protocoles mammifères

Catégorie : Protocoles de microscopie : Protocoles de formation image de Vivre-Cellule

Ce protocole décrit une préparation scellée qui permet l'observation à long terme continue des cellules mammifères cultivées sur le montant ou des microscopes inversés sans commande environnementale de CO2. La préparation tient compte des conditions optiques compatibles à la formation image de haute qualité et à la bonne viabilité de cellules pendant au moins 100 heures. - [Lu une préparation scellée pour des observations à long terme des cellules cultivées]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Une amorce d'oligodeoxynucleotide hybridée à l'ADN messagère est étendue par un ADN polymérase ARN-dépendant pour créer une copie de cDNA qui peut être amplifiée par ACP.  Selon le but de l'expérience, l'amorce pour la synthèse de cDNA de premier-brin peut être spécifiquement conçue pour hybrider à un gène particulier de cible, ou une amorce générale telle qu'oligo (décollement) peut être utilisée pour amorcer la synthèse de cDNA essentiellement de tous les mRNAs mammifères - [amplification lue de cDNA produite par la transcription renversée du protocole d'ADN messagère]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

L'analyse pour la ß-galactosidase se fonde sur la capacité de l'enzyme de catalyser l'hydrolyse d'ONPG (galactopyranoside o-nitrophénylique-ß-d) pour libérer l'o-nitrophénol, qui absorbe la lumière à 420 nanomètre. Dans ce protocole, des extraits des cellules transfected avec un plasmide de journaliste de ß-galactosidase sont incubés avec ONPG. - [Analyse lue pour la ß-galactosidase en extraits des cellules mammifères]

Catégorie : Protocoles de levure : Protocoles de la génétique de levure : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

Dans ce protocole, des extraits des cellules transfected avec un plasmide de journaliste de ß-galactosidase sont incubés avec ONPG. - [Analyse lue pour la ß-galactosidase en extraits de protocole de cellules mammifères]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de Luciferase

Dans ce protocole, des cellules transfected avec un plasmide de journaliste de luciferase sont lysées dans une mémoire tampon contenant un détergent. Luciferase dans l'extrait catalyse une réaction d'oxydation dans laquelle D-luciferin est converti en oxyluciferin, à la production de la lumière à 556 nanomètre qui peuvent être mesurés dans un luminometer. - [Analyse lue pour Luciferase en extraits de protocole de cellules mammifères]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Protocoles stériles de technique

Des cellules mammifères cultivées sont utilisées intensivement dans des études de biologie de cellules ; elle exige un certain nombre de qualifications spéciales afin de pouvoir préserver la structure, la fonction, le comportement et la biologie des cellules. Cette unité décrit les qualifications de base exigées pour mettre à jour et préserver des cultures de cellules : technique aseptique, caractéristiques moyennes, passage, congélation et mémoire, récupération des stocks congelés, et compte des cellules viables. - [Techniques de base lues pour le protocole de culture de tissu de cellules mammifères]

Catégorie : Protocoles d'isolement et de culture de cellules primaires : Protocoles de culture de cellules mammifères

Des cellules mammifères cultivées sont utilisées intensivement dans des études de biologie de cellules ; elle exige un certain nombre de qualifications spéciales afin de pouvoir préserver la structure, la fonction, le comportement et la biologie des cellules. Cette unité décrit les qualifications de base exigées pour mettre à jour et préserver des cultures de cellules : technique aseptique, caractéristiques moyennes, passage, congélation et mémoire, récupération des stocks congelés, et compte des cellules viables. - [Techniques de base lues pour le protocole de culture de tissu de cellules mammifères]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules

Techniques sur la façon dont créer des gradients d'iodixanol pour le fractionnement des cellules mammifères. Ces gradients peuvent être produits en tant que gradients discontinus ou continus préformés. Ces gradients sont invariablement exécutés dans des rotors de balancer-position dans les centrifugeuses à vitesse réduite. - [Préparation C2 lue des gradients préformés d'iodixanol pour les cellules mammifères.]

Catégorie : Protocoles de Microinjection : Matériel de Microinjection

Ce protocole décrit une méthode facile pour calibrer les extrémités de micropipette qui ont été tirées dedans le laboratoire. Il est essentiel d'estimer le diamètre interne de l'extrémité tirée de micropipette en ajustant des paramètres à un nouvel extracteur ou à un nouveau type de tuyauterie en verre. Un diamètre d'extrémité du µm ~0.3 est optimal pour le microinjection des cellules mammifères dans la culture (par exemple, CHO, PtK1, et COS-7). Une augmentation de 10% de diamètre augmente la cadence de la livraison par plus de 30% et peut endommager cellules. - [L'étalonnage lu de la micropipette incline des protocoles]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles de bibliothèque d'ADN de Genomic

Cette étape récapitule comment construire une bibliothèque de cDNA dans un vecteur mammifère, utilisant les kits commerciaux. Ces kits sont fournis par plusieurs constructeurs et incluent généralement tous les réactifs exigés. - [Construction lue des bibliothèques de cDNA dans des vecteurs eucaryotiques d'expression pour la construction et le criblage]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de Luciferase

Il est possible que quelques variétés de cellule aient détruit la capacité d'exécuter RNAi ou que les cellules dérivées de certains tissus ne supportent pas RNAi. Cette analyse de journaliste, pour RNAi en cellules mammifères, peut être employée pour établir si les cellules à l'étude sont susceptibles de RNAi. - [Cotransfection lu des plasmides de journaliste de Luciferase avec le siRNA duplexe le protocole]

