Bioinformatics, Protocoles, Protéine Proteomics d'ARN d'ADN

Les Protocoles À la maison Bioinformatic De Biologie Usine l'Encyclopédie Moléculaire De Biologie De Forum de Biologie Les Images Que Moléculaires de Biologie Bookmark Nous !

à la maison > protéine > immunoprécipitation-protocole > index.php

Recherche À la maison De Proteomics De Protéine d'ARN d'ADN De Videos De la Science De Nouvelles De la Science De Biologie Moléculaire BÊTA ! Produits moléculaires de biologie de techniques moléculaires de biologie de matériel de laboratoire de Bioinformatics et liens relatifs de biologie de services

Biologie Moléculaire Blog

Envoyez cette page à un ami

Stations Intracellulaires

Puces moléculaires alphabétiques PCR PCR en temps réel RNAi de Microarray de protéine de Proteomics de peptide de formation image de microbiologie de spectrométrie de masse d'immunologie de Microarrays d'histologie de biologie de cellules de librairie de mémoires tampons communes de mémoires tampons de botanique d'anticorps et d'électrophorèse de gel de culture et tache occidentale de Transfection de biologie de cellules de tige de SiRNA

 

Protocoles de Protéine

Encyclopédie de Protéine

Protéine Bioinformatics

Forum de la Science de Protéine

Protéine Blog

Nouvelles d'ADN

 

Protocole d'Immunoprécipitation

Immunoprécipitation et protocoles.

IP de base de Protocole d'Immunoprécipitation :

1. Traitez vos cellules

2. Moissonnez les cellules en ajoutant 500 uL de solubiliser la mémoire tampon, éraflez et traversez la seringue 21-gauge des temps de l'aiguille un X5 d'homogénéiser.

3. Conduisez une précipitation d'ACIDE TRICHLORACÉTIQUE (ceci sera employé pour normaliser si vous radioactif les cellules par exemple avec S-35)

4. Pré-effacement : Pré-clair en ajoutant 2 uL de X, souris ou lapin ou sérum de chèvre (où X est les espèces animales dans lesquelles l'anticorps primaire a été augmenté) aux échantillons entiers et incubez dans un rotateur pendant 30 minutes à la température ambiante.

5. Retirez le sérum de X par l'incubation avec l'immunoprecipitin de 30 uL avec la rotation de 30 minutes à la température ambiante.

6. Centrifugez les échantillons pendant 3 minutes à 13, 000 t/mn.

7. Après centrifugation, ajoutez 5 uL d'anticorps primaire (protéine spécifique anti-Y de X, où Y est l'anticorps augmenté dans un animal pour votre protéine d'intérêt) aux supernatants et incubez durant la nuit à 4 degrés de C.

8. Ajoutez 100 uL d'immunoprecipitin aux échantillons. Alternativement vous pouvez utiliser Zysorbin (Invitrogen). (Zysorbin exige quelques changements mineurs au protocole)

9. Centrifugeuse à 13, 000 t/mn pendant 3 minutes. Retirez le surnageant.

10. Lavez le granule 3 X avec 1 ml de mémoire tampon froide de lavage d'IP (ajoutez les inhibiteurs de protéase à la mémoire tampon de wah avant l'utilisation) avec la secousse pendant 5-10 minutes entre chaque lavage.

11. Employez ce granule pour exécuter sur un gel de SDS-PAGE. Vous pouvez ajouter la mémoire tampon témoin de SDS (mémoire tampon de chargement de protéine) au ce et le chargement sur le gel directement après l'ébullition.

©2005 Molecularstation.com