protocoles de quantité

Catégorie : Protocoles de biologie d'usine : Protocoles d'isolement d'ARN d'ADN d'usine

Le protocole inclut : isolement d'organelle, traitement de deoxyribonucléase, lysis, déprotéinisation et une purification finale d'ADN avec du sulfate dodécylique de sodium et l'acétate de potassium. Le rendement d'ADN d'organelle est de 5-10 microgrammes par gramme de tissu et l'ADN est entièrement restrictable. La technique est peu coûteuse et appropriée pour l'isolement des échantillons multiples d'ADN d'organelle d'un peu de tissu. - [Lu une méthode pour l'isolement de l'ADN de chloroplaste et de l'ADN mitochondrique du tournesol]

Catégorie : Protocoles d'ACP : La conversion de bisulfite a basé des protocoles d'ACP

Protocole pour l'analyse de la méthylation d'ADN utilisant l'ordonnancement de bisulfite. La méthode permet l'analyse précise de la méthylation dans une certaine région en convertissant tous les cytosines nonmethylated en tymines, alors que les cytosines méthylés restent sans changement.  Cette méthode exige un peu d'ADN genomic et semble donc être très utile pour l'analyse des échantillons cliniques, où la quantité matérielle est limitée.
- [Analyse lue de méthylation d'ADN utilisant le bisulfite ordonnançant le protocole]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement

Les différents types de cellules varient dans leur contenu de la phosphatidylsérine (picoseconde), avec la quantité d'exposition de picoseconde sur la surface de cellules après la mort de cellules. Ce protocole est une directive pour obtenir commencé, toutefois il peut être nécessaire d'ajuster la concentration de l'Annexin V-FITC. - [Protocole lu d'Annexin V pour écoulement Cytometry]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

La méthode décrit comment un extrait brut est préparé, et l'activité est normalisée à la quantité de protéine analysée. Cette méthode est particulièrement appropriée à comparer les cellules qui sont développées dans des conditions très différentes ou qui ont différents milieux génétiques. - [Analyse lue de ß-Galactosidase en levure : Analyse des extraits de brut]

Catégorie : Protocoles de levure : Protocoles de la génétique de levure : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

Le protocole décrit comment un extrait brut est préparé, et l'activité est normalisée à la quantité de protéine analysée. Cette méthode est particulièrement appropriée à comparer les cellules qui sont développées dans des conditions très différentes ou qui ont différents milieux génétiques. - [Analyse lue de ß-Galactosidase en levure : L'analyse du brut extrait le protocole]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de B-Galactosidase

La quantité recommandée de plasmide de RSV-ß-Galactosidase à utiliser pour la transfection des cellules (paraboloïde de 60 millimètres ou de 100 millimètres) est le µg 1-2. La quantité optimale d'ADN de plasmide sera déterminée par l'efficacité de la transfection, qui dépend très du protocole particulier de variété de cellule et de transfection. - [Protocole lu d'analyse de galactosidase de b]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles de clonage d'ACP

Protocole pour le clonage d'émoussé-fin des produits d'ACP. L'incubation d'une réaction de ligature d'émoussé-fin en présence d'un montant en excédent d'une enzyme appropriée de restriction peut considérablement augmenter le rendement de plasmides de recombinaison.  Le rôle de l'enzyme de restriction est de fendre les concatémères circulaires et linéaires aux sites de restriction qui sont reformés quand les molécules linéaires et émoussé-terminés de plasmide ligaturent à eux-mêmes.  I - [clonage lu d'Émoussé-fin de protocole de produits d'ACP]

Catégorie : Protocoles de protéine : Protocoles de concentration de quantitation de protéine : Protocoles d'analyse de protéine de Bradford

De pensée une page détaillée et bonne d'analyse de protéine de Bradford dehors utilisant un spectrophotomètre. Inclut l'information telle que l'analyse de Bradford est très rapide et utilise la quantité à peu près identique de protéine comme analyse de Lowry, commentaires, étapes procédurales, matériel utilisé et plus. - [Analyse lue de protéine de Bradford]

Catégorie : Protocoles de transfection : Protocoles de transfection de phosphate de calcium

