libérez les protocoles

Catégorie : Protocoles de protéine : Protocoles d'Ubiquitination de protéine

Une analyse spécifique de point final pour l'ubiquitin. Rose et autres, Proc Acad national Sci Etats-Unis. 1987. Des analyses simples de point final pour l'ubiquitin libre (Ub) et pour l'enzyme de Ub-lancement sont décrites. - [Analyse spécifique lue de point final d'A pour l'ubiquitin.]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Protocoles de culture de cellules d'insecte

Ce protocole est conçu pour adapter les cellules élevées de Five™ (BTI-Tn-4) à la culture de suspension sans sérum dans le SFX-Insecte de HyQ dans 5 passages. Les prises entières de procédé d'adaptation approximativement deux semaines et les cellules adaptées en résultant ont des temps de doublement de 16 et 20 heures et minimaux groupant en suspension la culture en masse compacte. - [Adaptation lue des cellules élevées de Five™ au support d'insecte de HyQ© SFX]

Catégorie : Protocoles d'isolement et de culture de cellules primaires : Protocoles de culture de cellules mammifères

Il y a beaucoup de voies d'adapter des variétés de cellule aux medias sans sérum. On présente cinq méthodes qui sont conçues pour adapter des hybridomes à un support sans protéines. Ces protocoles peuvent exiger quelques modifications pour votre variété de cellule et conditions particulières. - [Lu adaptant des cellules à un protocole sans sérum d'environnement]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

L'analyse pour la ß-galactosidase se fonde sur la capacité de l'enzyme de catalyser l'hydrolyse d'ONPG (galactopyranoside o-nitrophénylique-ß-d) pour libérer l'o-nitrophénol, qui absorbe la lumière à 420 nanomètre. Dans ce protocole, des extraits des cellules transfected avec un plasmide de journaliste de ß-galactosidase sont incubés avec ONPG. - [Analyse lue pour la ß-galactosidase en extraits des cellules mammifères]

Catégorie : Signalisation des protocoles de transduction de signal : Protocoles de mesure de calcium

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations de calcium cytoplasmique libre, [Ca2+] I, en 264.7 cellules CRUES adhérentes cultivées, utilisant un format de plat de 96 puits. Cet objectif est atteint en utilisant le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, fluo-3, qui imprègne des membranes de cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide de Ca2+-sensitive. - [Analyse lue de calcium libre intracellulaire en 264.7 cellules CRUES]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement : Protocoles intracellulaires de mesure d'ion

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations du calcium cytoplasmique libre (Ca2+) en 264.7 cellules CRUES cultivées. Cet objectif est atteint avec le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, fluo-3, qui imprègne des cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide de Ca2+-sensitive. La fluorescence est mesurée avec le temps avec les cellules adhérentes qui ont été lavées exempt du colorant extracellulaire. - [Analyse lue de calcium libre intracellulaire en 264.7 cellules CRUES pour le protocole d'écran de Ligand]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement : Protocoles intracellulaires de mesure d'ion

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations de calcium cytoplasmique libre, [Ca2+] I, en 264.7 cellules CRUES adhérentes cultivées, utilisant des 96 - format bon de plat. Cet objectif est atteint en utilisant le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, fluo-3, qui imprègne des membranes de cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide de Ca2+-sensitive. La fluorescence pour les cellules adhérentes est mesurée avec le temps en utilisant un bas lu d'un plat de 96 puits, avec les cellules qui ont été lavées. - [Analyse lue de calcium libre intracellulaire en 264.7 cellules CRUES chargées avec protocole Fluo-3]

Catégorie : Signalisation des protocoles de transduction de signal : Protocoles de mesure de calcium

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations de calcium cytoplasmique libre, [Ca2+], en 264.7 cellules CRUES adhérentes cultivées, utilisant un format de plat de 96 puits. Cet objectif est atteint en utilisant le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, fura-2, qui imprègne des membranes de cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide de Ca2+-sensitive. - [Analyse lue de calcium libre intracellulaire en 264.7 cellules CRUES chargées avec Fura-2 (avec FLEXstation)]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement : Protocoles intracellulaires de mesure d'ion

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations de calcium cytoplasmique libre, [Ca2+] I, en 264.7 cellules CRUES adhérentes cultivées, utilisant des 96 - format bon de plat. Cet objectif est atteint en utilisant le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, fura-2, qui imprègne des membranes de cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide de Ca2+-sensitive. - [Analyse lue de calcium libre intracellulaire en 264.7 cellules CRUES chargées avec protocole Fura-2]

