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Culture Bactérienne de Medias Nutritifs

L'information sur la croissance des cultures bactériennes à l'aide des bouillons de medias et des plats nutritifs de culture

Table des matières :

Sujets bactériens de dépannage et de forum de culture

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Quelle est définition nutritive de medias ?

"chimiquement, comme toutes autres cellules vivantes, les micro-organismes se composent de l'azote organique et inorganique et des sels minéraux ; il est donc nécessaire afin d'accroître un micro-organisme, ce ces trois classes des substances soit rendu disponible, ainsi que l'oxygène, qui est un essentiel à la vie de toutes les structures vivantes. Enfin une certaine quantité d'humidité est absolument nécessaire." (Besson.)

Un aliment s'est préparé à la croissance des micro-organismes est donné le support général d'éléments nutritifs de limite. Un grand nombre de micro-organismes se développeront aisément dans ou sur des medias nutritifs facilement disponibles, comme lait, bouillon, etc... Quelques isms microorgan ont des conditions largement différentes de nourriture et ont besoin pour des medias nutritifs de croissance différant largement en leur composition.

Cependant, il y a quelques règles générales qui doivent être appliquées dans la préparation de tous les medias nutritifs pour l'usage des micro-organismes. Ceux-ci sont brièvement, cela :

Chaque milieu de culture doit

1. Contenez les substances nécessaires pour la croissance.
2. Soyez de la réaction appropriée.
3. Soyez contenu dans des navires qui ont les moyens la protection contre la contamination à partir des sources extérieures.

Classification des medias nutritifs

Des milieux de culture peuvent être classifiés comme :

I. Medias normaux comme se produisant en nature, par exemple, lait, pomme de terre et tous autres légumes, viande et produits à base de viande, sang et sérum de sang, oeuf, sol, etc...

II. Medias préparés, c.-à-d., faits dans le laboratoire. Ceux-ci sont :

(a) De la composition chimique inconnue ; par exemple, agar, gélatine, etc.. nutritifs.

(6) synthétique ; c.-à-d., composition chimique connue, par exemple, solution de Giltay pour les organizations de dénitrification.

Ou comme :

I. Medias Liquides. Ceux-ci incluent :

A. Medias faits à partir du tissu animal et des fluides, par exemple, bouillon nutritif, bouillon de sérum, bouillons d'hydrate de carbone, lait, sang, solution de peptone de nitrate, la solution de Dunham.

B. Medias faits à partir du tissu végétal. Parmi ces derniers soyez : Extrait de malt (orge germée), moût de bière, extrait de levure, infusion de foin, jus de fruit normaux, vins (jus de fruit fermentés).

C. Medias synthétiques.

II. Medias Pleins. Ces le mav soit classifié comme :

A. Liquéfiable, par exemple, agar nutritif, gélatine nutritive.

B. Non-liquéfiable, incluant : 1. Les medias liquides dans un état normal mais qui, une fois que solidifié, ne peut pas être liquéfié par des moyens physiques, par exemple, medias préparés à partir des fluides albumineux et des tissus tels que l'oeuf, le sérum de sang, etc., ou les medias synthétiques ont solidifié avec du silicate de sodium.

2. Medias qui sont pleins dans l'état normal, par exemple, medias végétaux tels que la pomme de terre, la carotte, la banane, etc...

 

 

EXERCICE 3. TITRATION DES MEDIAS

La titration des medias bactériologiques faits à partir de la viande est une étape importante dans leur préparation, car les micro-organismes sont sensibles à la réaction du substrat nutritif.

Procédé. La méthode suivante est utilisée pour des medias de laboratoire, excepté le lait, le moût, le cidre, le vinaigre, les jus de fruit, etc... Voir le p. 22.

1. Mettez 5 c.c. du support à tester et de 45 c.c. de l'eau distillée dans une capsule d'évaporation.

2. Ébullition vivement une minute avec l'agitation de constante (pour chasser tout le CO2 dissous qui s'enregistre comme acidité).

$. ajoutent 1 solution de phénol-phtaléine de c.c. pour l'indicateur.

4. Titrez tandis que chaud, de préférence tout en bouillant, avec de l'hydroxyde du sodium N/20, ou l'acide N/20 chlorhydrique comme cas de mands. 'un faible mais la couleur rose de constante distincte marque le point final. Cette couleur devrait demeurer permanente pendant cinq minutes.

