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Sujets de dépannage et de forum de stérilisation
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La stérilisation est définie comme destruction de toutes les formes de la vie. Elle peut être effectuée par de divers agents. Pour les conditions pratiques du laboratoire bactériologique plusieurs de ces agents tels que l'électricité, la lumière du soleil, etc., sont de peu de valeur et sont limités dans leurs applications ; d'autres sont si bien adaptés aux buts particuliers que leur utilisation est presque entièrement limitée à de telles applications. Les méthodes de principe employées le plus souvent stérilisent à l'autoclave (la chaleur, vapeur et pression - une combinaison) et des produits chimiques, toutefois la stérilisation à l'autoclave est la plus pertinente si exécuté correctement
Il y a deux méthodes importantes de stérilisation.
A)
1) les solutions concentrées détruisent des micro-organismes en retirant l'eau de leurs cellules (plasmolyse), par exemple, dans la conservation de la nourriture par les solutions concentrées de sel ou de sucre. Les micro-organismes accoutumés à un substrat nutritif concentré peuvent souffrir le plasmoplysis (éclatement de la cellule) si placé dans un support moins concentré. Dans l'un ou l'autre cas, s'ils sont soumis graduellement aux conditions de changement, la mort est retardée ou empêchée.
2) la dessication est néfaste pour beaucoup de microbes, espe cially ceux qui ne forment pas des spores. Par exemple, picoseconde. Radicicola est très sensible à la dessication sur le couvrir-verre ordinaire ou sur le coton.
3).
Ceci est habituellement utilisé comme brûleur de bunsen dans le laboratoire, toutefois il y a plusieurs méthodes de chauffage :
1. Dans la stérilisation dans une flamme nue,
(a) Les moyens les plus simples de stériliser un instrument en métal est de la chauffer au ness rouge dans une flamme. Cette méthode est toujours adoptée pour le platine de ster, le cuivre, etc., les fils et le fer et les spatules de nickel, le forceps, etc. ilizing.
Une aiguille de platine devrait toujours être soigneusement séchée avant stérilisation, en la tenant près de la flamme. Ceci évite la pulvérisation, qui disperse des micro-organismes, particulièrement si le matériel moite, par exemple, graisse ou protéine, sur l'aiguille est immédiatement poussé dans la flamme.
(b) Un instrument peut être stérilisé en le flambant, c.-à-d., en le passant rapidement par une flamme chaude. Cette méthode est utile pour des instruments, etc., ayant poli des surfaces exemptes de plis dans lesquels les micro-organismes pourraient échapper à la destruction, par exemple, couteaux, tiges en verre, traitements des aiguilles de platine, bouches des tubes à essai, flacons, pipettes, etc.
(c) Des blessures profondes sont stérilisées par cautère avec un instrument de chauffage à une chaleur rouge terne.
2.
En cas d'urgence, les petits instruments, aiguilles, etc., peut être stérilisé en les plongeant en éther ou alcool absolu et après déplacement allumant le fluide adhérent et lui permettant de consommer la surface des instruments. Répétez le processus. Il peut alors sans risque supposer que l'appareil ainsi traité est stérile.
3.
Des bougies de filtre de porcelaine sont stérilisées en les chauffant à la chaleur blanche dans le four à moufle. Cette méthode de stérilisation ne peut pas être appliquée aux filtres de porcelaine avec des garnitures en métal, telles que des filtres de Berkefeld.
La destruction des animaux autopsiés et des gaspillages accumulés du laboratoire mieux est également accomplie de cette manière.
4.
L'exposition à l'air chaud est la méthode habituelle de stériliser toute la verrerie, instruments avec des traitements en métal, etc., mais il n'est pas approprié aux positions secondaires organiques, excepté les laines, le coton et le papier.
Pour assurer la stérilisation efficace, la verrerie préparée, etc., doit être placé dans un gaz ou un four électriquement de chauffage (contenant un thermomètre s'enregistrant plus de 200 C.) dont la température est mise à jour approximativement à 150 C. pour une heure, ou des 180 C. pendant dix minutes. On doit permettre au le four de refroidir à 60 C. avant d'ouvrir la porte pour éviter la rupture de la verrerie par des courants d'air froid. Du coton, des laines, et le papier sont légèrement roussis à cette température,
L'appareil doit être absolument propre et sec avant d'être stérilisée.
