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            Pour attacher des protéines à une surface pleine, la surface du substrat doit être modifiée pour réaliser la capacité de liaison maximum (8.27). Les protéines sont attachées à la puce sur une couche de connexion de protéine (voir le schéma 3). Cette couche est typiquement un film organique qui change avec la nature de l'application. Une variété de matériaux ont été étudiées comprenant l'agarose (39), l'hydrogel dextrane-basé (40), les polymères d'hydrogel poreux de polyacrylamide et les acides hydrophiles de polyamino (41).
            Une méthode commode de connexion a utilisé la nitrocellulose-membrane ou la poly-L-Lysine a enduit le verre tels que des protéines pourraient être passivement absorbées sur la surface par les interactions non spécifiques (34.42.43). Les protéines jointes lient sur la surface dans des orientations aléatoires et peuvent être lavées hors fonction dans des conditions de lavage rigoureuses. Cependant, le niveau de bruit est habituellement plus élevé en raison de l'absorption/adsorption non spécifique.
            Une connexion plus spécifique et plus forte est réalisée en créant les surfaces réactives sur le verre qui peut en covalence réticulation aux protéines (31.36.26). Un éditeur absolu de silane de bifunctional est employé pour constituer une monocouche de art de l'auto-portrait-assembled (SAM), qui a un groupe fonctionnel qui réagit avec les groupes d'hydroxyle sur le verre la surface de verre, et un groupe différent qui est libre pour réagir avec les groupes primaires d'amine de protéines ou peut être autre chimiquement modifié selon la spécificité maximum d'extension (44.45). Une autre variation est le verre or-enduit (46.47). L'avantage des puces or-enduites est que SPR et spectrométrie de masse peuvent être intégrés comme méthodes de détection pour surveiller la dynamique de la réaction, et pour identifier les molécules capturées.
            Les approches covalentes mentionnées ci-dessus d'édition absolue cependant ont un inconvénient. Étant donné que les ligands réactifs existent également dans les chaînes latérales des protéines il est possible que leur connexion aléatoire puisse modifier la confirmation indigène des protéines, réduire l'activité des protéines, ou les rendre inaccessibles aux sondes (8.27).
            Afin d'orienter des protéines uniformily loin de la surface de la puce, des protéines peuvent être fondues avec une étiquette de haut-affinité à leurs termini aminés ou de carboxy. Avec cette méthode, proteins/antibodies immobilisés sont pour rester dans leur conformation indigène, de ce fait permettant aux analytes l'accès efficace aux sites actifs des protéines. Cette méthode était première avec succès démontrée avec la connexion de 5800 protéines de fusion contenant une son étiquette sur une plaque en verre nickel-enduite (26). D'autres méthodes d'affinité telles que glutathione/GST ont été également utilisées (48).
Des méthodes d'immobilisation basées par Streptavidin en ont été également largement utilisées pour attacher biotinylated l'élément biologique sur la surface d'alignement (49).
            Le matériel de support de puce est important parce que les protéines sont extrêmement sensibles aux propriétés physiochimiques. Par exemple, des alignements polaires sont chimiquement traités pour lier aux protéines hydrophiles cependant que de telles surfaces sont peu convenables pour des protéines de membrane de cellules (par exemple récepteurs couplés parprotéine) comme elles possèdent des domaines hydrophobes (9).
            Les protéines ne se comportent pas comme les acides nucléiques, et les différentes protéines se comporteront dans différentes voies quand exposé à la même chimie extérieure. Les différents types les chimies extérieures favoriseront ainsi la conservation de quelques protéines et causeront la dénaturation ou la perte d'activité de d'autres. Par conséquent, le choix approprié de la chimie extérieure est activité importante car ceci permettra aux protéines immobilisées des types divers de maintenir leurs structures secondaires et tertiaires, et ainsi leur biologique. Ce problème est magnifié quand le nombre de différentes taches sur les augmentations de puce, en tant que là peut être 100 voies différentes d'immobiliser 100 protéines différentes afin d'obtenir le pliage et la fonction appropriés de toutes les protéines. En outre un problème significatif est parce que les fonctions de la plupart des protéines sont actuel inconnu, tellement là n'est aucune méthode à tester réellement si elles sont encore fonctionnelles sur la puce (7).

Ensuite : Méthodes de la Livraison De Puce de Protéine

Références pour la protéine et l'anticorps Microarrays

De nouveau à :

Introduction et fond aux puces de protéine et aux puces d'anticorps.

Types de puces d'anticorps et de protéine

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