5. Calculez et enregistrez la réaction du support en degrés d'une plus pleine échelle, qui est le nombre de mètres cubes de centi de normale * acide ou alcali actuel dans 1000 cubiques

* Une solution est dite normale quand elle contient alent équivalent de 1 gramme d'un acide ou d'une base en 1 litre.

Un équivalent de gramme d'un acide ou d'une base est cette quantité à la laquelle est équivalent ou neutralisera la molécule de 1 gramme d'un acide monobasique ou d'une base de mon-acide.

L'avantage du système est ce 1 c.c. de n'importe quelle normale la solution exactement neutralisera ou sera exactement équivalent à 1 equiva de milligramme prêté de n'importe quel acide ou base. (Noyes, Wm. A., manuel de Chemistry, 1913, p. 184.)

TITRATION DES MEDIAS 21

centimètres du moyen, en utilisant la phénol-phtaléine comme cator d'indi.

6. Des milieux alcalins sont dénotés en plaçant a sans () le signe avant le nombre de degrés d'alcalinité ; ainsi, 15 indiqueraient que le support était 15 alkalins, ou que l'acide normal de 15 c.c. doit être ajouté par litre à l'ize neutre il.

Des medias acides sont dénotés en plaçant a plus (+) le signe avant le nombre de degrés d'acidité ; ainsi, +15 indiqueraient que le support était 15 acides ou que 15 c.c. de l'alcali normal doit être ajouté par litre au neu tralize le.

Exemple.

Lecture de burette après la titration de 5.4 c.c.

Lecture de burette avant de titrer 2.0 c.c.

Nombre de NacOh de c.c. N/20 requis

pour neutraliser l'acide dans 5 c.c. de

le 4 moyen c.c.

Si 5 c.c. du moyen (qui est 1/20 de 100 c.c.) exigez

3. 4 c.c. de 1/20 NacOh normal pour neutraliser les pres acides oto-rhino, 100 c.c. du support exigerait 20X3.4 c.c. ou 68 c.c. de 1/20 NacOh normal.

Car une solution normale est 20 fois la force d'une solution de normale de 1/20, 100 c.c. du support aurait besoin de 1/20 de 68 c.c. ou 3.4 c.c. du NacOh normal pour la neutralisation ; et un litre ou 1000 c.c. du support exigerait 10X3.4

c. c. ou 34 c.c. NacOh de N/l pour la neutralisation ; c.-à-d., le support est l'acide 34. Une plus pleine échelle. C'est le litre du support.

Quand acide N/20 ou alcali et une partie de 5 c.c. de support (dans 45 c.c. de l'eau distillée) sont utilisés, chaque 1/10 de 1 c.c. correspond à 1 plus pleine échelle.

Réglage de la réaction. Si on le désire pour laisser le support avec a, par exemple, la réaction +15, nous avons :

22 GÉNÉRAL MICROBIOLOGIE

Acidité du support

(+34) 3.4 c.c. par 100 c.c. du support

Acidité désirée (+15). . 1.5 c.c. par 100 c.c. de la quantité moyenne d'alcali normal

être ajouté 1.9 c.c. par 100 c.c. du support

ou 10X1.9 c.c. = 19 c.c. NacOh de N/l par 1000 c.c. du support

Puisque les solutions normales sont de force égale par le volume, c.-à-d., 1 c.c. de N/l l'acide neutralisera juste 1 c.c. de l'alcali de N/l, on le verra aisément que si 15 c.c. Le NacOh de N/l sont exigés pour neutraliser l'acide actuel en 1 litre de support, puis il doit y avoir présent en ce litre exactement 15 c.c. de l'acide de N/l, ou de nous devrait dire que la réaction est (+ 15) de quinze degrés d'acide. Pour n'importe quel autre degré d'acidité ajoutez assez d'alcali normal pour ramener l'acidité au point désiré.

La réaction d'un support change en quelque sorte après sa neutralisation, particulièrement pendant la stérilisation, mais également en se tenant après à la température ordinaire. Ce changement est vers une acidité accrue, et est le plus marqué dans les medias riches en dextrose. En conséquence il est nécessaire de déterminer le titre d'un support lorsqu'il est utilisé plutôt que pour citer des figures obtenues avant stérilisation.

