protocoles d'ajout

Catégorie : Protocoles de biologie moléculaire : Protocoles de ligature d'ADN

Ajout des éditeurs de liens/des fragments d'ADN émoussé-fin d'adaptateurs. Ligature de mélange contenant l'ADN et les éditeurs de liens/adaptateurs. Powell Gannon. Série pratique d'approche d'Oxford. - [L'ajout lu des éditeurs de liens/de l'ADN émoussé-fin d'adaptateurs réduit le pdf en fragments]

Catégorie : Protocoles de cytogénétique

Protocole pour la transformation Agrobactérie-négociée en riz. méthode Agrobactérie-négociée de transformation de riz qui s'applique aux variétés facilement cultivées en plus des variétés de japonica d'élite il est plus difficile cultiver que. Suivre cette méthode, des usines de riz transgéniques peuvent être obtenues en environ 2 ou 3 mois avec une fréquence de transformation de 30-50%, tous les deux dans des variétés facilement cultivées et riz récalcitrant de japonica d'élite. - [Transformation Agrobactérie-Négociée lue dans le protocole de riz]

Catégorie : Protocoles de protéine : Protocoles de phosphorylation de protéine

Méthodes de description de papier pour surveiller l'activité de kinase, spécificité de substrat de kinase†de investigation la « , la phosphorylation de examen dans le planta et la détermination des sites de phosphorylation dans une protéine. En outre, des considérations stratégiques pour le plan d'expérience et les variables seront discutées. Picotin de Scott C., le journal d'usine. - [Analyse lue de phosphorylation de protéine : pdf de méthodes et de stratégies]

Catégorie : Protocoles de protéine : Protocoles d'immunoprécipitation

des complexes d'Anticorps-antigène sont retirés de la solution par l'ajout d'une forme insoluble d'une protéine obligatoire d'anticorps telle que la protéine A, la protéine G ou le deuxième anticorps. Protocoles d'immunoprécipitation/méthodologie et information de formation technique. P.J. ha - [analyse lue des protéines par Immunoprecipitation]

Catégorie : Protocoles d'elegans de C. : Elegans de C. souillant des protocoles

Le soin extrême devrait être employé pour identifier et vérifier des réactions positives, cependant, parce que les réactions croisées sont communes. Counterstaining est essentiel pour les vers de terre de examen par l'immunofluorescence et est utilisé pour identifier la cellule exacte en laquelle un antigène apparaît. Les méthodes pour counterstaining incluent étiqueter toutes les cellules avec un colorant fluorescent qui est spécifique pour les acides nucléiques (iodure par exemple, de DAPI ou de propidium) et l'usage de GFP conduit par les instigateurs tissu-spécifiques. - [Ajout et détection lus d'anticorps pour souiller le protocole d'elegans de Caenorhabditis]

Catégorie : Protocoles de drosophile

les réactifs Enzyme-joints donnent l'excellente sensibilité et utilisent un photomicroscope simple pour la détection. Un intervalle des enzymes est disponible, mais pour souiller in situ, la peroxydase de raifort adaptera à la plupart des besoins. La diaminobenzidine (TAPE) est l'un des substrats les plus sensibles pour la peroxydase de raifort. Elle rapporte un produit brun intense qui est insoluble en eau et alcool. Elle peut être rendue plus sensible en ajoutant des sels en métal tels que le cobalt ou le nickel à la solution de substrat. - [Ajout lu d'anticorps aux spécimens de drosophile et détection utilisant le protocole Enzyme-Joint de réactifs]

Catégorie : Protocoles de drosophile

Protocole pour l'ajout d'anticorps aux spécimens de drosophile et la détection utilisant les réactifs fluorochrome-joints. des réactifs Fluorochrome-joints devraient être utilisés quand la résolution est nécessaire ou si deux antigènes doivent être localisés simultanément. En raison de l'épaisseur des spécimens de mouche, la détection exige l'accès à un microscope confocal. - [Ajout lu d'anticorps aux spécimens de drosophile et détection utilisant le protocole Fluorochrome-Joint de réactifs]

Catégorie : Protocoles d'ACP : protocoles de synthèse de cDNA

Cette méthode, pour l'amplification sélective des extrémités intégrales de cDNA, comporte l'ajout d'un adaptateur pendant la transcription renversée.  Cette méthode tire profit de la propension du transcriptase murin d'inverse de virus de leucémie de Moloney (MMLV droite) d'ajouter deux à quatre cytosines ' - à l'extrémité 3 des brins nouvellement synthétisés de cDNA.  Les résidus supplémentaires sont ajoutés quand l'enzyme atteint les 5 ' - couvrent la structure à l'extrémité du descripteur d'ADN messagère. - [Protocole lu de RACE de Chapeau-Commutation]

