intéressez les protocoles

Catégorie : Isolement de cellules primaires et protocoles de culture : Protocoles de Microdissection de Saisie de Laser : Préparation de tissu pour des protocoles de LCM

Cellules ou tissus spécifiques d'isolats de LCM des échantillons montés sur des glissières de microscope. Les échantillons sont visualisés par un film thermoplastique qui est fixé à un couvercle de tube de microcentrifuge. La chaleur localisée, provoquée par l'application d'une impulsion de laser, fond la membrane aux cellules d'intérêt, qui peuvent alors être moissonnées pour davantage d'analyse. L'ARN et les protéines peuvent être épurés des cellules d'isolement, permettant l'analyse détaillée de l'expression de gène. Ce protocole est divisé en trois étapes. - [Lu (LCM) : Préparation et sectionnement des blocs gelés de tissu et purification de l'ARN du cel d'isolement]

Catégorie : Protocoles de PCR : Protocoles de Synthèse d'ADN

Pour produire des "3'-fins que" l'ADN partielle copie, mRNA renversé-est transcrit à l'aide d'une amorce "hybride" (Qtotal, quart) qui se compose de deux bases mélangées (GATC/GAC a suivi près [ T]17) et un seul ordre de l'oligonucléotide 35-base (QI-QO).  L'amplification est alors exécuté en utilisant une partie contenante mieux habillée de cet ordre (Qouter, Qo) (qui lie maintenant à chaque ADN à ses 3'-fins) et une amorce dérivée du gène d'intérêt, GSP1 (amorce gène-spécifique 1). - [Amplification Lu d'ADN de 3'-Fins En utilisant Le Protocole Classique de RACE]

Catégorie : Protocoles de PCR : Protocoles de Synthèse d'ADN

Nouveau RACE, une variation de l'ARN ligase-mediated-RACE (RLM-RACE) (Liu et Gorovsky 1993) s'écarte de RACE classique (voir l'amplification d'ADN de 5'-Fins en utilisant RACE classique) parce qu'une amorce de "point d'attache" est attachée aux 5'-fins du mRNA avant l'étape renversée de transcription ; par conséquent l'ordre de point d'attache devient incorporé à l'ADN de premier-brin si, et seulement si, la transcription renversée procède par la longueur entière du mRNA d'intérêt. - [Amplification Lu d'ADN de 5'-Fins En utilisant Le Nouveau Protocole de RACE]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules

Le protocole présenté en cette feuille d'application utilise une stratégie alternative à la sédimentation en fonction à une barrière de densité, ce doit ajuster la densité du sang entier sur une valeur juste plus grande que les cellules d'intérêt et leur permettre de flotter sur la surface. - [isolement C8 lu des cellules mononucléaires de sang périphérique de bovin par flottaison.]

Catégorie : Immunologie : Chemotaxis

Analyse de Chemotaxis, Laboratoire de Springer. La fonction d'une analyse de chemotaxis est d'évaluer si un facteur ou une molécule d'intérêt a l'activité chimiotactique sur un type motile de cellules. Chemotaxis est la capacité d'un facteur de causer le transfert d'une cellule. L'analyse chimiotactique est basée sur la création d'un gradient chimique de l'agent chimiotactique qui fera passer des cellules par le gradient vers l'agent chimiotactique. - [Analyse Lue de Chemotaxis]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules

Ce protocole d'analyse de chemotaxis est basé sur les lieux de créer un gradient de l'agent chimiotactique et de permettre à des cellules de passer par une membrane vers l'agent chimiotactique. Une analyse de chemotaxis peut déterminer si votre protéine ou petite molécule d'intérêt a l'activité chimiotactique sur un type spécifique de cellules. Chemotaxis est alors la capacité d'une protéine de diriger le transfert d'une cellule spécifique. - [Protocole Lu d'Analyse de Chemotaxis]

Catégorie : Immunologie : Protocoles d'Immunoprécipitation : Protocoles d'Immunoprécipitation de Chromatin

Le protocole décrit l'utilisation de la technologie d'immunoprécipitation de chromatin (puce) d'analyser des interactions des protéines ou des complexes de protéine avec de l'ADN in vivo. Dans cette approche, le matériel est fixé avec du formaldéhyde pour préserver des associations d'ADN-PROTÉINE et de protéine-protéine, les cellules sont lysées, et le chromatin est coupé et solubilisé. La suspension de chromatin est immunoprecipitated avec de l'anticorps contre le protein(s) d'intérêt, et coimmunoprecipitated des fragments d'ADN sont analysés. - [immunoprécipitation lue de Chromatin (puce) de protocole de complexes de protéine]

Catégorie : Protocoles de Technologie de RNAi : Embryons de souris de RNAi et protocoles d'Oocytes

Le protocole décrit une méthode pour rassembler les embryons tôt des souris 6-week-old.  Ultérieurement, les embryons d'isolement peuvent être injectés avec de l'ARN bicaténaire pour induire la précipitation d'un gène d'intérêt. - [collection lue d'embryons tôt de souris pour le protocole de RNAi]

Catégorie : Protocoles de Technologie de RNAi : Embryons de souris de RNAi et protocoles d'Oocytes

