Protocoles aviaires d'oiseau

Le protocole décrit comment disséquer les moelles épinières des embryons aviaires dsRNA-traités pour l'analyse des conseils commissural d'axone. Après fixation de la moelle épinière avec du paraformaldéhyde, des axones commissural sont souillés avec Rapide-DiI. - [Dissection lue des moelles épinières pour l'analyse de novateur Axonal dans les embryons aviaires dsRNA-Traités]

Le protocole décrit une méthode pour dans la transfection d'ovo des embryons aviaires avec de l'ARN bicaténaire (dsRNA). Le dsRNA est injecté dans la moelle épinière de l'embryon. L'électroporation ultérieure facilite la prise cellulaire des molécules de dsRNA. - [Injection lue de dsRNA et électroporation dans le protocole aviaire d'embryons]

Le protocole décrit la production de l'ARN bicaténaire (dsRNA) des fragments des cDNAs des gènes de candidat. Les fragments de cDNA doivent être copiés dans les plasmides avec un instigateur SP6 et T7 de flanquement (par exemple, pSP72 ou pCRII). Le plasmide est linéarisé et le sens et le RNAs antisens sont produits séparément par la transcription in vitro. Après la purification, les brins d'ARN sont recuits pour rapporter une molécule de dsRNA appropriée à RNAi dans les embryons aviaires. - [Production lue de dsRNA pour RNAi dans le protocole aviaire d'embryons]

Le protocole décrit une méthode pour souiller des fibres nerveuses dans des parts de tissu des embryons aviaires utilisant un anticorps contre la sous-unité 160-kD de neurofilaments. Ceci permet la comparaison de la configuration de embranchement du moteur et des neurones sensoriels entre la commande et les embryons expérimentaux. Le tissu est dedans coupées les parts utilisant une trancheuse de vibratome ou de tissu. Le protocole convient à des embryons plus anciens après approximativement l'étape 33 et les régions par lesquelles ne soyez pas accessible entier-montent l'analyse. - [Souillure lue des parts de tissu pour l'analyse de novateur Axonal dans le protocole aviaire dsRNA-Traité d'embryons]

Le protocole décrit une méthode pour souiller des fibres nerveuses dans entier-montent des préparations des embryons aviaires utilisant un anticorps contre la sous-unité 160-kD de neurofilaments. Ceci permet la comparaison de la configuration de embranchement du moteur et des neurones sensoriels entre la commande et les embryons expérimentaux. Ce protocole a été avec succès appliqué pour des embryons à différentes étapes jusqu'à environ l'étape 33 (7 jours d'incubation). - [Lu Entier-Montez les préparations pour l'analyse de novateur Axonal dans le protocole aviaire dsRNA-Traité d'embryons]