Protéines végétales, peptides et antigènes

Le pH est un paramètre important contrôlant beaucoup de voies métaboliques et signalantes en cellules vivantes. Les indicateurs de pH fluorescents de recombinaison (pHluorins) ont hérité la mode pour la surveillance pH cellulaire. Ils sont dérivés de l'Aequorea le plus populaire Victoria GFP (Poids du commerce-GFP). Ici, nous présentons un journaliste fluorescent original de pH que la protéine de l'orange seapen le gurneyi de Ptilosarcus (Pinte-GFP) et comparons ses propriétés aux pHluorins pour l'expression et l'usage aux usines. - [Lu une sonde fluorescente originale de pH pour l'expression aux usines]

BN-PAGE est devenu la méthode de choix pour la recherche sur les complexes respiratoires de protéine des chaînes de transfert d'électron d'un intervalle des organizations. Il permet la séparation dans deux dimensions des positionnements extrêmement hydrophobes de protéine pour l'analyse et fournit également des informations sur leurs interactions indigènes. Dans cette revue nous discutons les capacités de BN-PAGE dans le proteomics et la recherche plus large sur la protéine : interactions de protéine avec un foyer sur son potentiel d'utiliser-et en science des plantes. - [PAGE Bleu-Indigène lue aux usines : Un outil dans l'analyse des interactions de Protéine-Protéine]

Protocole relatif à l'extraction et à la solubilisation de la protéine totale des graines d'usine. - [Extraction et solubilisation lues de protéine totale de protocole de graines d'usine]

Le protocole décrit une méthode pour exécuter le fractionnement isoélectrique d'un échantillon d'embryon de maïs utilisant un electrolyzer multicompartimenté (ECM). Ce prefractionation des protéines ayant des pIs dans un certain intervalle de pH est essentiel pour permettre aux chargements élevés de la protéine d'être résolus sur l'étroit et les gradients immobilisés ultra-étroits de pH utilisés dans la 2D électrophorèse. Les membranes isoélectriques dans l'ECM agissent comme les pièges isoélectriques saisissant toutes les espèces de protéine ayant des pIs entourer la valeur de pi de chacun… - [Fractionnement lu des protéines d'embryon de maïs pour la 2-D électrophorèse de gel utilisant Electrolyz multicompartimenté]

L'activité du ß-glucuronidase (GUS) peut être exactement déterminée dans le tissu végétal intact utilisant le ß-D-glucuronide du methylumbelliferyl 4 (4-MUG) comme substrat. Lors de l'hydrolyse par le GUS, l'umbelliferone méthylique du fluorochrome 4 (4-MU) est produit. Cette méthode est basée sur la perméabilité de 4-MUG et de 4-MU par le tissu végétal. Elle se compose de l'incubation du tissu avec du réactif et la quantification de la fluorescence émise par 4-MU dans la solution. L'activité de GUS dans chaque échantillon peut être… - [Analyse quantitative lue d'activité de GUS dans le protocole intact de tissu végétal]

Utilisant l'excitation à 365 nanomètre et émission de mesure à 455 nanomètre, la quantité de 4-MU produit peut être mesurée. Dans ces conditions, la fluorescence de fond du substrat est négligeable, particulièrement si le filtre approprié est choisi. - [Analyse quantitative lue d'activité de GUS des extraits d'usine]

Le GUS est habitué car une étiquette pour adresser la localisation nucléaire tandis que GFP est plus souple. GFP est discernable directement en cellules vivantes, le GUS est seulement détecté indirectement par la souillure du tissu fixe qui peut mener aux objets façonnés ou peut obscurcir des problèmes avec la solubilité des protéines. Dans ce protocole, on analyse par habitude la localisation de protéine après transformation passagère particule-négociée des cellules épidermiques d'oignon. Avec cette méthode il peut déterminer rapidement si une protéine donnée de fusion est en activité et…. - [Localisation sous-cellulaire lue des protéines de GUS et GFP-Étiqueté en cellules épidermiques d'oignon]