4.
La stérilisation par la chaleur moite peut être effectuée dans une de quatre voies :
1.
Quelques substances utilisées comme milieux de culture, étant riches dans le composé volatil ou les substances autrement chimiquement instables, ne peuvent pas être chauffées à 100 C. sans changement marqué (par exemple, coagulation) et dans une certaine mesure tion de destruc de leurs propriétés ; sérum sanguin, par exemple.
Pasteur a prouvé que de tels medias peuvent être un meilleur ster ilized en les chauffant à une basse température (55-60 C.) pendant longtemps qu'à température élevée (70 C. ou même 100 C.) pendant une courte période. Dans ce processus, la chaleur n'est pas appliquée 'directement, en règle générale. La commande de la température fait d'habitude au moyen d'eau de chauffage au degré désiré.
Le chauffage prolongé à une basse température constitue la pasteurisation. Dans la pratique, cependant, on le constate qu'afin de détruire toute la pasteurisation d'organizations doit être COM bined avec la méthode de chauffage discontinu conçue par Tyndall. Des medias albumineux soumis à la méthode de Tyndall doivent être incubés finalement à 37 C. pendant quarante-huit heures pour éliminer tous les spécimens affichant la contamination.
2.
(a) Chauffage continu. L'eau à 100 C. détruit les formes végétatives des bactéries presque instantanément, et des spores dedans de cinq à quinze minutes d'habitude, bien que beaucoup de spores des espèces résistantes ne soient pas détruites par le chauffage de plusieurs heures à l'eau de 100 C. suspectée de la contamination d'eaux d'égout peuvent être rendues ainsi sûres pour le boire simplement par l'ébullition pendant quelques minutes.
Cette méthode s'applique aux instruments en métal, les seringues, les taquets en caoutchouc, la tuyauterie en caoutchouc et en verre, et tout autre petit appareil.
(b) Chauffage discontinu. (Méthode de Tyndall.) Tyndall a observé que certaines formes résistantes ont trouvé dans une infusion faite à partir du foin n'ont pas été détruites en chauffant l'infusion à 100 C., une fois que, même lorsque la température a été soutenue pendant une période prolongée, pourtant en la bouillant pendant une courte période trois jours successifs toute la matière organique a été détruite. Sa théorie était celle par la chauffage à 100 C., les formes tative de vege mais pas les spores n'ont été détruites. Ce dernier germent pendant que le fluide se refroidit et sont détruits pendant le deuxième chauffage. Quelques spores, cependant, échappent à de struction au deuxième chauffage ;
celles-ci auront germé avant que le troisième chauffage soit dû. Après la troisième stérilisation par la chaleur fait.
L'explication maintenant donnée, cependant, est que l'ance de résistance des micro-organismes est graduellement abaissé sous l'influence des chauffages répétés. Ce principe de la chauffage trois jours successifs, un support à stériliser est maintenant connu comme méthode de Tyndall de stérilisation. En général la pratique en matière de laboratoire, vapeur est utilisée au lieu de l'eau à 100. , mais ceci rend nécessaire l'appareil spécial, tandis que l'eau se prête aisément aux moyens actuels.
La nature physique du support, la résistance extraordinaire des spores de certaines espèces de bactéries ou toutes les deux en association, peuvent exiger que ce chauffage intermittent soit continué sur une plus longue période, c.-à-d., quatre, cinq, six, etc., des jours en succession pour la même chose ou une plus longue période chaque fois, ou que la période entre les chauffages mittent inter soit rallongée de pendant vingt-quatre heures à pendant quarante-huit heures.
La méthode de Tyndall est valeur du fait des medias de composition sensible peuvent être stérilisés sans produire les modifications indésirables, comme sont souvent produites par le haut ture de tempera de l'autoclav.
3. Stérilisation en vapeur débordante à 100 C. continus ou discontinus, (a) chauffage continu. L'ébullition ou l'exposition simple à la vapeur à 100 C., quoique l'exposition soit prolongée, n'est pas une méthode fiable de stérilisation. Quand des micro-organismes ont été séchés, leur résistance aux effets de la chaleur est beaucoup améliorée, et est particulièrement ceci le cas quand ils sont mélangés aux substances d'une nature colloïdale. Certaines formes résistantes de protoplasme connues sous le nom de spores ne peuvent être détruites par un chauffage à 100 C., même lorsque la température a été mise à jour pendant des minutes eral de sev.