Cette méthode de transfection de phosphate de calcium fonctionne bien dans les variétés de cellule qui sont 1) fortement transformé et 2) l'adhérent (hela, U2OS, SAOS2, AdAH, NPC-KT et obtiennent de l'efficacité 20% à 100% de transfection selon la variété de cellule). Des travaux bien pour des expériences passagères mais des précautions devraient être utilisés dans la conception et la traduction des expériences basées sur la discussion ci-dessous. Fonctionne également très bien pour produire des variétés de cellule stables. Cette méthode est tout à fait sensible à la quantité de plasmide d'entrée. - [Méthode lue de transfection de phosphate de calcium]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de viabilité de cellules

L'analyse luminescente de viabilité de cellules de CellTiter-Glo® est une méthode homogène pour déterminer le nombre de cellules viables dans la culture. La détection est basée sur employer la réaction de luciferase pour mesurer la quantité de triphosphate d'adénosine des cellules viables. La quantité de triphosphate d'adénosine en cellules se corrèle avec la viabilité de cellules. - [Analyses lues de viabilité de cellules qui mesurent le protocole de triphosphate d'adénosine]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles renversés de Transcriptase RT-PCR

Dans ce protocole, l'échantillon et le concurrent RNAs sont inverse transcrit (séparément) dans une expérience pilote.  Une quantité constante de produit témoin droite est alors combinée avec une dilution 2 logserial de produit du concurrent droite pour l'ACP. Le procédé fournit un nombre de copie approximatif pour l'échantillon, qui fine-tuned alors en répétant l'expérience avec une série de dilutions doubles de concurrent.  L'expérience inclut des commandes pour des variations d'échantillon-à-échantillon dans l'efficacité de droite. - [RT-PCR concurrentiel lu : Évaluation de protocole de nombre de copie]

Catégorie : Protocoles de purification d'acide nucléique : Protocoles d'isolement d'ADN : Protocoles d'isolement d'ADN de Genomic

Dans ce protocole, la capacité ADN-contraignante de particules de MagneSil de magicien est employée pour saisir et libérer une quantité cohérente d'ADN (100 NG) à travers un éventail d'échantillons.  À la fin du procédé, l'ADN est éluée dans la mémoire tampon d'élution de 100 µl pour donner une concentration finale de 1 ng/µl, soulageant le besoin de quantitation d'ADN de postpurification. - [Isolement lu d'ADN Q.I. de l'ADN de Genomic des taches et du protocole buccal de tiges]

Catégorie : Protocoles de transfection

Le protocole devrait être visualisé comme point de départ pour l'optimisation systématique de la transfection atténuée par lipofecting des agents. Une fois qu'un signal positif a été obtenu à partir d'un plasmide transfected portant un gène standard de journaliste, des conditions optimales pour la transfection peuvent être établies par la variation des paramètres systématique tels que la densité initiale de cellules, la quantité et la pureté de l'ADN, les medias et le sérum, et le temps d'exposition des cellules au complexe cationique-lipide-ADN. - [Transfection lue d'ADN négociée par Lipofection Protocol]

Catégorie : Biologie développementale : Protocoles d'embryologie

Les kits obligatoires d'analyse de caspase de FAM d'ATCC Corporation peuvent être employés pour déterminer des quantités de caspases actifs en cellules. L'inhibiteur FAM-étiqueté de caspase peut librement répandre dans la cellule. Le caspase actif lie irréversiblement l'inhibiteur. Lors de laver les cellules, la quantité de fluorescence est proportionnelle à la quantité de caspase actif dans la cellule. FAM-LETD-fmk (numéro 30-1306 de catalogue) est employé pour détecter le caspase 8 et le FAM-LEHD-fmk (numéro 30-1308 de catalogue) est utilisé pour le caspase 9. - [Fam lu Caspase 8 et analyse 9 obligatoire pour le protocole d'embryons]

Catégorie : Protocoles de Microinjection : Microinjection des protocoles d'ADN

Ce protocole décrit une méthode pour constant-coulent microinjection utilisant le PicoPump pneumatique (instruments de précision du monde). Ce type de système est très simple et peut être réuni sur un budget relativement bas. Dans cette méthode, un écoulement constant d'échantillon est fourni de l'extrémité de la pipette, et la quantité d'échantillon injectée dans la cellule est déterminée par combien de temps la pipette reste dans la cellule. - [La livraison lue de gène par l'injection directe (Microinjection) utilisant Commandé-Coulent le protocole de système]

Catégorie : Protocoles occidentaux de tache : Protocoles occidentaux généraux de méthodes de tache

