Protocoles de clonage d'ACP

Le protocole est pour bi-directionnel, clonage d'émoussé-fin des fragments d'ADN.  L'ADN de cible est ACP amplifié et 3 ' - des extensions sont polies avec de l'ADN polymérase de Pfu.  L'amplicon est ligaturé à une ADN émoussé-terminée de plasmide, et les produits de la réaction de ligature sont employés pour transformer Escherichia coli compétent.  Une enzyme de restriction est ajoutée à la réaction de ligature pour relinearize n'importe quelle ADN de vecteur d'individu-religating. - [Clonage bi-directionnel lu de protocole de produits d'ACP]

Protocole pour le clonage d'émoussé-fin des produits d'ACP. L'incubation d'une réaction de ligature d'émoussé-fin en présence d'un montant en excédent d'une enzyme appropriée de restriction peut considérablement augmenter le rendement de plasmides de recombinaison.  Le rôle de l'enzyme de restriction est de fendre les concatémères circulaires et linéaires aux sites de restriction qui sont reformés quand les molécules linéaires et émoussé-terminés de plasmide ligaturent à eux-mêmes.  I - [clonage lu d'Émoussé-fin de protocole de produits d'ACP]

Des paires d'amorces d'oligonucléotide utilisées dans l'ACP sont souvent conçues avec des sites de restriction dans leurs 5 ' régions.  Dans beaucoup de cas, les sites sont différents dans les deux amorces.  Dans ce cas-ci, l'amplification produit d'un fragment de cible dont les terminus portent maintenant les nouveaux sites de restriction qui peuvent être utilisés pour le clonage directionnel dans des vecteurs de plasmide.  Le fragment épuré et le vecteur sont assimilés avec des enzymes appropriées de restriction, ensemble ligaturés, et transformés en Escherichia coli. - [Produits de clonage lus d'ACP par Addition des sites de restriction aux terminus du protocole amplifié d'ADN]

Cette méthode de clonage direct tire profit du résidu non apparié d'adenosyl ajouté aux 3 ' terminus de DNAs amplifié par Taq et d'autres polymérases thermostables. - [Les produits de clonage lus d'ACP dans T dirige le protocole]

Le protocole est pour le clonage directionnel d'émoussé-fin des fragments d'ADN.  L'ADN de cible ACP-est amplifiée, 3 ' - des extensions sont polies avec de l'ADN polymérase de Pfu, et l'amplicon est ligaturé à une ADN émoussé-terminée de plasmide.  Les produits de la réaction de ligature sont employés pour transformer Escherichia coli compétent.  Une enzyme de restriction est ajoutée à la réaction de ligature pour relinearize n'importe quelle ADN de vecteur d'individu-religating. - [Clonage directionnel lu de protocole de produits d'ACP]

Le protocole décrit l'utilisation de l'ACP de vectorette et de l'ACP de simple-site d'amplifier les ordres terminaux des ordres genomic copiés dans des vecteurs de grande capacité tels que PACs et YACs. - [Lu isolant les extrémités des fragments d'ADN de Genomic copiés dans des vecteurs de grande capacité]

L'efficacité du clonage direct des produits d'ACP peut être améliorée en produisant des extrémités appropriées sur les fragments amplifiés.  Ce protocole décrit les stratégies pour produire et manipuler des extrémités appropriées sur les fragments d'ACP. - [Clonage moléculaire lu de protocole de produits d'ACP]

Dans ce protocole ordonnance copié dans le bactériophage standard ou des vecteurs de plasmide sont amplifiés dans PCRs contenant des amorces visées aux ordres de flanquement de vecteur.  Les fragments amplifiés peuvent être analysés par l'électrophorèse de gel, ADN ordonnançant, et/ou cartographie de restriction.  On peut analyser simultanément beaucoup de colonies ou de plaques. - [Caractérisation rapide lue de DNAs copiée dans le protocole procaryotique de vecteurs]

Le protocole exploite la découverte que la RNase A peut efficacement fendre au rC simple ou aux bases de RU incluses en ADN bicaténaire.  Des vecteurs entiers de plasmide sont amplifiés utilisant longtemps, ACP de haute fidélité avec les riboprimers, qui portent un résidu simple de rC la ' extrémité à leurs 3.  L'ADN de cible est amplifiée utilisant les amorces semblables, qui terminent également dans un résidu de rC. - [Ribocloning lu : Clonage d'ADN et construction de gène utilisant des amorces d'ACP terminées avec du ribonucléotide]