Protocoles de détection de mutation

Décrit une croix expérimentale dans les souris qui peuvent être employées pour définir et tracer la germe-ligne induite mutations qui tracent à un chromosome simple. La croix est une modification et une extension d'un écran récessif de mutagénèse de trois-génération conventionnelle. Inclut : Le plan d'élevage de mutagénèse ; Contraintes de Consomic ; Produire des mutations ; Se produire et femelles de Genotyping G2 ; Progéniture de Genotyping G3 ; Progéniture de Phenotyping G4 ; etc… - [lu un écran visé pour détecter les mutations récessives qui ont le protocole quantitatif d'effets]

Le but de cette méthode est d'identifier les gènes transcriptionally actifs dans des segments copiés de l'ADN genomic. Les utilisations hybridation de protocole et la purification d'affinité de récupérer biotine-ont étiqueté les cDNAs qui lient à un segment de 500 kb de l'ADN humaine copié dans un vecteur de CCB. Cependant, la méthode peut être facilement adaptée à d'autres clones de DNAs genomic copiés dans des vecteurs de grande capacité. - [La sélection directe lue des cDNAs avec de la grande ADN de Genomic copie le protocole]

Dans cette méthode, BAL 31 de nucléase est employé pour faire uni- ou bi-directionnelles des suppressions dans un segment de l'ADN copiée. BAL 31 est une enzyme complexe et tend à assimiler une population des cibles bicaténaires d'ADN d'une mode asynchrone, suppressions créées par BAL 31 sont donc bien plus hétérogène dans la taille que ceux créés par les enzymes processive telles que l'exonuclease III. - [la génération lue des ensembles bi-directionnels de mutants de suppression par Digestion avec le protocole de nucléase de BAL 31]

L'ADN bicaténaire du plasmide de recombinaison, du phagemid, ou de l'ADN réplicative de forme du bactériophage M13 est assimilée avec deux enzymes de restriction dont les sites du mensonge de fendage entre une extrémité de l'ADN de cible et de l'accepteur pour l'amorce universelle. L'enzyme qui fend plus près l'ordre de cible doit produire d'un extrémité franche ou des 3 ' terminus enfoncé ; l'autre enzyme doit produire d'un quatre-nucléotide dépassant 3 ' terminus. - [Génération lue des ensembles de mutants emboîtés de suppression avec le protocole d'Exonuclease III]

Protocole pour la détection de mutation par le polymorphisme conformationnel à un fil (SSCP). Inclut : Protocole d'ACP ; Gels de SSCP ; - [Détection lue de mutation par protocole conformationnel à un fil de polymorphisme (SSCP)]

Ce protocole est le premier du fendage deux chimique en phase solide de description de l'erreur d'assortiment (SpCCM), une méthode pour la détection des mutations en ADN genomic. L'ADN réduit jusqu'à 2 que le kb de longueur peut être analysé pour déterminer la position (à moins de point d'ébullition 10-15) et l'identité du nucléotide mal adapté. - [Détection lue de mutation par le fendage chimique en phase solide des erreurs d'assortiment utilisant le protocole radioactif de sondes]