(b) Chauffage discontinu. Utilisation générale pour l'ilization de ster des medias.
Ce principe de stérilisation a avancé par des trouvailles de Tyndall son application plus large dans le travail bactériologique avec l'utilisation de la vapeur débordante. La vapeur à haute pression peut être utilisée à l'avantage de bon si une station de chauffage central est disponible. Le stérilisateur d'Arnold se sert de la vapeur pour le processus de stérilisation et se prête aisément à la méthode continue et discontinue.
4. Stérilisation par la vapeur surchauffée (sous pression et donc au-dessus de 100 C.). L'eau, les seringues, les dressages chirurgicaux, literie, appareillage du l'Inde-caoutchouc, filtres, vieilles cultures, milieux de culture, etc., non blessés par de hauts termperatures, peuvent plus rapidement être stérilisés en chauffant en vapeur sous pression.
L'exposition à la vapeur à une température de 115 C. pendant vingt minutes est dans la plupart des cas suffisante pour assurer la stérilisation,
Mais quelques medias, pomme de terre par exemple, exigent une température de 120 C. pendant dix à quinze minutes. On le réalise maintenant que les medias soumis à cette température subissent les modifications hydrolytiques qui les rendent peu convenables pour la culture des micro-organismes plus sensibles. La stérilisation dans la vapeur surchauffée est continuée dans un appareil spécial appelé un autoclave, qui peut être ainsi construit quant au passage par la vapeur directe ou indirecte. Ce dernier est le plus désirable pour la stérilisation des medias.
5)
La lumière semble agir en produisant les germicides chimiques puissants, probablement organiques par oxydes, dans le moyen entourant les bactéries. Certains raies de lumière, du bleu, violet et l'ultraviolet sont en particulier néfastes pour les cellules vivantes. C'est à ces rayons que la lumière du soleil doit son action de désinfection. L'utilisation pratique a été faite des rayons ultra-violets dans la stérilisation de l'eau en utilisant la lampe de vapeur de mercure de Tonnelier-Hewitt ayant un quartz au lieu d'un tube en verre, car ces rayons ne traversent pas le verre.
6)
La stérilisation peut être effectuée par la filtration des gaz ou des liquides par les matériaux qui maintiendront des micro-organismes.
Le meilleur exemple de la filtration des gaz est l'utilisation du coton branche des flacons et des tubes contenant des micro-organismes. Le coton n'est assez poreux pour permettre l'échange nécessaire des gaz mais permettra ni à la poussière ni aux micro-organismes étrangers d'entrer. La stérilisation d'air ou d'autres gaz si 3d antérieur par le coton dépendrait de l'épaisseur de la couche de coton et également de la force qui a été exercée.
Certains fluides utilisés dans le travail bactériologique ne peuvent pas être soumis même à une quantité modérée de la chaleur sans modifier profondément leur nature. Afin de faire un stérile si liquide, elle est passée par un navire cylindrique, clôturée à une extrémité comme un tube à essai, et faite de la porcelaine poreuse de « biscuit », dur brûlée et non vitré (filtre de terre de chambre) ou du kieselguhr, d'une terre à diatomées fine (filtre de Berkefeld) et nommée une bougie ou une bougie.
Les pores des filtres plus fins sont si petits que tandis que les liquides, et les solides traversent en solution, des micro-organismes soient maintenus et les passages de liquide à travers dans un état stérilisé.
Pasteur dans ses premiers travaux a utilisé des plats de plâtre comme le support de filtrage, mais en raison de Chamberland recherche, porcelaine poreuse remplace maintenant le plâtre. L'amiante finement déchiqueté emballé étroitement dans un creuset de Gooch servira de filtre bactérien a fourni la couche de l'amiante est suffisamment épais. La vitesse de filtration est habituellement très lente parce que les pores du filtre sont tellement très petits ; donc surmonter cette aspiration ou pression d'inconvénient est généralement utilisé pour s'empresser le processus. Cette méthode peut ne pas exclure les organizations filtrables.