Pour des expériences immunoblotting, il est souvent important de comparer le montant total d'un antigène de beaucoup de différentes sources ou d'apprendre si une source particulière a l'antigène à l'étude.  Dans l'approche décrite ici, des cultures de tissu, les bactéries, les cellules de levure, les tissus, et d'autres sources des antigènes sont perturbés directement dans un échantillon d'électrophorèse. - [Immunoblotting lu : Préparant le protocole de Lysates de cellules]

Catégorie : Protocoles de levure

Protocole pour le bonnet endoplasmique in vitro à la réaction de transport de golgi en levure. Inclut : Préparation des membranes ; Réaction en une étape ; Réaction à deux étages utilisant la quantité normale de membranes ; Réaction à deux étages utilisant la basse concentration des membranes. - [Bonnet endoplasmique in vitro lu à la réaction de transport de Golgi dans le protocole de levure]

Catégorie : Immunologie : Protocoles mononucléaires d'isolement de cellules

Ce protocole utilise la fraction de PBMC enrichie dedans avec des monocytes par des centrifugations de gradient de densité (le protocole peut être trouvé chez www.methods.info). La réduction de la quantité de microbeads par rapport au protocole de Miltenyi réduit les coûts de l'expérience. - [Isolement lu des monocytes de PBMCs enrichi utilisant le protocole magnétique de programmes CD14]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules

Ce protocole utilise la fraction de PBMC enrichie dedans avec des monocytes par des centrifugations de gradient de densité. La réduction de la quantité de microbeads réduit les coûts de l'expérience. - [Isolement lu des monocytes de la fraction de PBMC enrichie par monocyte utilisant CD14]

Catégorie : Protocoles de chromatographie : Protocoles de chromatographie d'affinité

Deux méthodes sont données pour des glycoprotéines d'épuration utilisant l'Un-Sépharose d'agglutinine ou de concanavaline de blé-germe.  Puisque les matrices de lectin-affinité peuvent lier quelques milligrammes de protéine par millilitre de matrice d'affinité, seulement un peu de matrice de gel d'affinité est exigé.  En lots la méthode est recommandée quand le volume de protéine est grand. - [Protocole lu de chromatographie d'affinité de Lectin-Agarose]

Catégorie : Protocoles de clonage

Protocole pour ligaturer le plasmide et la cible DNAs dans l'agarose de la bas-fondre-température. La ligature dans l'agarose de la bas-fondre-température est beaucoup moins efficace que la ligature avec de l'ADN purifiée dans la solution libre et exige un grand nombre de ligase d'ADN. La méthode est utilisée principalement pour subcloning rapide des segments de l'ADN dans des vecteurs dephosphorylated et des éléments de recombinaison se réunissants. - [Lu ligaturant plasmide et cible DNAs dans le protocole d'agarose de la Bas-fondre-température]

Catégorie : Protocoles viraux de culture et d'isolement : Protocoles viraux de culture

des lysates liquides de 5 ml sont préparés quand un peu d'ADN d'un grand nombre de clones de lambda est nécessaire. Les lysates peuvent être faits utilisant l'UL 10 - 20 d'un lysate courant ou d'un « macroplaque » bactériophage 100 fois amplifié comme inoculum. - [Protocole bactériophage liquide lu de Lysates]

Catégorie : Protocoles de protéine : Protocoles de concentration de quantitation de protéine

Trouvez une liste d'analyses pour la détermination de la concentration en protéine dans une solution.  Cette liste inclut l'intervalle de sensibilité, volume/quantité de commentaires nécessaires et subjectifs d'échantillon sur l'exactitude et la convenance, et d'agents de intervention de commandant.  Des détails, les besoins en équipement, et les références procéduraux sont tracés les grandes lignes dans les différents documents d'analyse. - [Liste lue d'analyses de protéine]

Catégorie : Analyses de gène de journaliste : Protocoles d'analyse de GFP

Protocole mesurant la quantité d'expression de GFP et de contenu d'ADN en cellules permeabilized. Inclut : Cellules de difficulté avec du formaldéhyde ; Cellules de Permeabilize avec de l'éthanol ; Préparation de solution mise en mémoire tampon de formaldéhyde de 2%. - [Mesure lue d'expression de GFP et de contenu d'ADN en cellules de Permeabilized]

Catégorie : Protocoles d'ADN : Protocoles d'amplification en chaîne par réaction d'ACP : Protocole standard d'ACP

ACP et guide multiplex. Guide étonnant de quantité d'amorce, de quantité de mgcl2, de température de recuit, et de plus. Avec des exemples d'image. Octavian Henegariu. - [ACP lu et guide multiplex]