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FACS

La Technique de FACS

Les lymphocytes de repos comportent beaucoup de sous-populations fonctionnelles, qui sont identifiées et distinguées de l'un l'autre sur la base de l'expression différentielle d'héritier des protéines de surface de cellules, qui peuvent être détectées utiliser les anticorps spécifiques.

Écoulement Cytometry

Un outil puissant pour définir et mesurer des lymphocytes est le cytometer d'écoulement, qui détecte et compte différentes cellules passant dans un jet par un rayon laser. Un cytometer d'écoulement équipé pour séparer les cellules identifiées s'appelle une trieuse fluorescence-lancée de cellules (FACS). Ces instruments sont utilisés pour étudier les propriétés des sous-ensembles de cellules identifiés en utilisant les protéines monoclonales de cellule-surface d'anticorps. Différentes cellules chez une population mélangée sont d'abord étiquetées par traitement avec des anticorps monoclonaux spécifiques étiquetés avec les colorants fluorescents, ou par les anticorps spécifiques suivis des anticorps étiquetés d'anti-immunoglobuline. Le mélange des cellules étiquetées est alors forcé avec beaucoup de volume d'arger de salin par un bec, créant un jet fin de liquide contenant des cellules espacées séparément à des intervalles. Car chaque cellule le traverse un rayon laser dispersent la lumière de laser, et toutes les molécules de colorant liées à la cellule seront excitées et entreront en fluorescence.

Les tubes sensibles de photomultiplicateur détectent la lumière dispersée, qui fournit l'information sur la taille et le granularity de la cellule, et les émissions de florescence, qui fournissent l'information sur la liaison des anticorps monoclonaux étiquetés et donc sur l'expression des protéines de cellule-surface par chaque cellule. Dans la trieuse de cellules, les signaux passés de nouveau à l'ordinateur sont employés pour produire d'une charge électrique, qui est passée du bec par le jet liquide au temps précis que le jet casse vers le haut en gouttelettes, chacun qui ne contient pas plus qu'une cellule ; des gouttelettes contenant une charge peuvent alors être braquées du jet principal des gouttelettes pendant qu'elles passent entre les plats de la charge opposée, de sorte que des gouttelettes franchement chargées soient attirées à un plat négativement chargé, et vice versa. De cette façon, des sous-populations spécifiques des cellules, distinguées par la liaison de l'anticorps étiqueté, peuvent être épurées d'une population mélangée des cellules. Alternativement, pour épuiser une population des cellules, le même fluorochrome peut être employé pour étiqueter différents anticorps dirigés aux protéines de repère exprimées par les divers types peu désirés de cellules.

Trier de Cellules

La trieuse de cellules peut être utilisée pour diriger les cellules étiquetées vers un canal de rebut, maintenant seulement les cellules non étiquetées. Quand des cellules sont étiquetées avec de l'anticorps fluorescent simple, les données du cytometer d'écoulement sont habituellement affichées sous forme d'histogramme de l'intensité de fluorescence contre des nombres de cellules. Si deux anticorps ou plus sont utilisés, chacun couplé au colorant fluorescent différent, alors les données est plus habituellement affiché dedans lui forme d'un diagramme d'éparpillement bidimensionnel ou comme diagramme de découpe, où la fluorescence d'une teindre-étiquetée anticorps est tracée contre celle d'une seconde, avec le résultat qu'une population des cellules étiquetant avec un anticorps peut être encore subdivisée par son étiqueter avec du deuxième anticorps. En examinant un grand nombre de cellules, coulent le bidon cytometry donnent des données quantitatives sur le pourcentage des cellules soutenant différentes molécules. Car la puissance de la technologie de FACS s'est développée, progressivement plus d'anticorps étiquetés avec les colorants fluorescents distincts peuvent être utilisés en même temps.

Trois, quatre et égalisent cinq analyses de couleur peuvent maintenant être manipulés par les machines très puissantes

Protocoles de FACS