Protocoles de écriture de labels d'anticorps

Une fois que les tissus sont fixes et permeabilized, les anticorps sont ajoutés. Ces anticorps peuvent être étiquetés directement ou détectés par un réactif secondaire étiqueté. Pour la détection indirecte, n'importe quel réactif qui lie spécifiquement à l'anticorps primaire peut « être étiqueté » et employé pour localiser l'anticorps. Les réactifs possibles incluent les anticorps d'anti-immunoglobuline, la protéine A ou le G, ou, si le premier anticorps est étiqueté avec de la biotine, streptavidin. Ils peuvent être étiquetés avec des enzymes ou l'or. - [Les anticorps obligatoires lus au tissu sectionne le protocole]

Protocole pour la détection des autoantibodies avec les tétramères radioactifs de individu-montage d'antigène. - [Détection lue des Autoantibodies avec le protocole radioactif de Individu-Montage de tétramères d'antigène]

Ce protocole décrit le couplage covalent des anticorps à la biotine. Les groupes de biotine lient avec l'affinité extrêmement élevée au streptavidin et à l'avidine, qui sont disponibles commercialement ajoutés aux enzymes, aux colorants fluorescents, ou à l'iode. Un anticorps primaire biotinylated peut, donc, être détecté avec n'importe quelle partie d'une large variété de différentes étiquettes. La réaction de biotinylation est simple et douce, et inactive rarement l'anticorps. - [Anticorps de écriture de labels lus avec le protocole de biotine]

L'écriture de labels directe des anticorps purifiés est la méthode de choix en visualisant simultanément deux anticorps ou plus des même espèces, classe, ou sous-classe. Ceci permet à la localisation des antigènes multiples d'être comparée dans la même cellule, tissu, ou échantillon. Les anticorps primaires étiquetés sont également utiles pour améliorer des taux de fond-à-sortie de lecture, et ils peuvent être essentiels pour les immunoessais dans lesquels la bonne quantification est nécessaire. - [Anticorps de écriture de labels lus avec le protocole de fluorochromes]

Ce protocole décrit une méthode chimique simple d'oxydation pour étiqueter des anticorps avec de l'iode. Iodide-125 (fourni comme NaI) est oxydé pour former iodine-125 (I2), qui attaque des chaînes latérales de tyrosyl et de histidyl. Les anticorps iodés sont facilement détectés et dosés utilisant les compteurs gamma ou le film. Ils sont utilisés principalement dans les immunoessais, mais d'autres techniques peuvent être adaptées commodément à la méthode de détection d'iode. - [Anticorps de écriture de labels lus avec le protocole d'iode]

Cette méthode pour étiqueter les anticorps monoclonaux implique d'élever des hybridomes en présence des acides aminés radioactifs. Ce protocole peut être particulièrement utile quand cause de écriture de labels conventionnelle de techniques l'anticorps pour détruire l'activité. Les anticorps étiquetés qui résultent sont essentiellement identiques aux anticorps non étiquetés. - [Anticorps monoclonaux de écriture de labels lus par Biosynthesis Protocol]