LAIT, CIDRE, VINAIGRE, MOÛT, ET JUS DE FRUIT

Procédé. 1. Dans une mesure 5 c.c de capsule d'évaporation. du support à tester, à l'aide de la pipette appropriée. Faites jusqu'à 50 c.c. avec de l'eau distillée.

Ne chauffez pas. Les medias ci-dessus ne devraient pas être chauffés avant titration, pendant qu'ils contiennent les acides volatils ou d'autres substances organiques qui peuvent s'enregistrer comme acide et qui peuvent être éliminés par l'ébullition,

2. Ajoutez 1 solution de phénol-phtaléine de c.c..

3. Ajoutez, graduellement, d'une burette précise, NacOh IN/20 jusqu'à ce que le premier rose permanent apparaisse.

4. Notez la quantité de NacOh requise pour la titration.

5. Exécutez toujours les doubles.

LAIT 23

6. Enregistrement comme degrés d'acidité le nombre de c.c. de NacOh de N/l qui serait exigé pour neutraliser un litre de support.

LAIT

Le lait est valeur comme support nutritif pour des micro-organismes parce que : Il est un nutriment normal et presque idéal pour un grand nombre de micro-organismes. Sa composition, caséine 3.40%, 3.50% graisse d'ing d'averag et albumen, 4.50% lactoses, 0.75% cendre, 87.75% arrosent, sont une évidence qu'elle fournit la nourriture sous une excellente forme pour la plupart des micro-organismes.

Les activités biochimiques de beaucoup de bactéries les indiquent des individus certainement dans les changements qui traient, particulièrement lait de tournesol, subit. Plusieurs de ces changements sont instruction-macro vu scopically. Certaines de ces derniers sont :

(a) Production Acide. Le lactose, C^IfeOn (lactose), est d'abord inversé, formant deux molécules de hexose, 1 mole. Dextrose et 1 mole. Galactose.

Et chaque molécule des rendements de hexose deux molécules d'acide lactique :

hexose = acide lactique.

C 6 H 12 6 = 2CH 3 CH(OH)COOH.

Le tournesol bleu est tourné rouge.

(b) Production d'Alcali. Le tournesol devient un bleu plus foncé. Ce changement accompagne très souvent le peptonization.

(c) Réduction (décoloration de tournesol). C'est dû à la réduction de la matière de coloration (tournesol). Beaucoup de micro-organismes sécrètent les enzymes qui produisent l'hydrogène. L'hydrogène combine avec le tournesol, le ramenant à son leuco-composé (sans couleur). (le bleu de Methylen devient couleur moins dessous comme des conditions.) Que c'est une réduction et pas une destruction peut être démontré en secouant la culture décolorée de quelques centimètres cubiques de peroxid hydraulique de GEN. Les bactéries qui décolorent le tournesol également

24 GÉNÉRAUX MICROBIOLOGIE

ramenez le peroxid d'hydrogène à E^O et à oxygène naissant qui oxyde de nouveau le tournesol réduit (montrant par le tion de reac du lait le type de micro-organismes présents). L'oxydation re a lieu lentement dans des conditions normales. La réduction peut avoir lieu quand le lait est acide, alkalin ou neutre.

(d) Caillage par la production acide. La caséine, comme la plupart des protéines, est amphotère, c.-à-d., elle est capable de réagir toutes les deux comme acide faible et base faible. La caséine autrement insoluble s'avère dans le lait dans un état partiellement dissous (colloïdal), dû à sa combinaison avec des sels de calcium : le calcium qui a été autrefois combiné avec de la caséine, par la production de l'acide par certaines organizations micro, combine maintenant avec de l'acide lactique ; en conséquence les précipités de caséine, causant le caillage (coagulation). Le mus de Lit est décidément tourné rouge. Le lait ayant un lait caillé acide titrera au-dessus de +50.

(e) Lait caillé de Présure. La coagulation peut également avoir lieu quand le support est neutre ou seulement acide de slightly^. Ce pro duction de lait caillé est dû à a présure-comme l'enzyme produite par des micro-organismes, et est semblable à l'action de la présure employée pour cailler le lait dans des fromageries.

