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Protocole d'Analyse de Protéine de Lowry

Détermination de concentration en protéine par le protocole d'analyse de Lowry Prtoein

Matériaux

1. Complexe-formation du réactif : Préparez juste avant l'utilisation en mélangeant les solutions courantes suivantes dans la proportion 100:1:1 (par vol.), respectivement :
            Solution A : 2% (w/v) Na2CO3 en eau distillée.
            Solution B : 1% (w/v) CuSO4·5H2O en eau distillée.
            Solution C : tartrate de potassium de sodium de 2% (w/v) en eau distillée.

2. Préparez Le NacOh de 2 N.

3. Réactif de foline (disponible dans le commerce) : Utilisation à 1 concentration de N.

4. Normes : Utilisez une solution courante de protéine standard (par exemple, fraction d'albumine de sérum de boeuf V) contenant la protéine de 2 mg/mL en eau distillée, enregistrée congelé –à 20°C. Préparez les normes en diluant la solution courante avec de l'eau distillée comme suit :

Stockez la solution   (µL)     0         2.5      5          12.5     25        50        125      250      500

L'eau                (µL)     500      498     495      488      475      450      375      250      0
Protéine concentrée.    (µg/mL) 0          10       20        50        100      200      500      1000    2000

Méthode

1. À 0.1 ml d'échantillon ou standard, ajoutez 0.1 ml de NacOh de 2 N. Hydrolysez à 100°C pendant 10 minutes dans un bloc de chauffage ou un bain d'eau bouillante.

2. Refroidissez l'hydrolysat à la température ambiante et ajoutez 1 ml fraîchement de mélangé complexe-en formant le réactif. Laissez la solution se tenir à la température ambiante pendant 10 minutes.

3. Ajoutez 0.1 ml de réactif de foline, en utilisant un mélangeur de vortex, et laissez le stand de mélange à la température ambiante pendant 30–60 minutes (n'excédez pas 60 minutes).

4. Lisez l'absorbance à 750 nm si la concentration en protéine était en-dessous de 500 µg/mL ou à 550 nm si la concentration en protéine était entre 100 et 2000 µg/mL.

5. Tracez une courbe standard d'absorbance en fonction de la concentration initiale en protéine et employez-la pour déterminer les concentrations inconnues en protéine.

Références de Méthode de Lowry

Basé sur le protocole par Jakob H. Waterborg.

Lowry et autres. J. Biol. Chem. 193 : 265-275 (1951)

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