protocoles importants

Catégorie : Protocoles de biologie d'usine : Protéines végétales, peptides et antigènes

Le pH est un paramètre important contrôlant beaucoup de voies métaboliques et signalantes en cellules vivantes. Les indicateurs de pH fluorescents de recombinaison (pHluorins) ont hérité la mode pour la surveillance pH cellulaire. Ils sont dérivés de l'Aequorea le plus populaire Victoria GFP (Poids du commerce-GFP). Ici, nous présentons un journaliste fluorescent original de pH que la protéine de l'orange seapen le gurneyi de Ptilosarcus (Pinte-GFP) et comparons ses propriétés aux pHluorins pour l'expression et l'usage aux usines. - [Lu une sonde fluorescente originale de pH pour l'expression aux usines]

Catégorie : Protocoles de purification d'acide nucléique

Protocole pour une méthode en pas à pas pour la préparation simultanée de l'ADN, de l'ARN, et de la protéine des cellules et des tissus. Le rendement d'ARN total dépend de la source de tissu ou de cellules, mais il est généralement dans l'intervalle de 4-7 µg/mg commençant le tissu ou 5-10 cellules µg/106.  IMPORTANT : Préparez tous les réactifs utilisés dans ce protocole avec du pyrocarbonate diéthylique (DEPC) - H2O traité. - [Lu une méthode en pas à pas pour la préparation simultanée de l'ADN, de l'ARN, et de la protéine des cellules et du tissu]

Catégorie : Protocoles d'ACP : La conversion de bisulfite a basé des protocoles d'ACP

Protocole pour bisulfite-ACP pour l'analyse et/ou l'ordonnancement de restriction. Bisulfite-ACP suivi de la restriction est une méthode rapide et semi-quantitative d'analyser la méthylation d'ADN.  Les produits d'ACP sont également appropriés à l'ordonnancement direct ou au clonage et à l'ordonnancement.  L'étape la plus importante ici est sélection d'amorce. - [Bisulfite-ACP lu pour l'analyse de restriction et/ou le protocole d'ordonnancement]

Catégorie : Protocoles d'Immortalization de cellules

L'information pourquoi l'immortalization de cellules est important. Également les outils disponibles à pouvoir exécuter l'immortalization de cellules. - [Cellule lue Immortalization]

Catégorie : Protocoles de protéine : Extraction de protéine à partir des cellules

Extraits de Lysate de cellules. Grands protocoles pour la préparation de lysis de cellules à partir d'une série de types de cellules. Il y a de nombreuses méthodes de stimulation et de lysis de cellules. Pour une protéine donnée, les laboratoires d'Upstate’s déterminent le traitement spécifique sur le test initial de ses produits. Il est important de choisir la variété de cellule, le procédé de stimulation (le cas échéant), et le protocole corrects de lysis. Hors de la ville. - [Extraits lus de Lysate de cellules]

Catégorie : Protocoles de biologie moléculaire : Digestion d'enzymes de restriction

Enzymes de clonage un guide Promega. Une série de guide de ressource d'enzymes, points culminants ces enzymes importantes des procédures de clonage d'acide nucléique. Promega - [enzymes de clonage lues un guide Promega]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de viabilité de cellules

Les analyses cellulaires sont les outils importants pour la découverte contemporaine de biologie et de drogue en raison de leur potentiel prédictif pour des applications in vivo. Cette analyse donne les valeurs quotientométriques et inversement proportionnelles de la viabilité et la cytotoxicité (le schéma 4.15) qui sont utiles pour normaliser des données au nombre de cellules. En outre, ce réactif est compatible avec des chimies fluorescentes et luminescentes supplémentaires. - [Lu déterminant le nombre de cellules de phase et mortes dans la population de cellules : Protocole d'analyse de cytotoxicité]

Catégorie : Protocoles artificiels bactériens de chromosome de BACs

L'ordonnancement des conditions a déterminé l'ABI Grand-Teignent les programmes finisseurs (PE-ABI #4303150 pour le kit 1000 de réaction - description : TF, KIT BTD RR-1000) avec de divers descripteurs. Important pour doser tous les descripteurs par l'électrophorèse de gel d'agarose contre des normes de taille et de concentration et pour faire quelques essais avec différentes concentrations de descripteur pour déterminer les conditions optimales pour vos réactions. Plusieurs conditions sont données. - [Protocoles et notes lus de colorant pour cosmide, CCB, CCB, descripteurs de Fosmid]

Catégorie : Protocoles d'organelle de cellules : Protocoles sous-cellulaires de fractionnement

