protocoles d'amplification

Catégorie : Protocoles d'ARN : ' l'amplification rapide de RACE 3 du cDNA termine des protocoles

Le cycle d'ACP fait un pas, protocole utilisant le transcriptase renversé de l'exposant II (technologies de la vie) et la polymérase de Taq, l'amorce spécifique de gène, amorce de l'adaptateur T17 et une amorce d'adaptateur. Dr.Dawson, Nottingham. - [Lu ' l'amplification 3 rapide du cDNA termine le protocole (de RACE)]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Pour produire de « 3 ' - clones partiels de cDNA d'extrémité », ADN messagère renversé-est transcrit utilisant une amorce « hybride » (Qtotal, quart) qui se compose de deux bases mélangées (GATC/GAC suivi [T] de 17) et d'un ordre de base de l'oligonucléotide seuls 35 (QI-QO).  L'amplification est alors exécutée utilisant une amorce contenant une partie de cet ordre (Qouter, Qo) (qui lie maintenant à chaque cDNA à ses 3 ' - extrémité) et une amorce dérivée du gène d'intérêt, GSP1 (amorce gène-spécifique 1). - [' - Amplification lue de cDNA d'extrémité 3 utilisant le protocole classique de RACE]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Pour produire de « 5 ' - clones partiels de cDNA d'extrémité » utilisant RACE classique, les produits de premier-brin sont produits par la transcription renversée (extension d'amorce) d'une amorce gène-spécifique connue (GSP-RT).  Puis, un poly (A) la queue est ajoutée utilisant le deoxynucleotidyltransferase terminal (Tdt) et le dATP.  L'amplification est effectuée utilisant trois amorces. - [' - Amplification lue de cDNA d'extrémité 5 utilisant le protocole classique de RACE]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Nouveau RACE, une variation de la ligase-négocier-COURSE d'ARN (RLM-RACE) (Liu et Gorovsky 1993) s'écarte de RACE classique (voir ' - terminez l'amplification de cDNA utilisant RACE classique) parce qu'une amorce de « point d'attache » est attachée aux 5 ' - l'extrémité 5 de l'ADN messagère avant l'étape renversée de transcription ; par conséquent l'ordre de point d'attache devient incorporé au cDNA de premier-brin si, et seulement si, la transcription renversée procède par la longueur entière de l'ADN messagère d'intérêt. - [' - Amplification lue de cDNA d'extrémité 5 utilisant le nouveau protocole de RACE]

Catégorie : Protocoles de biologie d'usine : Protocoles de génétique végétale

AFLP a été conçu comme méthode sensible d'a fortement - pour que l'empreinte génétique Soit utilisée dans une série de domaines. Nous employons cette technologie pour produire des repères basés par ADN pour des gènes de clonage impliqués dans des réponses phototropic à de plus hautes usines qui seulement ont été identifiées génétiquement par phénotype de mutant. Le protocole inclut : Produisez de la population F2 (ou F-3) de recombinaison polymorphe ; Isolez l'ADN genomic ; Restriction de l'ADN ; Ligature des adaptateurs ; Pré-amplification de l'ADN de descripteur ; AFLP-PCR ; etc. - [AFLP lu pour le clonage de position]

Catégorie : Protocoles d'ACP : ACP D'AFLP

Digestion de restriction, ligature d'adaptateur, Preamplification, étapes finales d'amplification pour l'ACP d'AFLP. Protocole détaillé. Wondwossen Abebe Gebreyes - [pdf lu de protocole d'ACP d'AFLP]

Catégorie : Protocoles d'ACP : ACP D'AFLP

Digestion de restriction d'ADN de Genomic, préparation d'adaptateur, ligature des adaptateurs. Pré réactions d'amplification. Électrophorèse de gel, souillure argentée. Protocole et procédé d'AFLP. - [Protocole lu d'AFLP]

Catégorie : Protocoles d'ACP : ACP D'AFLP

P Vos, R Hogers, M Bleeker, M Reijans, T van de Lee, M Hornes, un Frijters, pot de J, J Peleman, et M Kuiper. 1995. Recherche d'acide nucléique. La technique d'AFLP est basée sur l'amplification sélective d'ACP des fragments de restriction d'un sommaire total de genomic - [AFLP lu : une nouvelle technique pour l'empreinte génétique.]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles de bibliothèque de cosmide