Le protocole décrit une méthode pour rassembler des oocytes des souris 6-week-old.  Ultérieurement, les oocytes d'isolement peuvent être injectés avec de l'ARN bicaténaire pour induire la précipitation d'un gène d'intérêt. - [collection lue de souris Oocytes pour le protocole de RNAi]

Catégorie : Protocoles de PCR : Protocoles Renversés de Transcriptase RT-PCR

La première étape dans RT-PCR concurrentiel est la synthèse et la purification du concurrent synthétique.  C'est une molécule d'ARN conçue renversé-pour être transcrit et PCR-amplified avec la même efficacité que la transcription endogène d'intérêt.  Une fois que la molécule de concurrent a été préparée, comme décrit dans ce protocole, PCR concurrentiel peut être effectué. - [RT-PCR Concurrentiel Lu : Préparation de protocole d'ARN de concurrent]

Catégorie : Protocoles De Biologie d'Usine : Protocoles de Génétique Végétale

Le gène viro-induit amortissant (VIGS) emploie un virus pour fournir un ordre d'un gène d'intérêt dans une usine de centre serveur. Le virus portant le fragment du gène d'intérêt doit être capable de la réplique si le dsRNA doit être produit. Un ou deux feuilles sont inoculées avec des contraintes d'agrobactérie portant le vecteur de VIGS possédant le fragment de gène. Les répliques de virus puis et les diffusions dans toute l'usine, amortissement de médiation. - [la livraison lue du dsRNA dans des usines par méthodologie de VIGS]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles de Bibliothèque d'ADN de Genomic

Les cellules COS-7 sont transfected avec une bibliothèque des plasmides contenant l'ADN genomic d'intérêt. - [Electroporation lu de la bibliothèque dans cellules COS-7 pour emprisonner et amplification d'Exon]

Catégorie : Protocoles De Biologie d'Usine : Protocoles de la Génétique d'Arabidopsis

Le SME est utilisé aux concentrations qui induisent des mutations multiples de point à chaque usine, telles que des allèles de mutant d'un lieu spécifique sont trouvés à une cadence de ~1 aux usines de 2000-5000 m2. Cette cadence élevée de la mutagénèse rend le criblage possible de relativement peu d'usines pour trouver ceux avec le phénotype d'intérêt, un avantage particulier si l'écran est laborieux ou si seulement un nombre restreint de gènes subissent une mutation au phénotype exigé. - [mutagénèse lue de SME de protocole de graine d'Arabidopsis]

Catégorie : Protocoles de PCR : Optimisation de PCR

Méthode pour amplifier l'ADN enzymatiquement par la réaction en chaîne de polymérase (PCR), y compris des procédures pour déterminer rapidement des conditions pour l'amplification réussi de l'ordre et des ensembles mieux habillés d'intérêt, et pour les optimaliser pour la spécificité, la sensibilité, et le rendement.  La première étape de PCR nécessite simplement de mélanger l'ADN de descripteur, deux amorces appropriées d'oligonucléotide, le Taq ou d'autres polymérases thermostables d'ADN, les triphosphates de deoxyribonucleoside (dNTPs), et une mémoire tampon. - [amplification enzymatique lu de l'ADN par PCR : Procédures et protocole standard d'optimisation]

Catégorie : Protocoles de PCR

Le protocole est le premier dans un ensemble d'affichage différentiel décrivant du mRNA trois fluorescent (FDD ou FDDRT-PCR).  La méthode commence par la moisson de l'ARN total des cellules tissu-cultivées d'intérêt.  Pour d'autres produits de départ, tels que des échantillons de sang, voir s'il vous plaît l'extraction et la purification de l'ARN des échantillons de sang pour l'affichage différentiel de mRNA fluorescent. - [extraction et purification lues de l'ARN des cellules Tissu-Cultivées pour le différentiel fluorescent de mRNA]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles de Bibliothèque d'ADN de Genomic

Des techniques standard sont employées ici pour isoler l'ARN cytoplasmique des cellules de COS transfected avec une bibliothèque des plasmides de recombinaison contenant l'ADN genomic d'intérêt. - [lu moissonnant le mRNA pour emprisonner et amplification d'Exon]

Catégorie : Immunologie : Protocoles d'Immunoprécipitation : Immunoprécipitation des protocoles radioactifs de cellules

Coimmunoprecipitation le plus généralement est employé pour tester si deux protéines d'intérêt sont associées in vivo, mais il peut également être employé pour identifier les associés agissants l'un sur l'autre de roman d'une protéine de cible. Dans les deux cas, les cellules, avec lesquelles peut avoir été étiqueté [ 35S]methionine, sont moissonnés et lysés dans les conditions qui préservent des interactions de protéine-protéine. La protéine de cible est immunoprecipitated spécifiquement des extraits de cellules, et les immunoprecipitates sont fractionnés par SDS-PAGE. - [identification lue des protéines associées par Coimmunoprecipitation Protocol]