Catégorie : Signalisation des protocoles de transduction de signal : Protocoles de mesure de calcium

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations du calcium cytoplasmique libre (Ca2+) en cellules de B spléniques de souris dans l'absence et la présence des ligands pour des récepteurs de surface de cellules. Cet objectif est atteint avec le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, Fluo-3, qui imprègne des cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide sensible de Ca2+. - [Analyse lue de calcium libre intracellulaire en cellules de B suspendues]

Catégorie : Signalisation des protocoles de transduction de signal : Protocoles de mesure de calcium

Le protocole suivant est une méthode pour mesurer des concentrations du calcium cytoplasmique libre (Ca2+) en cellules de B spléniques de souris en présence de deux ligands. Signalant le Gateway - [l'analyse lue du calcium libre intracellulaire en cellules de B suspendues conjuguent le pdf de Ligand]

Catégorie : Signalisation des protocoles de transduction de signal : Protocoles de mesure de calcium

Protocole pour une méthode qui évalue des concentrations du calcium cytoplasmique libre (Ca2+) en cellules de B spléniques de souris dans l'absence et la présence des ligands pour des récepteurs de surface de cellules. Signalant le Gateway - [analyse lue de calcium libre intracellulaire dans le pdf suspendu de cellules de B]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement : Protocoles intracellulaires de mesure d'ion

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations du calcium cytoplasmique libre (Ca2+) en cellules de B spléniques de souris dans l'absence et la présence des ligands pour des récepteurs de surface de cellules. Cet objectif est atteint avec le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, Fluo-3, qui imprègne des cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide sensible de Ca2+-. - [Analyse lue de calcium libre intracellulaire dans le protocole suspendu de cellules de B]

Catégorie : Immunologie : Protocoles de cellules de B

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations du calcium cytoplasmique libre (Ca2+) en cellules de B spléniques de souris dans l'absence et la présence des ligands pour des récepteurs de surface de cellules. Cet objectif est atteint avec le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, Fluo-3, qui imprègne des cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide sensible de Ca2+-. - [Analyse lue de calcium libre intracellulaire dans le protocole suspendu de cellules de B]

Catégorie : Protocoles de purification d'acide nucléique : Protocoles d'isolement d'ARN

Protocole pour l'extraction et la purification de l'ARN total utilisant TRIzol OU TRI réactif. Inclut : Homogénéisation pour des suspensions de cellules ; Séparation de phase ; Précipitation d'ARN ; Lavage d'ARN ;  Redissoudre l'ARN ; Détermination de concentration et de pureté en ARN ; Préparation de l'eau RNase-libre. - [Extraction et purification lues de l'ARN total utilisant TRIzol OU TRI protocole de réactif]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Protocoles de fixation de cellules

Le traitement des cellules avec du paraformaldéhyde mène à l'établissement des réticulations chimiques entre les groupes aminés libres. Quand les réticulations joignent différentes molécules, un treillage des interactions se produit qui tient l'architecture globale de la cellule ensemble. Des solutions commerciales de formaldéhyde ne sont pas recommandées, parce qu'elles manquent des avantages d'utiliser un polymère de longueur variable, et les cellules seront simultanément fixées avec de l'alcool (habituellement méthanol). - [Cellules jointes par fixation lues dans le protocole de paraformaldéhyde]

Catégorie : Protocoles de culture de cellules : Protocoles de fixation de cellules

Le traitement des cellules avec du paraformaldéhyde mène à l'établissement des réticulations chimiques entre les groupes aminés libres. Quand les réticulations joignent différentes molécules, un treillage des interactions se produit qui tient l'architecture globale de la cellule ensemble. - [Cellules de réparation lues de suspension avec le protocole de paraformaldéhyde]

Catégorie : Protocoles d'isolement et de culture de cellules primaires : Protocoles de Microdissection de saisie de laser

Après fixation, des sections congelées immunostained dans des conditions RNase-libres utilisant une technique en trois étapes rapide de streptavidin-biotine suivie de déshydratation. Les sections immunostained sont prêtes pour LCM. Inclut : Développement d'Immuno-LCM. - [Protocole lu de Microdissection de saisie Immuno-Laser]

Catégorie : Protocoles d'Immunohistochemistry : Anticorps souillant des protocoles

