Protocoles d'isolement de membrane

Le protocole décrit dans ce protocole a été utilisé principalement pour analyser le Golgi, le bonnet endoplasmique et le réseau transport-Golgi mais des repères pour d'autres compartiments (par exemple ERGIC et endosomes) ont été également analysés. Les modifications à l'intervalle de densité de gradient ou aux conditions de centrifugation influencent la capacité du gradient de résoudre les compartiments multiples. - [Fractionnement lu de Golgi, d'ER, de TGN et d'autres compartiments de membrane dans des gradients préformés d'Iodixanol]

Ce protocole est concerné par l'utilisation des gradients d'iodixanol en mode analytique d'étudier la localisation de membrane d'une protéine ou d'une fonction particulière. Des gradients continus best suited à cette tâche. Un des protocoles décrits dans ce protocole commence par un gradient discontinu, mais puisque le gradient est centrifugé à 174,000g pour 16 h il deviendra continu par diffusion. - [Fractionnement lu des membranes de levure dans des gradients continus préformés d'Iodixanol]

La première partie du procédé d'isolement est une flottaison par un gradient continu d'iodixanol ; ce gradient est essentiellement un gradient de résolution dans lequel les vésicules caveolin-riches sont concentrées dans le tiers supérieur du gradient, alors que les vésicules principalement caveolin-pauvres se réunissent dans des régions plus denses. Un deuxième gradient discontinu est essentiellement un gradient de concentration pour réunir les vésicules caveolin-riches brusquement à une interface. - [Purification lue des membranes de Caveolae d'une fraction de membrane de plasma des cellules et des tissus cultivés]

Ce protocole utilise » un granule mitochondrique « léger d'un homogénat mammifère de foie. Le gradient doit résoudre ainsi une série de composants plus denses (peroxisomes, lysosomes, mitochondries) des membranes de Golgi, qui ont un faible densité dans l'iodixanol (1.06-1.09 g/ml) [1]. Le protocole est spécifiquement conçu en fonction la purification des membranes de Golgi de ce granule et est peu convenable pour l'isolement ou l'analyse d'autres organelles actuelles dans la fraction mitochondrique légère. - [Purification lue des membranes de Golgi d'une fraction mitochondrique légère dans un gradient Self-Generated]

Protocole pour le gradient de sucrose. - [Protocole lu de gradient de sucrose]