort, qui catalyse l'oxydation du luminol et libère alternativement la lumière. - [Immunoblotting lu : Détection d'antigène utilisant le protocole de chimiluminescence]

Catégorie : Protocoles occidentaux de tache : Protocoles de méthodes de détection d'antigène

La tache est bloquée pour empêcher l'adsorption non spécifique des réactifs immunologiques.  Des anticorps sont alors liés aux protéines immobilisées sur la membrane, et l'antigène est détecté en étiquetant les anticorps avec les étiquettes commodément identifiées. - [Immunoblotting lu : Détection d'antigène utilisant le protocole chromogène de méthodes]

Catégorie : Protocoles occidentaux de tache : Protocoles occidentaux généraux de méthodes de tache

Le transfert des protéines à partir d'un Tris/d'un gel SDS-polyacrylamide de glycine à une membrane suivre une méthode demi-sèche est réalisé en plaçant le gel à côté d'une partie de filtre de nitrocellulose.  Ce sandwich est placé directement entre les électrodes bidisques, et les protéines sont alors transférées à partir du gel sur le filtre. - [Immunoblotting lu : Transfert électrophorétique demi-sec des protéines à partir des gels au protocole de membranes]

Catégorie : Protocoles occidentaux de tache : Protocoles occidentaux généraux de méthodes de tache

Le transfert des protéines à partir d'un Tris/d'un gel SDS-polyacrylamide de glycine à une membrane suivre la méthode submergée est réalisé en plaçant le gel à côté d'une partie de filtre de nitrocellulose, submergeant ce sandwich dans un de large volume de la mémoire tampon de transfert dans un réservoir de transfert, et exécutant le courant d'un côté du réservoir de transfert à l'autre.  Les protéines sont alors éluées en les transférant à partir du gel sur le filtre. - [Immunoblotting lu : Transfert électrophorétique submergé des protéines à partir des gels au protocole de membranes]