L'amplification des bibliothèques de cosmide peut avoir comme conséquence la représentation tordue des ordres genomic copiés et devrait être évitée dans la mesure du possible. Si l'amplification devient nécessaire, il est le meilleur d'augmenter la bibliothèque par croissance de support liquide. - [Amplification et mémoire lues d'une bibliothèque de cosmide : Amplification dans le protocole liquide de culture]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles de bibliothèque de cosmide

L'amplification des bibliothèques de cosmide peut avoir comme conséquence la représentation tordue des ordres genomic copiés et devrait être évitée dans la mesure du possible. Dans cette méthode d'amplification, la déformation de la bibliothèque est rarement un problème parce qu'à aucune étape sont les bactéries contenant différents cosmides de recombinaison développés en concurrence entre eux. - [Amplification et mémoire lues d'une bibliothèque de cosmide : Amplification sur le protocole de filtres]

Catégorie : Protocoles de clonage : Protocoles d'expression de protéine de Baculovirus

Protocole pour l'amplification des plaques de Baculovirus et la préparation de hauts stocks de virus de titre. Inclut : Amplification primaire ; Amplification secondaire. - [Amplification lue des plaques de Baculovirus et préparation de protocole élevé de stocks de virus de titre]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Une amorce d'oligodeoxynucleotide hybridée à l'ADN messagère est étendue par un ADN polymérase ARN-dépendant pour créer une copie de cDNA qui peut être amplifiée par ACP.  Selon le but de l'expérience, l'amorce pour la synthèse de cDNA de premier-brin peut être spécifiquement conçue pour hybrider à un gène particulier de cible, ou une amorce générale telle qu'oligo (décollement) peut être utilisée pour amorcer la synthèse de cDNA essentiellement de tous les mRNAs mammifères - [amplification lue de cDNA produite par la transcription renversée du protocole d'ADN messagère]

Catégorie : Protocoles de cytogénétique : Protocoles spectraux de CIEL de Karyotyping

Protocole pour l'amplification de l'ADN de tri d'écoulement utilisant DOP-PCR (CIEL). - [Amplification lue de l'ADN de tri d'écoulement utilisant le protocole de DOP-PCR (CIEL)]

Catégorie : Protocoles artificiels bactériens de chromosome de BACs

Le protocole présente l'amplification des ordres de fin d'insertion des clones artificiels bactériens de chromosome utilisant TAIL-PCR. Les produits amplifiés conviennent en tant que sondes pour la marche et le génome de chromosome traçant et comme descripteurs pour l'ordonnancement direct. Le protocole a été utilisé dans des études de génome de riz. - [Amplification lue des ordres de fin d'insertion des clones de BACs par ACP entrelacé asymétrique thermique]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles renversés de Transcriptase RT-PCR

Le protocole emploie un ARN polymérase thermostable simple pour exécuter la haut-spécificité RT-PCR.  Une réaction à hautes températures de droite est suivie de l'amplification d'ACP du cDNA utilisant un poymerase thermostable simple, l'enzyme d'ACP d'ARN de GeneAmp AccRT des biosystèmes appliqués.  La température de la réaction de droite améliore la spécificité de l'attache d'amorce et réduit également la structure secondaire dans le descripteur, augmentant de ce fait l'efficacité de la polymérisation. - [Amplification lue de l'ARN : Transcription renversée à hautes températures et amplification d'ADN avec du magnésium]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles de bibliothèque d'ADN de Genomic

Amplification et ordonnancement des produits exon-emprisonnés. - [Analyse lue des clones pour l'emprisonnement et l'amplification d'Exon]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement : Protocoles d'analyse de données de Cytometry d'écoulement

Fournit plusieurs approches pour couler analyse de données cytometry. Des déterminations de fréquence basées sur l'analyse des histogrammes de fluorescence de simple-paramètre et des traçages de découpe de duel-paramètre sont présentées. Des étapes sont décrites pour calculer des valeurs pour des taux signal/bruit quand l'amplification logarithmique est utilisée pour la collecte de données. - [Analyse lue de protocole de données de Cytometry d'écoulement]

Catégorie : Protocoles de levure : Protocoles d'acide nucléique de levure : Protocoles d'ACP de levure

