Purification de protéine

La purification de protéine est essentielle dans la caractérisation de votre protéine d'intérêt. La purification de votre protéine permet à un d'étudier la fonction de la protéine, et à son activité enzymatique. L'information de Stuctural de la protéine peut également être obtenue à partir des protéines épurées comprenant l'information RMN et à trois dimensions telle que la cristallisation de protéine.

Ainsi comment on va-t-il épurer environ une protéine ?

Des protéines peuvent être épurées selon la taille, la solubilité, la charge et l'affinité obligatoire

Des protéines peuvent aisément être visualisées et différenciées par des méthodes d'électrophorèse. Des techniques de gel de thèses peuvent également être employées pour obtenir de petites quantités (microgrammes) de polypeptides purifiés. Cependant, elles ne fournissent pas des grands nombres de protéines épurées dans leur état indigène. Les quantités substantielles de protéines épurées, de la commande de beaucoup de milligrammes, sont nécessaires pour élucider entièrement leur structure tridimensionnelle et leur mécanisme d'action. Plusieurs mille protéines ont été épurées en forme active sur la base des caractéristiques telles que la taille, la solubilité, la charge et l'affinité obligatoire spécifique. À chaque étape dans la purification, on analyse la préparation pour une propriété distinctive de la protéine d'intérêt (par exemple activité enzymatique) d'évaluer l'efficacité du procédé.

Des protéines peuvent être séparées de petites molécules par la dialyse par une membrane semi-perméable, telle que la membrane de cellulose avec des pores. Des molécules ayant des dimensions sensiblement plus grandes que le diamètre de pore sont maintenues à l'intérieur du sac de dialyse, des molécules de wwhereas et des ions plus petits transversalement les pores d'une telle membrane et émergent dans la dialyse en dehors du sac.

Une séparation plus distinctive sur la base de taille peut être réalisée par la technique de la chromatographie de gel-filtration. L'échantillon est appliqué au dessus de la colonne se composant des programmes poreux faits d'un insoluble mais polymère fortement hydraté tel que le dextrane ou agarose (qui est des hydrates de carbone) ou polyacrylamide. Sephadex, sépharose, et biogel sont les préparations commerciales utilisées généralement de ces programmes, qui sont en général 100 micromètres de diamètre. Les petites molécules peuvent entrer dans ces programmes mais les grands ne peuvent pas. Le résultat est que de petites molécules sont distribuées dans le soluté à l'intérieur des programmes et entre eux, tandis que de grandes molécules sont situées seulement dans la solution entre les programmes. Les grandes molécules passent plus rapidement par cette colonne et émergent d'abord, parce qu'un plus petit volume est accessible à elles. Il convient noter que la commande de l'apparition des molécules d'une colonne des programmes poreux est l'inverse de la commande dans l'électrophorèse de gel, dans laquelle un cadre continu de polymère empêche le mouvement de grandes molécules. Des quantités de protéine beaucoup plus grandes peuvent être séparées par la chromatographie de filtration au gel que par l'électrophorèse de gel mais au prix de plus à basse résolution.

La solubilité de la plupart des protéines est abaissée aux concentrations élevées en sel. Cet effet, appelé le salage, est très utile, bien que pas le puits ait compris. La dépendance de la solubilité à l'égard la concentration en sel diffère d'une protéine à l'autre. Par conséquent le salage peut être employé pour fractionner des protéines. Le salage est également utile pour concentrer les solutions diluées des protéines.