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La vie est short, l'art désirent ardemment. ~Hippocrates c.460 - 357 BC. Médecin grec et le père de la médecine.
Près d'absorbance UV est l'absorbance UV à 280 nm : Un spectromètre simple peut mesurer la quantité de protéine dans une solution. L'absorption de rayonnement par des protéines dans le UV proche dépend de la teneur de Tyr et de TR (et jusqu'à un degré sur la quantité de Phe et d'obligations du bisulfure). Ainsi l'A280 change considérablement entre différentes protéines (pour une 1 solution de mg/mL, de 0 jusqu'à 4 [ pour quelques protéines tyrosine-riches de laines ], bien que la plupart des valeurs soient dans l'intervalle 0.5–1.5). Cette méthode a ses avantages ; elle est simple, et l'échantillon est réparable. Soyez cela comme il peut il a également les inconvénients qui incluent, interférence d'autres chromophores, et la valeur spécifique d'absorption pour une protéine indiquée doit être déterminée. L'extinction de l'acide nucléique dans la région 280-280-nm peut être pas moins de 10 fois que de la protéine à leur même longueur d'onde, et par conséquent, quelques pour cent d'acide nucléique peuvent considérablement influencer l'absorption.
L'absorption de l'obligation de peptide est fortement dans loin le UV avec un maximum à environ 190 nm que l'absorption forte des protéines à ces longueurs d'onde a été utilisée dans la détermination de protéine. En raison des difficultés provoquées par absorption par l'oxygène et la basse sortie des spectrophotomètres conventionnels à cette longueur d'onde, des mesures plus commodément sont faites à 205 nm, où l'absorbance est environ la moitié celle à 190 nm. La plupart des protéines ont des coefficients d'extinction à 205 nm pour une 1 solution de mg/mL de 30–35 et entre 20 et 24 à 210 nm. Les diverses chaînes latérales, y compris ceux de Trp, Phe, Tyr, sien, Cys, se sont réunies, et Arg (du fait ordre décroissant), apportent des contributions à l'A205. Les avantages de cette méthode incluent la simplicité et la sensibilité. L'échantillon est réparable et en outre il y a peu de variation de réponse entre différentes protéines, de ce fait permettant la détermination proche-absolue de la protéine. Les inconvénients de cette méthode incluent la nécessité pour l'étalonnage précis du spectrophotomètre dans loin le UV. Beaucoup de mémoires tampons et d'autres composants, tels que des groupes de heme ou de pyridoxal, absorbent fortement dans cette région.
Voir également les nos protocoles de protocole de concentration en protéine et de concentration en protéine d'autres laboratoires.
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