Bienvenue à la station moléculaire !

Vous devez vous enregistrer avant que vous puissiez signaler sur nos forum ou utiliser nos dispositifs avançés. Registre Maintenant ! Son libre et rapide !

Déjà enregistré ? Procédure de connexion maintenant ci-dessous.

Nom d'Utilisateur :

Mot de passe :

Rappelez-vous Moi ?

Déjà enregistré et a oublié votre mot de passe ? Clic ci-dessous pour le récupérer.

Récupérez Le Mot de passe Perdu

Joignez maintenant - il est rapide et libre !

La station moléculaire est le plus grand réseau des chercheurs, des scientifiques et des amoureux de la science n'importe où !

Poteaux Récents de Forum

Proteomics À la maison	Proteomic Proclame un protocole Station Moléculaire	Protocoles de Proteomic (liens externes)	Proteomic Bioinformatics	FAQ de Proteomic	Kits et produits de Proteomic	Forum de Proteomic	Proteomics Blog	Livres sur Proteomics	Nouvelles de Proteomic

Techniques d'Identification de Protéine

Les protéines peuvent être seperated par la 2-D électrophorèse de gel et identifié avec la spectrométrie de masse

On estime que la teneur en protéines d'une cellule se compose des milliers de différents types de protéines
avec un intervalle dynamique d'expression. La technologie qui actuel est utilisée comporte la recherche des éléments protéiques, fractionnement de ce mélange très complexe,
protéolyse enzymatique de chaque espèces séparées et d'isolement, analyse spectrométrique de masse étendue et apparier finalement les données structurales produites contre une base de données des protéines connues ou des produits prévus d'expression de génome.
Ce procédé comporte une mesure initiale en utilisant 1 ou l'électrophorèse à deux dimensions (De). En utilisant 1-DE, des protéines sont séparées sur la base de la masse moléculaire ; la technique est reproductible et peut être utilisée pour des protéines dans l'intervalle de masse du kDa–10 300, mais a limité la résolution.
Pour la séparation des mélanges plus complexes de protéine, 2-DE est la méthode préférée. Ceci implique de séparer les protéines first selon leur charge nette par une étape de mise au point isoélectrique et puis, dans la deuxième dimension, selon leur masse moléculaire utilisant l'électrophorèse dodécylique de gel de sulfate-polyacrylamide de sodium (SDS-PAGE) qui donne une séparation élevée efficiency.
 La spectrométrie de masse (MME.) est la méthode de choix pour l'identification
des protéines séparées, et de la spectrométrie de 2-DE et de masse
représentez maintenant une technologie par laquelle plusieurs mille protéines peuvent être séparées, détecté et identified d'une mode automatisée.
La méthodologie de Proteomics est au commencement faite par séparation et emplacement de protéine par 2-DE suivi de l'excision des protéines d'intérêt qui subissent alors la digestion protéolytique pour rapporter un mélange des fragments de peptide. Les peptides sont analysés par la spectrométrie de masse, utilisant au commencement MALDI-MS pour la détermination et la génération de masse moléculaires d'une masse fingerprint de peptide. Si la base de données recherchant à ce stade donne des résultats ambigus, une analyse spectrométrique de la deuxième masse, ESI-MS/MS, est employée pour produire de l'information d'ordre qui est utilisée pour une recherche plus rigoureuse de base de données.
Du spectre de la masse obtenu sur l'analyse du mélange de sommaire de protéine, la carte ou le peptide fingerprint de masse de la masse de peptide c.-à-d. les masses moléculaires des fragments de peptide, peut être assurée. Souvent, si l'ordre d'acide aminé est sufficiently seul et la masse
l'exactitude sufficiently haute, la carte de masse peut être employée pour rechercher des bases de données 12–15 pour identifier la protéine avec succès sans besoin d'autres d'analyses. Si, cependant, la recherche de base de données mène aux résultats ambigus, alors d'autres analyses de MME., comportant l'utilisation de la spectrométrie de masse tandem (MS/MS), sont entreprises séquentiellement sur chaque peptide dans le mélange pour produire d'un ordre, ou ordre partiel, connu sous le nom d'étiquette d'ordre, pour ces peptides. Ceci est fréquemment réalisé par l'utilisation d'ESI-MS/MS19 et habituellement une étape supplémentaire de purification doit être exécutée pour séparer les peptides des sels et des détergents qui peuvent être présent qui causent l'atténuation du signal de peptide.

Davantage de base de données recherchant avec tous les deux la masse moléculaire du peptide
et l'information d'étiquette d'ordre devrait mener à la protéine non ambiguë identification.