Beaucoup d'espèces génératrices de spores sont trouvées sous le groupe d'organizations présure-productrices. Le lait caillé de présure est habituellement suivi de peptonization.

(/) Peptonization. Le lait caillé produit par l'acide ou ren filet-formant des micro-organismes peut graduellement disparaître, l'ing de leav seulement a petit-comme le liquide. Ceci est provoqué par certaines bactéries qui produisent les enzymes protéolytiques qui assimilent le lait caillé et le rendent soluble. Cette liquéfaction de pro teins pleins aiment la gélatine, la fibrine, le blanc d'oeuf bouilli, le lait caillé, etc., sont due à deux groupes d'enzymes, de pepsine et de trypsine.

La pepsine du corps animal agit seulement dans un support acide (présent dans l'estomac).

La trypsine du corps animal agit seulement dans le milieu alcalin (présent dans l'intestin).

PRÉPARATION DU LAIT 25 DE TOURNESOL

Le pepsinand trypsine-comme des enzymes produites par les organizations micro ne peut pas être ainsi séparé par leur activité dans un support de certaine réaction ; ceci change avec les espèces du micro-organisme et dans des conditions environnementales. Le tonization de dynamisme du lait a lieu habituellement dans un point mort, légèrement alkalin, ou plus rarement la réaction légèrement acide.

Quelques organizations peptonisent le lait sans former un lait caillé de présure.

(g) Production de Gaz. Ceci est caractérisé par pour le mation des bulles de gaz dans le lait, et est généralement accom panied par la formation du lait caillé acide. Très généralement le lait caillé se rétrécit, entraînant l'extrusion du petit lait.

EXERCICE 4. PRÉPARATION DE LAIT DE TOURNESOL

Appareil. Séparée fraîche ou lait écrémé ; appareillage de tion de titra ; NacOh N/20 ; phénol-phtaléine (indicateur) ; pipette de 5 c.c. ; azolitmin, solution de 2% ; entonnoir remplissant ; robinet de pincement ; tubes à essai stériles ; appareil pour le zation de sterili de vapeur.

Méthode. 1. Séparée fraîche ou le lait écrémé devrait être utilisée. Le lait entier est indésirable à cause de sa teneur en graisse.

2. Titrez et enregistrez la réaction du lait. Si le lait titre au-dessus de l'acide 17, la réaction doit être ajustée sur +15. aigres, caillé ou uncurdled le lait, après zation de neutrali, ne fait pas un support nutritif souhaitable pour des micro-organismes, donc, du lait dont le titre est au-dessus de l'acide 20-25 devrait être jeté.

Le lait frais change dans l'acidité de 12 à 18. Le lait avec une acidité au-dessus de 18 à la phénol-phtaléine ne donnera pas une couleur bleue satisfaisante avec l'azolitmin, comme à 18 il commence à montrer la coloration acide.

3. Additionnez 2% d'une solution étalon du litmin azoïque de Kahlbaum. Le tournesol ou l'azolitmin est ajouté simplement comme cator d'indi et devrait être de force suffisante pour pour ne pas diluer le lait tant soit peu.

26 GÉNÉRAL MICROBIOLOGIE

4. Mélangez le lait et l'azolitmin complètement et tube, en utilisant approximativement 8 c.c. du tournesol trayez dans chaque tube.

Notez. Le soin devrait être pris pour empêcher le lait d'contacter le dessus des tubes, car il fera adhérer les fibres de coton au tube. Ceci peut être évité par l'utilisation "d'un entonnoir remplissant."

5, stérilisent par la chauffage en vapeur débordante pendant vingt minutes quatre jours successifs. Il est difficile stériliser lait, dû aux spores résistantes qui sont fréquemment présentes. Si on le désire pour stériliser un plus grand volume que dans des tubes, la période du chauffage devrait être rallongée.

Attention : La surchauffe tend à changer (caramelize) le lactose. La couleur de l'azolitmin peut également être détruite. Ces changements ne sont pas souhaitables.

EXERCICE 5. PRÉPARATION DE POMME DE TERRE DE GLYCÉRINE

Un certain nombre d'organizations chromogènes et pathogènes prospèrent spécialement bien des medias contenant la glycérine. La façon dont la glycérine favorise la croissance de ces isms d'organe n'est pas connue, mais parfois il semble être directement utilisée pour la construction de la graisse (losis de Bact. Tubercu).