Catégorie : Protocoles Occidentaux de Tache

L'immunoprécipitation de protéine peut être une étape préparatoire utile pour immunoblotting.  Pour les protéines très rares, la protéine d'intérêt peut être épurée et concentrée par des techniques standard d'immunoprécipitation avant d'immunoblotting.  En outre, des interactions de protéine-protéine peuvent être testées avec de l'anticorps immunoprecipitating qui est spécifique pour une protéine d'un complexe et d'un anticorps immunoblotting qui est spécifique pour un deuxième membre du complexe. - [Immunoblotting Lu : Préparant Le Protocole de Protéines d'Immunoprecipitated]

Catégorie : Immunologie : Protocoles d'Immunoprécipitation

Protocole pour l'immunoprécipitation des complexes de mRNA-protéine. Dans ce protocole, un anticorps visant un RBP d'intérêt est utilisé à l'immunoprecipitate le RBP et toutes les molécules agissantes l'un sur l'autre d'un lysate de cellules. La transcription renversée suivie de PCR est alors employée pour identifier différents mRNAs d'isolement avec le RBP. Cette méthode se concentre sur examiner une association entre un complexe spécifique de RBP-mRNA, et elle est plus adaptée pour un criblage à échelle réduite des associés obligatoires connus ou putatifs. - [immunoprécipitation lue de protocole de complexes de mRNA-Protéine]

Catégorie : Isolement de cellules primaires et protocoles de culture : Protocoles de Microdissection de Saisie de Laser

LCM utilise un laser infrarouge intégré dans un microscope standard. Un chapeau transparent est fixé à une membrane transparente thermoplastique qui se trouve directement sur la surface d'une section par habitude préparée de tissu sur une plaque en verre. L'investigateur examine la section de tissu au microscope et lance le laser quand les cellules désirées sont à la base de la cible. Ceci lance alternativement la membrane avec l'attache ultérieure et la fourniture des cellules d'intérêt. - [Saisie Lue Microdissection (LCM) De Laser]

Catégorie : Isolement de cellules primaires et protocoles de culture : Protocoles de Microdissection de Saisie de Laser

La technologie de LCM peut moissonner les cellules d'intérêt directement ou peut isoler les cellules spécifiques en coupant les cellules non désirées parties pour donner les populations enrichies histologiquement pures de cellules. Une variété d'applications descendant existent : ADN genotyping et perte--heterozygosity de l'analyse (LOH), etc... Le protocole fournit à une description complète des techniques de LCM, une emphase sur des extrémités et le conseil de dépannage dérivés des utilisateurs de LCM. Tout le temps requis pour effectuer ce protocole est en général 1-1.5 h. - [Lu Laser-capturez Le Protocole de Microdissection]

Catégorie : Protocoles De Purification d'Acide Nucléique

Des préparations de l'ARN contenant un mRNA d'intérêt sont hybridées à une sonde simple-échouée complémentaire d'ADN.  À l'extrémité de la nucléase de réaction S1 est employé pour dégrader unhybridized des régions de la sonde, et les hybrides de la survie DNA-RNA sont alors séparés par l'électrophorèse de gel et visualisés par l'autoradiographie ou l'hybridation méridionale.  La méthode pour doser RNAs, pour tracer les positions des introns, et identifiait les emplacements des fins 5'et 3'des mRNAs sur les descripteurs copiés d'ADN. - [lu traçant l'ARN avec le protocole de nucléase S1]

Catégorie : Protocoles De Modification d'Acide Nucléique : Protocoles de Radiolabeling d'Acide Nucléique

Des préparations de l'ARN contenant un mRNA d'intérêt sont hybridées à une sonde simple-échouée radioactive d'ARN. La méthode peut être employée pour doser RNAs, pour tracer les positions des introns, et pour identifier les emplacements des fins 5'et 3'des mRNAs sur les descripteurs copiés d'ADN. - [lu traçant l'ARN avec la ribonucléase et le protocole radioactif de sondes d'ARN]

Catégorie : Protocoles De Biologie d'Usine

Le protocole standard pour des hybridations in situ aux usines implique toujours de fixer le tissu frais, encastrant le tissu en cire, sectionnant d'un microtome et la détection des transcriptions d'intérêt utilisant étiquetées ARN-SONDE. Ce protocole se concentre seulement sur des méthodes non radioactives, car il est facile les exécuter, plus rapide très sensible et encore que des techniques impliquant des étiquettes de radio-isotope. - [analyse moléculaire et biochimique lue de protocole d'Arabidopsis]

Catégorie : Protocoles de PCR : Protocoles En temps réel de PCR

Dans le temps réel multiplex PCR, différents ensembles d'amorces avec différentes étiquettes sont utilisés pour amplifier les gènes séparés de l'ADN de descripteur dans un tube.  Ce protocole utilise des amorces du LUX (lumière sur l'extension) d'invitrogen.  FAM (6-carboxy-fluorescéines) est employé pour étiqueter le gène d'intérêt, et JOE (6-carboxy-4 ', 5'-dichloro-2', 7'-diméthoxy-fluorescéines) est utilisé pour étiqueter un gène de ménage comme commande interne pour normaliser entre différentes réactions. - [Protocole Multiplex Lu de Temps réel PCR]