L'ADN réduisent la purification en fragments du protocole de gels de polyacrylamide

Purification de fragment d'ADN de protocole de gels de polyacrylamide

Isolement pas à pas de l'ADN des gels de polyacrylamide

1. Pour commencer, versez un gel de polyacrylamide vertical utilisant la mémoire tampon de THÉ.  Notez qu'un gel 4 % de non-dénaturisation est le meilleur pour la plupart des applications d'ADN.
2. Exécutez les fragments d'ADN. 
3. Pour la plupart d'ADN réduit en fragments plus considérablement le point d'ébullition que 500 vous devrait exécuter le colorant de cyanol de xylène au bas du gel.
4. Souillez le gel de polyacrylamide pour une heure dans la mémoire tampon avec 1 bromure d'éthidium d'ug/ml
5. Coupez vos bandes d'ADN d'intérêt utilisant un scalpel et un cadre UV.
6. Transférez les bandes d'ADN aux tubes de 15 ou 30 ml Corex.
7. Ajoutez la mémoire tampon de TE aux tubes - pour un tube de 15 ml ajoutez 3 ml de mémoire tampon de TE. Pour un tube de 30 ml ajoutez 7 ml.
8. Lavez votre sonde de homogénisateur de tissu d'abord avec l'eau DNase-libre, puis EtOH tous les deux avant et après l'utilisation.
9. Rectifiez la partie de bande de gel de polyacrylamide dans un homogénisateur de tissu pendant 10 minutes. Maintenez les choses froides avec de la glace.
10. Placez les tubes à 4 degrés d'overnite (O/N).
11. Tournez en bas des particules de polyacrylamide dans une centrifugeuse à 10000 rpms pendant 10 minutes à la température ambiante et balancez dehors le rotor.
12. Introduisez à la pipette soigneusement outre du surnageant dans les tubes frais d'un Corex.
13. Précipité d'éthanol l'ADN à isoler.