Bienvenue à la station moléculaire !

Vous devez vous enregistrer avant que vous puissiez signaler sur nos forum ou utiliser nos dispositifs avançés. Registre Maintenant ! Son libre et rapide !

Déjà enregistré ? Procédure de connexion maintenant ci-dessous.

Nom d'Utilisateur :

Mot de passe :

Rappelez-vous Moi ?

Déjà enregistré et a oublié votre mot de passe ? Clic ci-dessous pour le récupérer.

Récupérez Le Mot de passe Perdu

Joignez maintenant - il est rapide et libre !

La station moléculaire est le plus grand réseau des chercheurs, des scientifiques et des amoureux de la science n'importe où !

Poteaux Récents de Forum

Site De Signet De Signet

PCR A basé La Mutagénèse Dirigée Par Site

Mutagénèse de Site de Réaction en chaîne de Polymérase

Renseignez-vous sur la mutagénèse dirigée par site basée par PCR.

(référez-vous au diagramme ci-dessous)

Commencez d'abord par un plasmide contenant un gène avec un codon de tyrosine de TAC que nous voulons modifier à un codon de phénylalanine de TTC. Afin d'accomplir ceci que nous devons changer à la paire (bleue) dans l'original en paire de T-A. Ce plasmide a été isolé dans une contrainte normale d'E.coli qui méthyle en date des ordres de GATC. Les groupes méthyliques sont indiqués en jaune. Les étapes suivantes sont exécutées pour accomplir ceci :

• Chauffez le plasmide pour séparer ses brins.
• Nous recuisons alors les amorces mutagéniques qui contiennent le codon de TTC, ou son complément renversé, GAA. La base modifiée dans chaque amorce est indiquée dans le rose.
• Nous exécutons alors quelques ronds de PCR (environ 8) avec les amorces mutagéniques pour amplifier le plasmide avec le codon modifié. Nous employons une polymérase thermostable d'ADN, telle que la polymérase de Pfu, pour réduire au minimum des erreurs en copiant le plasmide.
• Nous préparons alors l'ADN dans la réaction de PCR avec DpnI pour assimiler le sauvage-type méthylé ADN. Puisque le produit de PCR a été rendu in vitro, il n'est pas méthylé et n'est pas coupé. Pour finir nous transformons des cellules de E. coli avec de l'ADN préparée. En principe, seulement l'ADN subie une mutation survit pour transformer. Ceci est contrôlé en ordonnançant l'ADN de plasmide de plusieurs copie.



Facteurs pour un PCR réussi

Ne peut pas Trouver Votre Problème ? Vous assurez vous voir le forum de PCR pour le dépannage de PCR et des solutions aux problèmes communs. Vous pouvez également signaler des questions à d'autres chercheurs simplement en s'enregistrant et en cliquant alors sur le nouvel amorçage de poteau ou le point d'interrogation ci-dessous !

Articles de PCR

PCR Dépannant

Histoire de PCR

Conception d'Amorce de PCR

Extension Mieux habillée

Enzymes de PCR

Facteurs pour PCR réussi

PCR A basé La Mutagénèse Dirigée Par Site

Analyse des réactions de PCR

PCR En temps réel

Sujets de Forum de Mutagénèse

Amorçages
Titre/Affiche d'Amorçage	Dernier Poteau	Réponses	Vues
veuillez aider les informations-DE base sur la mutagénèse site-dirigée PCR trypsine	05-01-2008 06:21 P.M. par kmunson779 "	1	145
mutagénèse dirigée par site en utilisant Invitrogen Genetailor satishreddy27	06-19-2007 03:34 P.M. par satishreddy27 "	0	526

Vous devez VOUS ENREGISTRER MAINTENANT pour signaler une question d'aide dans le forum d'électrophorèse de gel. Procédure de connexion maintenant si vous vous êtes déjà enregistré.

Sujets de Forum de PCR

Droite-pcr dans RT-PCR, bandf de wih de mon intrest nous avons également obtenu deux la lumière que supplémentaire band.how peut j'améliorer mon result.should je diminue mon concentration?or mieux habillé si I...
Promoteur GSTP1 - produit non spécifique bonjour, j'ai un problème avec la traduction de la longueur des produits de PCR. La longueur d'un ordre d'ADN de descripteur (promoteur GSTP1 humain) est au sujet de 1650bp...
Nouveau aux techniques de PCR bonjour là ! mon nom est 'défi et je fais mon projet d'étudiant préparant une licence sur la caractérisation génétique des poulets avec le mtDNA. J'apprécierais vraiment...
Guide de dépannage de PCR bonjour chacun, nous essayons d'installer un guide de dépannage de PCR. Aidez s'il vous plaît par les problèmes communs de signalisation et leurs solutions ici thanks:notworthy :
Contamination de PCR je fais ajouter un problème pendant le programme de PCR L'ADN de templete, le dNTP, l'amorce, la polymérase, le tube de PE etc..to alors que j'ai oublié d'ajouter U-U:mellow d'huilage : ainsi. I...
PCR, produits inachevés ? Bonjour, j'emploie la haute-fedility polymérase d'iproof pour amplifier un fragment 6kb d'ADN dans la taille d'un génome. Avec Taq qui est presque impossible mais iproof...
Inhibition de PCR par DNA HELLO TOUT ! J'ai un grand problème de pcr. J'essaye de conduire un pcr en utilisant l'ADN de plasmide que j'ai purifiée en utilisant un kit de Qiagen Midi. J'emploie cette ADN pour faire...
l'aide de plz dans ces le dNTP des questions 1-What font pour PCR ? 2 mes échantillons de PCR restent au dessus du gel d'agarose tandis que l'échelle montrait un passage complet ?
Ennui de Re-PCR bonjour à tous. J'essaye d'amplifier un gène, et en même temps de présenter des mutations de point, pour permettre la digestion avec de l'enzyme spécifique de...
Perte de volume pendant le PCR ? ! ! Ainsi j'exécute mes tubes de PCR pour 30 cycles avec un volume de 15ul. Tous couverts étroitement, mais moi terminons vers le haut avec le volume de l'UL 8-10 après PCR. J'ai essayé de les tourner en bas de...
Vous devez VOUS ENREGISTRER MAINTENANT pour signaler une question dans le forum de PCR en cliquant ici.

Visualisez plus de discussions de PCR et le dépannage dans : Forum de PCR

Déni/limites de service & Politique d'Intimité& ©2005-2007 Station.com moléculaire, tous droits réservés.

Envoyez cette page à un ami