Il y a plusieurs stratégies pour visualiser l'anticorps. Pour la photomicroscopie transmise, les substrats de développement de couleur pour des enzymes sont employés souvent. L'anticorps peut être directement étiqueté avec de l'enzyme. Cependant, un lien si covalent entre un anticorps et une enzyme pourrait avoir comme conséquence une perte d'enzyme et d'activité d'anticorps. Pour ces raisons plusieurs procédures de souillure multipas ont été élaborées, où des anticorps intermédiaires de lien sont utilisés. Dans cette utilisation de protocole l'ABC-kit de Vectastain. - [Immunocytochemistry lu dans le protocole de Libre-Flottement de sections]

Catégorie : Protocoles de clonage

Protocole pour ligaturer le plasmide et la cible DNAs dans l'agarose de la bas-fondre-température. La ligature dans l'agarose de la bas-fondre-température est beaucoup moins efficace que la ligature avec de l'ADN purifiée dans la solution libre et exige un grand nombre de ligase d'ADN. La méthode est utilisée principalement pour subcloning rapide des segments de l'ADN dans des vecteurs dephosphorylated et des éléments de recombinaison se réunissants. - [Lu ligaturant plasmide et cible DNAs dans le protocole d'agarose de la Bas-fondre-température]

Catégorie : Protocoles de microscopie : Protocoles in vivo de formation image

Les elegans de Caenorhabditis, un petit (les adultes sont de ~1 millimètres de long), le nématode libre-vivant de sol qui alimente sur des bactéries, est une organization idéale pour appliquer de diverses techniques de phase de microscopie. Ce protocole décrit des techniques utiles pour préparer des elegans de C. pour l'analyse au microscope de phase. Les détails de la préparation témoin dépendent de l'étape développementale du ver de terre à étudier. - [Formation image de phase lue des elegans de Caenorhabditis : Préparation des échantillons]

Catégorie : Protocoles de microscopie : Protocoles de formation image de Vivre-Cellule

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations de calcium cytoplasmique libre, [Ca2+] I, pour les 264.7 cellules CRUES adhérentes cultivées dans 8 coverglass d'un puits. Cet objectif fait utilisant le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, l'acetoxymethyl fura-2 (AM), qui imprègne des membranes de cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide de Ca2+-sensitive. La fluorescence pour les cellules adhérentes est mesurée avec le temps avec les cellules qui ont été lavées exempt du colorant extracellulaire. - [Mesures Fura-2 unicellulaires de phase lues pour déterminer le calcium libre intracellulaire]

Catégorie : Signalisation des protocoles de transduction de signal : Protocoles de mesure de calcium

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations de calcium cytoplasmique libre, [Ca2+], pour les 264.7 cellules CRUES adhérentes cultivées dans 8 coverglass d'un puits. Cet objectif fait utilisant le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, l'acetoxymethyl fura-2 (AM), qui imprègne des membranes de cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide de Ca2+-sensitive. - [Mesures Fura-2 unicellulaires de phase lues pour déterminer le calcium libre intracellulaire en 264.7 cellules CRUES]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement : Protocoles intracellulaires de mesure d'ion

Ce protocole décrit une méthode pour évaluer des concentrations de calcium cytoplasmique libre, [Ca2+] I, pour les 264.7 cellules CRUES adhérentes cultivées dans 8 coverglass d'un puits. Cet objectif fait utilisant le colorant fluorescent de Ca2+-sensitive, l'acetoxymethyl fura-2 (AM), qui imprègne des membranes de cellules comme ester et est hydrolysé dans la cellule à sa forme acide de Ca2+-sensitive. - [Mesures Fura-2 unicellulaires de phase lues pour déterminer le protocole libre intracellulaire de calcium]

Catégorie : Protocoles de chromatographie : Protocoles immobilisés de chromatographie d'affinité d'ion en métal

Le protocole est la première étape dans un procédé en trois étapes pour la préparation et l'enrichissement des phosphopeptides utilisant la chromatographie d'affinité immobilisée en métal (IMAC) pour l'identification des phosphopeptides par LC-MS/MS.  Ce procédé est employé pour préparer des extraits de protéine des cellules WEHI-231.  Cette méthode de préparation fournit les échantillons cellulaires totaux de protéine qui sont exempts de souiller les acides nucléiques. - [Extraction lue de lysis et de protéine à partir de cellules WEHI-231 avec le protocole de réactif d'isolement de TriPure]