Acidocalcisomes, les organelles calcium-enregistrantes acides denses, qui ont été initialement identifiées dans le cruzi de Trypanosoma, n'ont aucun parallèle en cellules mammifères. Elles représentent ainsi une seule caractéristique fonctionnelle, non partagée par le serveur et par conséquent offrent une cible potentielle importante pour la chimiothérapie de la maladie de Chagas. - [Fractionnement lu d'Acidocalcisomes et d'autres organelles de Trypanosoma, de Leishmania, chlamydomonas]

Catégorie : Protocoles de cellules de tige

Ce protocole décrit une méthode pour geler et dégeler des cellules d'es utilisant des cryovials. Il est important de geler des stocks de cellules d'es aussitôt que possible pour réduire le temps qu'ils sont dans la culture. Un enregistrement soigneux devrait être gardé du nombre de fois où des cellules sont passées et l'emplacement des cryovials. - [Congélation et dégel lus des cellules embryonnaires de tige (es) utilisant le protocole de Cryovials]

Catégorie : Protocoles occidentaux de tache : Protocoles occidentaux généraux de méthodes de tache

Pour des expériences immunoblotting, il est souvent important de comparer le montant total d'un antigène de beaucoup de différentes sources ou d'apprendre si une source particulière a l'antigène à l'étude.  Dans l'approche décrite ici, des cultures de tissu, les bactéries, les cellules de levure, les tissus, et d'autres sources des antigènes sont perturbés directement dans un échantillon d'électrophorèse. - [Immunoblotting lu : Préparant le protocole de Lysates de cellules]

Catégorie : Protocoles de cytogénétique

Karyotyping est un outil valable de recherches utilisé pour déterminer le complément de chromosome dans les cellules cultivées. Il est important de maintenir dans l'esprit que les karyotypes évoluent avec la culture continue. En raison de cette évolution, il est important pour la traduction de biochimique ou d'autres données, ces le karyotype d'une secondaire-ligne spécifique soient déterminées. - [Protocole lu de Karyotyping]

Catégorie : Protocoles d'isolement et de culture de cellules primaires

Il y a plusieurs méthodes manuelles qui peuvent être employées pour exécuter le microdissection de tissu. Des techniques utilisant les outils tenus dans la main comme des approches micromanipulateur-basées mécaniques ont été décrites. Cependant, la vitesse et la précision sont les paramètres les plus importants et n'importe quelle méthode qui réalise ces derniers est adéquate. Les investigateurs devraient également compter investir le temps au commencement par la pratique sur 10 à 20 cas à commencer à se sentir confortables avec la technique. - [Microdissection manuel lu]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles d'Apoptosis : Analyse d'Apoptosis

Mesure d'Apoptosis et d'autres formes de la mort de cellules. Jagan Muppidi, bagagiste de mélisse, et Richard M. Siegel. Pendant que la mort programmée de cellules (PCD) ou l'apoptosis a émergé comme régulateur important du développement et de l'homéostasie dans les organizations multicellulaires, des méthodes pour mesurer l'apoptosis et pour le distinguer de la nécrose ont été développées. Cette unité présente un ensemble d'analyses dans ces buts, beaucoup dont soyez techniquement très simple et idéalement adapté à l'étude des cellules hématopoïétiques. - [Mesure lue d'Apoptosis et d'autres formes de la mort de cellules]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules de levure : Medias de levure, solutions et protocoles de stocks

La levure, Saccharyomyces cerevisiae, est devenue une organization importante dans l'analyse moléculaire, biochimique, et génétique. L'organization a des conditions spécifiques pour la croissance dans une série de conditions. Les medias, liquide et plein, simple, définissent, et le complexe sont décrivent dans cette unité. Également incluses sont des méthodes pour la manipulation, enregistrer, et les actions de expédition de la levure. - [Medias et culture lus de protocole de levure]

Catégorie : Protocoles d'anticorps : Protocoles de production d'anticorps

Protocole pour la fusion de production d'anticorps monoclonal. La fusion est un procédé important pour produire les anticorps monoclonaux (Moab). - [Protocole lu de fusion de production d'anticorps monoclonal]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Biologie et culture de cellules de tige d'es

Boris Greber. Règles importantes pour la culture de cellules d'es, signes de différentiation, extrémités générales, support d'es, cellules du dégel es, congélation, passant. - [Culture embryonnaire lue de cellules de tige de souris (es) - procédures de base]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Protocoles d'empêchement et de déplacement de contamination de culture de cellules