7)
Dans une des méthodes plus récentes a conçu pour la préparation des vaccins antirabiques que le vaccin est préparé en plaçant le virus (moelle épinière d'un lapin rabique) dans un sac de collodion et en le dialysant en eau distillée courante. Le virus vivant est détruit, pourtant ses propriétés de immunisation sont intactes maintenu. Tout à fait l'effet opposé peut être obtenu sous le quelque quelles différentes circonstances. Si un sac de collodion contenant une suspension d'une organization pathogène soit placé dans la cavité de corps d'un animal susceptible les organizations dans le sac prospèrent, étant nourri par les liquides corporels qui répandent par la membrane semi-perméable.
COLLANT, J.G. : Rage Hydrophobia. Une étude de virus fixe, détermination de M.L.D., traitement vaccinique (Hogyes, Pasteur, et vaccin dialysé), et essais d'immunité. Journal des maladies infectieuses, vol. XIV (1914), Pp. 33-52.
8)
Le morcellement ou l'écrasement réel des cellules microbiennes est recouru à pour expliquer les enzymes intracellulaires.
B.
1)
La stérilisation par des infectants de DIS a mais utilisation limitée dans le travail bactériologique. La quantité de désinfectant nécessaire pour détruire les organizations existantes dans un support nutritif est plus grande que la quantité nécessaire pour empêcher la multiplication d'une organization qui peut ultérieurement être utilisée comme inoculum ; le support est donc rendu inutile.
Comme exemple, la formaline 1-1000 le chlorure mercurique, 1.5%, le phénol de 5%, la solution composée de 2% du crésol, etc., sont bon marché et adaptable dans beaucoup de cas. La teinture de l'iodin est valeur pour des blessures de peinture.
Les savons de terrain communal, et plus de savon particulièrement vert, ont une valeur germicide de situation difficile, et ceci en même temps que leur action dissolvante sur les graisses et la protéine, et le nettoyage mécanique qui accompagne leur utilisation, justifie leur assigner un endroit important parmi les désinfectants chimiques.
Des désinfectants utilisés pour stériliser la peau avant pus de colonne, sang, etc. lecting, du sujet vivant doivent être soigneusement retirés en lavant la pièce bien avec de l'alcool avant de rassembler le matériel, autrement la présence du désinfectant gênerait matériellement la croissance ultérieure des organizations dans la culture.
3. Des désinfectants sont également ajoutés aux filtrats stériles qui ne sont plus exigés comme milieux de culture. À cette fin une petite quantité d'un certain désinfectant (tel que le thymol ou le camphre) qui est sans action chimique sur les constituants du fluide est choisie.
Une quantité de l'acide carbolique (0.5%) ou de tout autre produit chimique est fréquemment ajoutée aux vaccins, aux limites de CCB, aux sérums, etc., pour des buts préservatifs.
4. Des désinfectants sont parfois employés pour stériliser une culture quand les produits des microorgansims sont sous le tigation d'inves. Le chloroforme, l'éther, le toluol, le pétrole de l'ail ou de la moutarde, etc., qui peuvent être éliminés après par évaporation, sont parmi le plus utile à cet égard.
2)
Les réactifs chimiques comme appartiennent à la classe connue sous le nom d'antiseptiques, c.-à-d., les substances dont empêchez la croissance, mais ne détruisent pas la vie bactérienne, sont évidemment inutiles.
Les bouches des tubes à essai, des tubes de fermentation, des pipettes, etc., sont d'habitude branchées avec du coton avant stérilisation. À cette fin le coton est idéal car il est bon marché et adaptable, sert à filtrer dehors des micro-organismes de l'air, tandis que permettez à ing la diffusion prête des gaz, et ensuite une fois utilisé lui peut être brûlé.
Le papier (journal ordinaire) peut être employé pour envelopper les articles en verre comme boîtes de Pétri, Paraboloïdes de profond-culture, pipettes, etc., lesquels souhaite entreposé dans un état stérile et pour le quel coton n'est pas adaptable.
La verrerie est stérilisée afin des micro-organismes de destruction présents sur sa surface et dans ou sur le coton ou le papier utilisé respectivement pour brancher ou s'envelopper. Après que la stérilisation le coton et le papier servent à empêcher les organizations micro d'entrer dans et de souiller les ustensiles stériles.