Des colonies de levure sont suspendues dans la mémoire tampon complète d'ACP et transférées à un cycler thermique pour 35 cycles d'ACP. Les produits de la réaction d'amplification sont analysés par l'électrophorèse de gel. - [Lu analysant des colonies de levure par protocole d'ACP]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles d'extraction d'ADN : Extraction de l'ADN antique

L'ADN obtenue était invariablement d'une basse taille moléculaire moyenne et a été endommagée par des processus oxydants, mais l'ACP peut être employé pour amplifier et étudier l'ADN mitochondrique courte ordonnance le thatare d'importance anthropologique et évolutionnaire. SVANTE PAABO, PNAS. - [ADN antique lue : Extraction, caractérisation, clonage moléculaire, et amplification enzymatique. Pdf]

Catégorie : Protocoles d'elegans de C. : Protocoles de la génétique d'elegans de C.

Protocole pour des elegans RNAi de C. Inclut : Transformation des cellules compétentes ; ligature d'Émoussé-fin ; Préparation des cellules compétentes ; Dephosphorylation de l'ADN linéaire de plasmide ; Sommaire de restriction : EcoRV ; Insérez l'amplification du gDNA ; Purification de gel : Kit de purification de gel de QiaQuick ; Mini-préparez ; Criblage de Transformant ; Préparation et induction bactériennes ; Préparation des vers de terre pour l'alimentation de RNAi. - [Protocole lu de RNAi d'elegans de C.]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Cette méthode, pour l'amplification sélective des extrémités intégrales de cDNA, comporte l'ajout d'un adaptateur pendant la transcription renversée.  Cette méthode tire profit de la propension du transcriptase murin d'inverse de virus de leucémie de Moloney (MMLV droite) d'ajouter deux à quatre cytosines ' - à l'extrémité 3 des brins nouvellement synthétisés de cDNA.  Les résidus supplémentaires sont ajoutés quand l'enzyme atteint les 5 ' - couvrent la structure à l'extrémité du descripteur d'ADN messagère. - [Protocole lu de RACE de Chapeau-Commutation]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles de clonage d'ACP

Des paires d'amorces d'oligonucléotide utilisées dans l'ACP sont souvent conçues avec des sites de restriction dans leurs 5 ' régions.  Dans beaucoup de cas, les sites sont différents dans les deux amorces.  Dans ce cas-ci, l'amplification produit d'un fragment de cible dont les terminus portent maintenant les nouveaux sites de restriction qui peuvent être utilisés pour le clonage directionnel dans des vecteurs de plasmide.  Le fragment épuré et le vecteur sont assimilés avec des enzymes appropriées de restriction, ensemble ligaturés, et transformés en Escherichia coli. - [Produits de clonage lus d'ACP par Addition des sites de restriction aux terminus du protocole amplifié d'ADN]

Catégorie : Protocoles d'ACP : ACP de colonie

Le protocole décrit l'utilisation de l'ACP d'examiner pour les bactéries qui portent les plasmides de recombinaison.  L'ACP peut être effectué utilisant les mêmes amorces que pour l'amplification de l'insertion copiée.  Pour déterminer l'orientation de l'insertion, un troisième, l'amorce insérer-spécifique qui est asymétriquement distancée du site clonal de mise en place peut être employé. - [Protocole lu II d'ACP de colonie]

Catégorie : Protocoles d'ACP

Protocole pour traiter la contamination de transfert dans la stratégie enzymatique d'ACP. Utilisation répétée d'ACP et de manipulation de ses aérosols de cause de produits qui peuvent souiller les échantillons voisins et les zones de manoeuvre.  Une telle « contamination de transfert » peut être empêchée en incluant le dUTP au lieu du dTTP pour toutes les réactions d'amplification. - [Traiter lu la contamination de transfert dans l'ACP : Un protocole enzymatique de stratégie]

Catégorie : Protocoles d'ADN : ADN ordonnançant des protocoles

Dirigez l'ordonnancement ADN genomic d'humain copiée parinsertion bactérienne et grande amplifiée ou de souris par l'intermédiaire d'une méthode ACP-basée multiplex améliorée. Inclut : Préparer des amorces pour MP-PCR ; Amplification ; Nettoyage de produit d'ACP ; Ordonnancement. - [Ordonnancement direct lu suivre la méthode ACP-Basée multiplex]