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Types de protéine Microarray et de puces d'anticorps

Protéine et anticorps Microarrays

Puces et anticorps Microarrays - plaques en verre, Microwell/Nanowell de protéine

            Deux formats principaux de puce de protéine sont maintenant utilisés, y compris les plaques en verre et les nanowells (8.27).  En raison des grandes quantités de méthodes d'adhérence de glissière seulement les types les plus communs et les plus principaux seront mentionnés ici.
            Il est important que les puces de protéine maintiennent des protéines dans un état actif aux fortes densités, sont compatible avec la plupart des arrayers et modules de balayage commerciaux, et peuvent être imprimés d'une telle mode que les protéines restent dans un environnement hydraté (8.27). (Voir Le Schéma 2).

Puces de Plaque En Verre
Les plaques en verre ont l'avantage qu'elles sont compatibles avec le matériel microarray standard et le matériel de détection utilisés pour des puces d'ADN.  Elles sont également peu coûteuses.  La majorité d'études utilisent maintenant des plaques en verre.  Cependant, elles ont une cadence élevée d'évaporation et sont susceptibles de la contamination transversale possible (8.27). 
            Les premières stratégies pour la création des alignements de protéine sur le verre ont été développées par Mirzabekov et autres.  Des alignements ont été produits par les protéines d'immobilisation dans des poches minuscules de gel qui ont été attachées à la surface de verre.  Une variété d'immunoassays, la détection d'antigène, et les analyses enzymatiques ont été effectuées.  En raison de la structure de la matrice 3D, immobilisation de protéine était très efficace (28-30). 
Dans une autre étude, des protéines ont été attachées à une surface de verre lancée avec un agent de réticulation qui réagit avec des amines primaires (31).  Des protéines ont été repèrées dans une solution de glycérol de 40% qui maintient des protéines dans un environnement humide et empêche la déshydratation.  Pour déterminer que leurs microarrays de protéine étaient faisables pour des analyses biochimiques, ils ont testé trois interactions connues de protéine-protéine, trois réactions connues de kinase-substrat, et trois interactions connues de protéine-ligand en utilisant les protéines fluorophore-étiquetées, le triphosphate d'adénosine radioactif, et les ligands synthétiques couplés à l'albumine fluorescently étiquetée de sérum de boeuf (BSA), respectivement.  Dans la plupart des expériences, un nombre restreint de protéines ont été repèrées cependant dans une expérience qu'elles ont identifié une tache simple dans un alignement de 10.000 taches contenant une autre protéine.  Ce travail a démontré le potentiel des microarrays de protéine dans des analyses biochimiques de grande puissance cependant que leur étude a analysé un nombre très petit de protéines et des activités de roman n'ont pas été identifiées.
Une autre étude a utilisé des plaques en verre pour la détection de plusieurs antigènes de protéine.  Des analytes ont été repèrées sur une surface de verre traitée à une forte densité à l'aide d'un dispositif main-repèrant ou d'un robot microarray.  Les analytes repèrées ont été détectées utiliser des anticorps attachés à une amorce d'oligonucléotide et à une réaction d'amplification de cercle de roulement.  La technique a eu une sensibilité élevée, un grand choix dynamique, et l'excellente reproductibilité de tache-à-tache
(32).
La plupart des groupes rangent maintenant directement des protéines et des anticorps sur les plaques en verre ordinaires (31.33-35) et repèrer est effectués dans un environnement humidité-commandé (8).

Puces de Microwell/Nanowell
            Compatible avec le cadrage standard microarray et de détection de matériel cependant est exigé.  Cette méthode est versatible pour des analyses et des réactions solution-basées de multiple-composant.  L'évaporation est réduite et il n'y a aucune contamination transversale.  En outre ces puces sont relativement peu coûteuses (8.27).
Zhu et autres, fabriqués une structure ouverte, à savoir nanowells sur une surface du polydimethylsiloxane (PDMS) supportée par les plaques en verre standard (36). 
Ces puces se composent d'un choix de microwells dans un élastomère jetable de silicone, le poly(dimethylsiloxane) (PDMS) (37). Des alignements de Microwell permettent à de petits volumes de différentes analytes d'être en masse emballés sur une puce simple, pourtant demeurent physiquement isolés pendant le traitement en différé ultérieur. Des protéines ont été en covalence attachées aux puits en utilisant un éditeur absolu 3-glycidoxypropyltrimethoxysilane (GPTS) (38).
Des molécules capturées peuvent être facilement récupérées des nanowells.  Une fois couvert de l'or dans les nanowells, on s'attend à ce que des analyses de résonance de plasmon de spectrométrie de masse et de surface de haut-débit puissent être exécutées.  Le plus grand inconvénient de cette technique est qui specialzed le matériel est exigé pour charger les nanowells à une forte densité (8.27). 

Ensuite : Méthodes de connexion de protéine et d'anticorps - création d'une puce de Microarray

Allez de nouveau à :

Introduction et fond aux puces de protéine et aux puces d'anticorps.

Références pour la protéine et l'anticorps Microarrays