Analyse de protéine de Bradford

Détermination de concentration en protéine par l'analyse de Bradford

Un procédé simple pour la détermination de la concentration en protéine dans les solutions est l'analyse de protéine de Bradford qui a été décrite d'abord par Bradford (Bradford et autres, 1976).

Une évaluation de concentration en protéine est essentielle pour être faite rapidement et exactement dans beaucoup de domaines d'étude de protéine. L'analyse de Bradford est devenue la méthode préférée pour mesurer la protéine dans beaucoup de laboratoires. Cette technique est plus simple, plus rapidement, et plus sensible que la méthode de Lowry. En outre, en comparaison avec la méthode de Lowry, elle est sujette à moins d'interférence par les réactifs communs et les composants sans protéines des échantillons biologiques.

L'analyse de Bradford se fonde sur l'attache du colorant Coomassie G-250 bleu à la protéine.

Les études détaillées indiquent que le colorant libre peut exister sous quatre formes ioniques différentes pour lesquelles les valeurs de pKa sont 1.15, 1.82, et 12.4. Des trois formes chargées du colorant qui prédominent sous la solution acide de réactif d'analyse, les formes rouges et vertes plus cationiques ayez les maximum d'absorbance à 470 nanomètre et à 650 nanomètre, respectivement. En revanche, la forme bleue plus anionique du colorant, qui lie à la protéine, a un maximum d'absorbance à 590 nanomètre.

Ainsi, la quantité de protéine peut être estimée en déterminant la quantité de colorant sous la forme ionique bleue. Ceci est habituellement réalisé en mesurant l'absorbance de la solution à 595 nanomètre.

Le colorant semble lier le plus aisément à l'arginyl et aux résidus lysyliques des protéines. Cette spécificité peut mener à la variation de la réponse de l'analyse à différentes protéines, qui est l'inconvénient principal de la méthode. L'analyse de Bradford d'original affiche la grande variation dans la réponse entre différentes protéines. Plusieurs modifications à la méthode ont été développées pour surmonter ce problème.

Cependant, ces modifications ont généralement comme conséquence une analyse moins robuste qui est souvent plus susceptible de l'interférence par d'autres produits chimiques. En conséquence, la méthode initiale conçue par Bradford demeure la formulation la plus commode et la plus employée couramment. Deux types d'analyse sont décrits ici : l'analyse standard, qui convient à la mesure entre le µg 10 et 100 de la protéine, et la microanalyse, qui détecte entre le µg 1 et 10 de la protéine. Ce dernier, bien que plus sensible, est également une interférence plus encline d'autres composés en raison de la quantité plus grande de à réactif relatif de colorant témoin sous cette forme de l'analyse.

voyez également : Protocole d'analyse de protéine de Bradford

Références de méthode de Bradford

Bradford, anal. Biochimie. 72:248, 1976.