Catégorie : Protocoles de drosophile : Protocoles de la génétique de drosophile

Le protocole décrit ici produit la chromatine avec les nucleosomes régulièrement espacés ayant des longueurs nucleosome physiologiques de répétition ; quelque chose il peut être difficile réaliser qu'avec les composants épurés. En outre, la chromatine s'est réunie avec l'Assemblée de la chromatine S-190 que l'extrait contient la chromatine Triphosphate d'adénosine-dépendante transformant des facteurs nécessaires pour la transcription efficace. - [Assemblée lue de chromatine sur l'ADN de descripteur avec facteurs et chromatine Assembl de transcription de drosophile S-190]

Catégorie : Protocoles d'ACP : Protocoles de clonage d'ACP

Des paires d'amorces d'oligonucléotide utilisées dans l'ACP sont souvent conçues avec des sites de restriction dans leurs 5 ' régions.  Dans beaucoup de cas, les sites sont différents dans les deux amorces.  Dans ce cas-ci, l'amplification produit d'un fragment de cible dont les terminus portent maintenant les nouveaux sites de restriction qui peuvent être utilisés pour le clonage directionnel dans des vecteurs de plasmide.  Le fragment épuré et le vecteur sont assimilés avec des enzymes appropriées de restriction, ensemble ligaturés, et transformés en Escherichia coli. - [Produits de clonage lus d'ACP par Addition des sites de restriction aux terminus du protocole amplifié d'ADN]

Catégorie : Protocoles de cellules de tige : Protocoles de culture de cellules de tige

Des états de culture ont été établis pour une deuxième variété de cellule blastocyst-dérivée, cellules trophoblast de tige (SOLIDES TOTAUX), en plus des cellules embryonnaires de la tige (es). Ce protocole décrit une méthode pour cultiver des variétés de cellule de SOLIDES TOTAUX. Ces cellules peuvent alors être employées pour étudier la différentiation trophoblast et la fonction placentaire. - [Lu cultivant le protocole Trophoblast de variétés de cellule de tige (SOLIDES TOTAUX)]

Catégorie : Protocoles de technologie de RNAi : Protocoles de drosophile de RNAi

Le protocole décrit comment des particules sous-cellulaire-classées sont accélérées à la vitesse élevée pour porter l'ARN bicaténaire (dsRNA) dans des embryons de drosophile.  L'avantage principal de ce procédé au-dessus du microinjection (Microinjection de dsRNA dans des embryons de drosophile) est que le bombardement de particules est plus facile et plus rapide pour exécuter.  En outre, le trauma mécanique reçu est loin moins que par microinjection, permettant une meilleure survie des embryons et de peu d'objets façonnés phénotypiques. - [La livraison lue du dsRNA dans des embryons de drosophile par protocole de Gene Gun]

Catégorie : Signalisation des protocoles de transduction de signal

Cette analyse de kinase est censée pour déterminer si un agoniste ou un événement peut influencer l'autophosphorylation de FAK. L'ajout de 1 ¼ l d'Î de polyGT au mélange de réaction de kinase déterminera l'activité de l'enzyme contre un substrat. Inclut l'information en fonction : Moisson, immunoprécipitation, réaction de kinase et détection d'anticorps de FAK. - [Analyse lue de FAK Autophosphorylation]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement

Détermination cytometric d'écoulement des antigènes de surface de leucocyte dans le sang entier. La quantitation des antigènes de surface de cellules dans le sang entier avec le cytometer d'écoulement est très simple et exige :
1. Collection de sang ; 2. Ajout d'anticorps ; 3. Étalonnage du cytometer d'écoulement ; 4. Fabrication des mesures. - [Détermination cytometric lue d'écoulement des antigènes de surface de leucocyte dans le sang entier]

Catégorie : Protocoles de Microinjection : Microinjection des protocoles d'ADN

Ce protocole décrit une méthode pour palpiter-coulent microinjection utilisant l'injecteur et l'Eppendorf InjectMan d'Eppendorf FemtoJet ; c'est le type le plus commun de palpiter-coulent système de microinjection actuel étant utilisé. L'avantage de ce type de système au-dessus de commandé-coulent système est que beaucoup plus de commande est disponible au-dessus des paramètres d'injection, réduisant la variabilité dans les injections. En outre, le système permet une mise en place diagonale de l'aiguille dans la cellule. - [La livraison lue de gène par l'injection directe (Microinjection) utilisant Palpiter-Coulent le protocole de système]

Catégorie : Protocoles occidentaux de tache

L'immunoprécipitation de protéine peut être une étape préparatoire utile pour immunoblotting.  Pour les protéines très rares, la protéine d'intérêt peut être épurée et concentrée par des techniques standard d'immunoprécipitation avant d'immunoblotting.  En outre, des interactions de protéine-protéine peuvent être testées avec de l'anticorps immunoprecipitating qui est spécifique pour une protéine d'un complexe et d'un anticorps immunoblotting qui est spécifique pour un deuxième membre du complexe. - [Immunoblotting lu : Préparant le protocole de protéines d'Immunoprecipitated]