Catégorie : Protocoles de technologie de RNAi : Protocoles de cellules mammifères de RNAi

Cette analyse de journaliste, pour RNAi en cellules mammifères, peut être employée pour établir si les cellules à l'étude sont susceptibles de RNAi. - [Cotransfection lu des plasmides de journaliste de Luciferase avec le siRNA duplexe le protocole]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Enregistrer de cellules et protocoles de congélation de cellules

Le protocole fournit des méthodes pour le dégel cryofreezing et ultérieur des cellules mammifères. des cellules Pré-confluentes sont trypsinisées, granulées, resuspendues dans le support de congélation, et graduellement gelées. Une fois nécessaires, des cellules congelées sont dégelées rapidement sous l'eau du robinet courante et transférées au support de croissance. - [Cryopreservation lu des cellules de culture mammifères : Préparation et reprise de protocole d'échantillons]

Catégorie : Immunologie : Protocoles d'immunoprécipitation : Protocoles d'immunoprécipitation de protéine

Le protocole décrit une immunoprécipitation de dénaturisation (IP) pour les cellules mammifères. Préférez utiliser dénaturer l'IPS pour récupérer les protéines étiquetées de impulsion-chassent des expériences. L'utilisation de dénaturer l'IPS réduit le fond considérablement. - [Lu dénaturant l'immunoprécipitation de protéine du protocole de cellules mammifères]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Protocoles d'empêchement et de déplacement de contamination de culture de cellules

Le protocole décrit une méthode pour la détection de mycoplasma utilisant Hoechst 33258, un colorant fluorescent cette ADN de taches. La souillure de la matière particulaire d'ADN autour du noyau de cellules (sur la surface de cellules ou dans le cytoplasme) est indicative de la contamination de mycoplasma. - [Détection lue de mycoplasma dans des cultures de cellules mammifères utilisant le protocole de microscopie de fluorescence]

Catégorie : Protocoles de technologie de RNAi : Protocoles de cellules mammifères de RNAi

Le protocole décrit l'utilisation d'éponger occidental pour analyser l'épuisement RNAi-induit de la protéine de cible des cellules mammifères.  L'immunofluorescence peut être utilisée comme alternative. - [Détection lue de précipitation RNAi-Induite de protéine en cellules mammifères par protocole épongeant occidental]

Catégorie : Protocoles occidentaux de tache

Le protocole décrit l'utilisation d'éponger occidental pour analyser l'épuisement RNAi-induit de la protéine de cible des cellules mammifères.  L'immunofluorescence peut être utilisée comme alternative. - [Détection lue de précipitation RNAi-Induite de protéine en cellules mammifères par protocole épongeant occidental]

Catégorie : Protocoles de la livraison de gène : Protocoles de Biolistics

Dans ce protocole, des particules d'or ou de tungstène sont enduites de l'ADN et ont puis tiré d'un pistolet dans des couches unitaires des cellules mammifères. - [Transfection lue d'ADN par Biolistics Protocol]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste

Protocole décrivant l'ecdysone comme régulateur d'expression de gène induisible en cellules mammifères. - [Ecdysone lu comme régulateur d'expression de gène induisible en cellules mammifères]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles d'électroporation de cellules

Électroporation des variétés de cellule avec de l'ADN. Électroporation pour la transfection efficace des cellules mammifères avec de l'ADN. Immunologie cellulaire Oxford de Chu et autres - [électroporation lue des variétés de cellule avec de l'ADN]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules

Le protocole décrit une méthode pour l'évaluation du nombre de cellules mammifères dans un volume défini de support utilisant un hémocytomètre. Les méthodes automatisées utilisant des dispositifs de comptage de cellules comme ceux produits par Coulter sont désirables quand un grand nombre de différents échantillons doivent être comptés. - [Évaluation lue du nombre de cellules par protocole de Hemocytometry Counting]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles de bibliothèque d'ADN de Genomic

Le protocole décrit comment construire et amplifier une bibliothèque genomic d'ADN dans un vecteur de plasmide (pSPL3) équipé pour exprimer les exons copiés en cellules mammifères transfected. - [Emprisonnement et amplification lus d'Exon pour la construction du protocole de bibliothèque]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles sous-cellulaires de fractionnement

Acidocalcisomes, les organelles calcium-enregistrantes acides denses, qui ont été initialement identifiées dans le cruzi de Trypanosoma, n'ont aucun parallèle en cellules mammifères. Elles représentent ainsi une seule caractéristique fonctionnelle, non partagée par le serveur et par conséquent offrent une cible potentielle importante pour la chimiothérapie de la maladie de Chagas. - [Fractionnement lu d'Acidocalcisomes et d'autres organelles de Trypanosoma, de Leishmania, chlamydomonas]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Techniques de culture de cellules : Congélation de conservation de variété de cellule

Congélation et dégel des variétés de cellule mammifères. Pour l'entreposage à long terme des cellules de myélome, des cellules d'hybridome, des cellules de T, et d'autres variétés de cellule mammifères l'azote liquide, et en les restaurant dans la culture. Laboratoire le Texas de Kitto. - [Congélation et dégel lus des variétés de cellule mammifères]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Enregistrer de cellules et protocoles de congélation de cellules

Pour l'entreposage à long terme des cellules de myélome, des cellules d'hybridome, des cellules de T, et d'autres variétés de cellule mammifères l'azote liquide, et en les restaurant dans la culture. - [Congélation et dégel lus du protocole mammifère de variétés de cellule]