Un des plus importante, mais fréquemment donné sur, des procédures de culture de cellules est des cultures de test pour la contamination microbienne, particulièrement mycoplasma. Il est critique que chaque laboratoire de culture de cellules utilise seulement les variétés de cellule qui ont été soigneusement examinées pour le mycoplasma. Heureusement, il y a une ADN simple de fluorochrome souillant l'essai qui peut détecter le mycoplasma et pratiquement tous les autres contaminants de prokaryote. - [Détection lue de mycoplasma utilisant l'ADN souillant le protocole]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Protocoles d'empêchement et de déplacement de contamination de culture de cellules

Pour des raisons biologiques et économiques, il est important d'éliminer des mycoplasmas des cultures de cellules étant utilisées pour la recherche fondamentale, le diagnostic, et la production biotechnologique. La méthode la plus utilisée généralement pour l'élimination, l'inactivation, ou la suppression des mycoplasmas dans des cultures de cellules est traitement avec des antibiotiques. Généralement les thérapies antibiotiques n'ont pas comme conséquence l'élimination durable et réussie. En outre, les propriétés cytotoxiques des antibiotiques peuvent entraîner des effets secondaires indésirables sur des cellules. - [Protocole lu de réactif d'élimination de mycoplasma]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement

Fixation de paraformaldéhyde de protocole de cellules. Cette méthode de fixation est bonne pour des cellules étiquetées par les anticorps fluorochrome-conjugués aux antigènes de membrane.  Elle stabilisera l'éparpillement léger et l'écriture de labels pendant jusqu'à une semaine dans la plupart des exemples, te permettant d'être plus flexible le temps de cytometer d'état SCH.  En outre, elle inactive la plupart des agents biohasardeux, ainsi il est important d'un point de vue de sûreté aussi bien. Université de l'Iowa. - [Fixation lue de paraformaldéhyde des cellules]

Catégorie : Protocoles d'E Coli : Protocoles de transformation d'E coli

Le procédé produit des cultures compétentes d'Escherichia coli qui peuvent être transformées à colonies/µg transformé des fréquences (5 x 108 de l'ADN superhelical de plasmide). IMPORTANT toutes les étapes dans ce protocole devraient être effectuées aseptiquement. - [Préparation et transformation lues de protocole compétent d'Escherichia coli]

Catégorie : Protocoles de protéine : Précipitation Procols de protéine

Le nettoyage d'échantillon de laboratoire est une pièce nécessaire pour l'analyse analytique de préparation. Le déplacement des contaminants tels que des protéines, des débris de cellules et d'autres matériaux est une étape importante. Typiquement ceci a été fait en employant l'acétonitrile et alors centrifugation pour granuler les débris partant du supernant propre. Après que ce surnageant de processus puisse être employé pour l'analyse approfondie par HPLC, GC, milliseconde et d'autres méthodes de tandem d'analyse. Laboratoires de HTS. - [Précipitation lue Microplate de protéine]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles endothéliaux de cellules

Protocole endothélial mammifère primaire de cellules. Ce protocole est conçu pour les cellules endothéliales primaires d'isolement dans de divers organes des mammifères. Grandes et plates cellules, souvent avec de grands noyaux. Inclut : Réactifs requis ; Préparation et qualité d'ADN ; Préparation des cellules et de la culture de cellules ; Commandes importantes ; Protocole de Nucleofection. - [Cellules endothéliales mammifères primaires lues de protocole]

Catégorie : Protocoles de purification d'acide nucléique : Protocoles d'isolement d'ARN : fromTissues d'isolement d'ARN ou protocoles cultivés de cellules

La technique en pas à pas, cellules sont homogénéisées en sulfocyanate de guanidnium et l'ARN est purifié du lysate par l'extraction avec du phénol : chloroforme au pH réduit.  Beaucoup d'échantillons peuvent être traités simultanément et rapidement.  Le rendement d'ARN total dépend de la source de tissu ou de cellules et est généralement dans l'intervalle de 4-7 µg/ml commençant le tissu ou 5-10 cellules µg/106.  IMPORTANT : Préparez tous les réactifs utilisés dans ce protocole avec du pyrocarbonate diéthylique (DEPC) - H2O traité. - [Purification lue de l'ARN des cellules et des tissus par l'extrait de Sulfocyanate-Chloroforme d'Acid Phénol-Guanidinium]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Protocoles d'empêchement et de déplacement de contamination de culture de cellules

La qualité est importante dans tous les aspects de culture de tissu puisque la qualité c.-à-d. des medias employés par matières et d'autres réactifs) affectera la qualité des cultures et des produits dérivés de eux. Les domaines principaux de contrôle de qualité qui sont concernés pour la culture de tissu sont : La qualité des réactifs et des matériaux ; La provenance et l'intégrité des variétés de cellule ; L'action d'éviter de la contamination microbienne. - [Considérations lues de contrôle de qualité pour la culture de cellules]