Catégorie : Protocoles de biologie moléculaire : Protocoles d'hydrate de carbone

Immunofluorescence de mesure de méthode indirecte couplée au deuxième anticorps. Le meilleur pour des antigènes de membrane en plus d'intra- et extracellulaires antigènes, peut être appliqué aux sections gelées de tissu, aux cellules en suspension, et aux cellules attachées aux plaques en verre ou aux lamelles. Tadashi Tai~Head, service de l'immunologie de tumeur, l'institut métropolitain de Tokyo de la Science médicale, Tokyo, Japon - [Immunohistochemistry lu utilisant des anticorps d'Anti-Ganglioside]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles in vitro de reconstitution

Le protocole trace les grandes lignes du procédé général et des conditions pour la traduction in vitro de CFTR et trace les grandes lignes de quelques analyses utilisant le produit traduit in vitro. Le glycosylation de noyau de CFTR se produit dans l'ER. Une analyse pour cette étape de transformation exige l'ajout des membranes microsomiques au mélange in vitro de base de traduction. Ce protocole prend en considération ceci. - [Analyses in vitro lues de traduction pour CFTR]

Catégorie : Microbiologie : Milieux de culture et plats bactériens d'Escherichia coli

Versement et préparation de plats de livre. ajout d'antibiotiques. Janet Smith, institut de recherche de recherche biomédical de Boston - [versement et préparation lus de plats de livre]

Catégorie : Protocoles de cellules de tige : Protocoles de culture de cellules de tige

Décrit les étapes en détail pour isoler et augmenter les cellules de tige neurales sous forme de neurospheres des dissections de tissu du cerveau postnatal de souris. Des procédures pour le passage à long terme des neurospheres et le cryopreservation des neurospheres sont également fournies. En plus des directives et des extrémités pour produire des cultures de neurosphere, nous décrivons la méthode pour préparer des neurospheres pour l'analyse par photomicroscopie. - [Culture neurale lue de cellules de tige : Génération de Neurosphere, analyse microscopique et Cryopreservation]

Catégorie : La génétique et génomique : Protocoles de Genotyping : ACP Genotyping

Le vivax de Plasmodium est le deuxième parasite de malaria répandu affectant plus de 75 millions de personnes tous les ans, la plupart du temps en Amérique du Sud et en Asie. En plus de la morbidité principale ce parasite est associé aux rechutes et à une réduction de poids à la naissance. Les protocoles genotyping pratiques d'ACP basés sur des lieux polymorphes présentent dans deux marqueurs génétiques de vivax de P. - [Protocoles pratiques lus d'ACP Genotyping pour le vivax de Plasmodium utilisant Pvcs et Pvmsp1]

Catégorie : Biologie de cellules et culture de cellules : Protocoles de Cytometry d'écoulement

Un procédé pour la souillure directe et indirecte des suspensions unicellulaires du tissu lymphoïde ou des lymphocytes périphériques de sang pour détecter les antigènes extérieurs de membrane de cellules est présenté. En outre, méthodes actuelles de protocoles de support pour l'écriture de labels de fluorescence des anticorps purifiés. Un protocole pour l'analyse cytometric d'écoulement des antigènes intracellulaires dans les suspensions unicellulaires est également inclus. - [Préparation lue des cellules et des réactifs pour des protocoles de Cytometry d'écoulement]

Catégorie : Protocoles de technologie de RNAi : Protocoles de drosophile de RNAi

les siRNAs ont produit sur l'ajout du dsRNA à l'embryon de drosophile que l'extrait sont enrichis dans une fraction microcoque-nucléase-résistante.  Après traitement et dephosphorylation de la protéinase K avec de la phosphatase intestinale de veau, ces siRNAs négocient RNAi efficace in vitro. - [La préparation lue des siRNAs de l'embryon de drosophile extrait le protocole]

Catégorie : Protocoles de biologie d'usine : Protocoles d'isolement d'ARN d'ADN d'usine

Ce protocole phénol-n'est pas basé, mais exige l'ajout du chloroforme. Le réactif d'usine de concert est destiné pour l'isolement de l'ARN d'une large variété de tissus végétaux comprenant les aiguilles, le tubercule impeccables bleus etc. de pomme de terre - [la purification lue de l'ARN du tissu végétal utilisant le réactif d'usine de concert]

Catégorie : Immunologie : Protocoles à cellule T

Dans le premier protocole, des cellules de T murines d'IL-2-producing sont mesurées après stimulation par l'escroquerie A. de mitogène. Le deuxième protocole fournit une modification pour l'usage des cellules humaines de répondeur. Le deuxième protocole est utilisé pour estimer la proportion de cellules qui peuvent produire d'un clone des cellules effectrices cytotoxiques une fois stimulées près escroquent A avec l'ajout d'IL-2. - [Quantitation lue des cellules de T fonctionnelles en limitant des protocoles de dilution]