Séchez la chaleur, cependant pas en tant que pertinent un destroyer de germe en tant que chaleur moite, êtes plus adaptable à la stérilisation des fioles de culture vides, des pipettes et de toute autre verrerie. L'ization à air chaud de steril accomplit non seulement la stérilisation des articles en verre, des prises de coton, etc., mais « place » les prises de sorte qu'elles puissent être manipulées avec un plus grand service.
Toute la verrerie doit être absolument propre et sèche ou contenir des traces d'alcool seulement avant la préparation à la stérilisation ; autrement la stérilisation ne peut pas faire. Si considérez l'humidité capable est présente dans des tubes à essai, des flacons, etc., elle ne s'évaporera pas pendant le processus à air chaud de stérilisation, et il est très évident que la température de telles parties moites de la verrerie n'atteindra pas ou au leastwill pour ne pas dépasser 100 C.
Directions. Des tubes et les flacons à essai sont branchés avec du coton. Les forceps ordinaires sont utilisés à cette fin. (La tige en verre d'A peut également être utilisée.) Une petite partie de coton est saisie sur le bord avec le forceps et insérée dans la bouche du tube à essai. Les prises devraient projeter dans des tubes à essai de 3 à CMS 4., et de CMS 3 à 5. Dans le cou des flacons, selon la taille du flacon. Seulement une quantité de coton devrait projeter hors de la bouche qui est suffisante pour protéger la partie tournée extérieure (lèvre) des tubes ou des flacons à essai contre la poussière.
Un effet de « Noël-arbre » doit être évité. Les prises ne devraient pas être ainsi fortement quant à soyez retiré avec la difficulté, ni tellement lâchement quant à l'offre aucune résistance au déplacement. Une peu d'expérience suffira pour expliquer la quantité de coton à utiliser-et la fermeté dont la prise devrait équiper.
Le coton branche pour les tubes à essai, flacons, etc., peut être roulé. Ce genre de prise est plus stable et peut être utilisé plusieurs fois. Faites expliquer à l'instructeur la méthode de roulement.
Pour la stérilisation à air chaud, des tubes à essai branchés avec du coton peuvent être attachés dans de grands paquets ou placé dans des casiers métalliques (jamais dans des tasses d'agate), le coton branche vers le haut. Quelques tubes à essai ne devraient pas être placés dans un grand fil-panier ou dans une armoire d'essai-tube de fil, car il est nécessaire d'économiser l'espace dans le stérilisateur à air chaud.
Des boîtes de Pétri Sont enveloppées séparément en papier et ensemble attachées dans les ensembles de trois, une feuille de journal fait quatre papiers de la taille appropriée pour envelopper des boîtes de Pétri et est peu coûteuse.
Trois boîtes de Pétri Ou plus peuvent être enveloppées ensemble si toutes doivent être utilisées en même temps. Identifiez chacun ordinairement par le nombre de bureau.
Pipettes. Placez une partie de coton dans le bas d'un tube à essai, branchez le dessus seulement de la pipette avec du coton (pas trop étroitement}, partir mais peu du coton projetant dehors. Enroulez une petite partie de coton autour du tiers inférieur de la pipette, insérez la pipette dans le tube à essai jusqu'aux repos d'extrémité sur le coton, faisant le coton enveloppant le servir de prise au tube.
Enveloppez les pipettes ainsi préparé en papier (une couche) et attachez-et identifiez-les ordinairement par le nombre de bureau.
Une caisse couverte en métal est employée souvent pour que les pipettes de possession soient stérilisées. L'extrémité supérieure des pipettes sont branchées avec du coton, la pipette sont insérées dans le cas, l'extrémité ouverte du cas branché avec du coton, et la couverture substituée. (Il n'est pas recommandé pour le nouvel étudiant, comme nécessité de technique soigneuse en retirant une pipette stérile du cas sans souiller ces rester est difficile impressionner cette dernière méthode sur lui).
Des tubes de fermentation sont branchés avec du coton comme dirigé pour des tubes à essai ; la prise de coton ne devrait pas projeter dans l'ampoule.
Des boîtes de Pétri profondes sont enveloppées séparément en papier comme dirigé pour des boîtes de Pétri.
Des glissières et les couvrir-verres sont généralement stérilisés en flambant, mais seulement comme nécessaires.
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| 09-06-2006 11:02 AM | 3 | 1415 | |
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