Analyse des produits d'ACP

Analyse d'électrophorèse de gel d'agarose des produits d'ACP

À rapidement et facilement analysez et résolvez les produits d'ACP, un 3% NuSieve peut être l'agarose utilisée de GTG (FMC Bioproducts, Rockland, MOI) et le gel de l'agarose de 1% Seakem GTG (FMC Bioproducts) exécuté dans TBE (Tris-borate de 89 millimètres, EDTA de 2 millimètres) ou TAE (40 millimètres de Tris-acétate, EDTA de 2 millimètres, pH approximativement 8.5). Les bandes resolved d'ADN sont détectées en souillant les gels avec approximativement 0.5 μg/mL de bromure d'éthidium, suivies de destaining avec l'eau ou le vert 1 de SYBR® (Molecular Probes Inc., Eugene, OU) et finalement photographiées sous l'illumination UV. Utilisez un basepair 123 (point d'ébullition) ou 1 échelle de kilobasepair (kbp) comme repère commode pour des évaluations de taille des produits.

D'autres méthodes analytiques pour analyser des produits d'ACP

Il y a une série d'autres méthodes de détection disponibles pour l'analyse de produit d'ACP, telle que l'éthidium bromure-a souillé 8-10% gels de polyacrylamide exécutés dans la mémoire tampon de TBE, gels ou point méridional/taches, subcloning et ordonnancer direct, analyse de CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE SOUS HAUTE PRESSION, et l'utilisation de 96 microplates bons, de nommer uns. Les renversés point-épongent l'amplification d'ACP de cartels de méthode avec la détection non radioactive. L'introduction des colorants fluorescents à l'ACP, ainsi qu'un instrument approprié pour la quantification en temps réel et en ligne des produits d'ACP pendant l'amplification a mené au développement de l'ACP cinétique ou de l'ACP quantitatif. L'ACP quantitatif (QPC) mesure l'accumulation de produit d'ACP pendant la phase exponentielle de la réaction et avant que l'amplification devienne vulnérable, c.-à-d., quand les réactifs deviennent limités. Le prisme 7700 (biosystèmes appliqués) d'ABI et le LightCycler (produits biochimiques moléculaires de Roche, Mannheim, Allemagne) sont des dispositifs de détection fluorescents intégrés qui permettent la fluorescence surveillant ou continuellement ou une fois par cycle. Ces instruments peuvent également caractériser des produits d'ACP par leurs caractéristiques de fusion, par exemple, pour distinguer des mutations de singlebase d'un sauvage-type ordre. Le système quantitatif multiplex récemment conçu d'ACP de Mx4000™ (Strategene, La Jolla, CA) Peut produire et analyser des données pour des analyses fluorescentes multiples du temps réel QPCR.