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Extension Mieux habillée

Renseignez-vous sur l'extension mieux habillée.

L'extension mieux habillée augmente l'exactitude dans la capacité de tracer l'extrémité d'une transcription de l'extrémité’ 5 au nucléotide même.

Comment l'Extension Mieux habillée Fonctionne

1. D'abord nous avons une transcription qui se produit habituellement naturellement in vivo. Nous moissonnons simplement l'ARN cellulaire contenant la transcription dont les 5’ nous terminent veulent tracer. 
2. Alors nous hybridons un oligonucléotide étiqueté (l'amorce) au moins de 12 nucléotides à l'ARN cellulaire.  Habituellement des amorces au moins de 18 nucléotides longs sont utilisées.  Afin de concevoir une amorce que nous devons savoir l'ordre au moins d'une partie de l'ARN nous voulons tracer.  La spécificité de cette méthode dérive de la complémentarité entre l'amorce et la transcription, juste comme la spécificité de tracer S1 vient de la complémentarité entre la sonde et la transcription.  En principe cette amorce devrait pouvoir sélectionner la transcription que nous voulons tracer d'une mer de l'autre RNAs indépendant.
3. Alors nous employons le transcriptase renversé pour étendre l'amorce d'oligonucléotide à l'extrémité’ 5 de la transcription. Le transcriptase renversé tire une copie d'ADN d'un descripteur d'ARN.  Une fois que cette réaction mieux habillée d'extension est complète, nous pouvons dénaturer l'hybride de RNA-DNA et electrophorese l'ADN étiquetée avec des repères sur un gel à haute résolution comme celui utilisé dans l'ordonnancement d'ADN.  Il est commode d'utiliser la même amorce utilisée pendant l'extension mieux habillée pour faire un ensemble d'ordonnancer des réactions aux deoxynucleotides.  Alors nous pouvons utiliser les produits de ces réactions d'ordonnancement comme repères.

L'extension mieux habillée peut également nous donner une évaluation de la concentration d'une transcription donnée.  Plus la concentration de notre transcription est haute, plus les molécules de l'amorce étiquetée hybridera et donc plus étiquetées les transcriptions renversées, plus la bande sur l'autoradiograph du gel électrophorétique est foncée.

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