Appareil. Grandes pommes de terre saines ; couteau cylindrique de pomme de terre, ou foreur de liège ; couteau ordinaire ; culbuteur ; bonate de voiture de sodium, 1 : solution 1000 ; glycérine, solution de 5% ; grands tubes à essai stériles, ou tubes de pomme de terre de roux ; coton absorbant ou tige de verre courte ; 1 pipette de c.c. ; eau distillée ; appareil pour la stérilisation de vapeur.

Méthode. 1. Nettoyez soigneusement un ou deux grandes pommes de terre.

2. À l'aide d'un couteau de pomme de terre ou d'un foreur cylindrique de liège, cylindres coupés de la pomme de terre, 4 à 6 centimètres. Désirent ardemment et 1.5 à 1.8 centimètre. De diamètre. Avec un couteau ordinaire, divisez en deux chaque cylindre par une coupe diagonale de sorte que chaque morceau ressemble dans la forme à un tube oblique d'agar. Enlevez toutes les parties de la peau sur ces morceaux.

3. Placez dans un culbuteur et imbibez dans un dilué (1 : 1000) solution de carbonate de sodium * pendant vingt-quatre heures seulement.

* Le carbonate de sodium est employé pour neutraliser les acides normaux de la pomme de terre.

PRÉPARATION DE POMME DE TERRE DE GLYCÉRINE

27

4. Ne transférez les morceaux à une solution de 5% de glycérine dans l'eau que durant des vingt-quatre heures seulement plus encore.

5. Placez dans des tubes stériles préparés comme suit : Choisissez les grands tubes à essai supplémentaires 1.5 à 2 centimètres. De diamètre et propre et sec ils. Placez un petit morceau de tige de coton absorbant ou en verre 0.5 centimètre. X2.5 centimètre. Au bas de chacun. Branchez avec du coton et stérilisez dans la voie habituelle. (des tubes de roux doivent seulement être nettoyés et stérilisés.)

Juste avant présenter les morceaux de pomme de terre, ajoutez environ 1 c.c. de l'eau distillée à chaque tube, en utilisant un pette de pi. La pomme de terre ne devrait pas toucher l'eau.

6. Stérilisez par la chauffage à 100 G. sur quatre successifs

jours pendant vingt minutes chaque jour.

Fig. 8. Tubes de Pomme de terre. (Orig. Northrup.)

Attention : Le temps indiqué dans 3 et 4 doit être strictement respecté, autrement les pommes de terre devra être jeté à cause du tion de contamina avec les organizations génératrices de spores résistantes.

RÉFÉRENCE

SMIRNOW, M. R. : La valeur de glycerinated la pomme de terre comme milieu de culture. Cent. F. Bakt., II Abt., Bd. 41, p. 303.

28 GÉNÉRAL MICROBIOLOGIE

EXERCICE 6. PRÉPARATION D'INFUSION DE VIANDE

L'infusion de viande est la base des medias nutritifs ordinaires, comme bouillon, gélatine et agar, et également d'un grand nombre de medias nutritifs spéciaux, comme bouillons de sucre, etc...

Sous ces directions l'infusion suffisante de viande est pré épluchée pour faire 1 litre chaque du bouillon, de la gélatine et de l'agar nutritifs.

Appareil. 1.5 kilogramme (3 Ibs.) Boeuf maigre frais finement coupé ; eau du robinet de 1500 c.c. ; seau d'agateware de 3.5 litres ; grand entonnoir ; stand de boucle ; nettoyez le tissu ; tasse de mesure de 1 litre ; trois flacons erlenmeyer 1 Stériles de litre ; réfrigérateur ; appareil pour la stérilisation de vapeur (autoclav préférable).

Méthode. 1. À 1.5 kilogramme de boeuf maigre finement coupé et frais dans un seau d'agateware de 3.5 litres, ajoutez 1500 c.c. de l'eau du robinet, * ne mélangez complètement et permettez de se tenir dans un endroit frais (réfrigérateur préféré) que durant seize à vingt-quatre heures seulement.

2. Installez un grand entonnoir dans un stand de boucle et placez un morceau de tissu propre dans l'entonnoir. Placez une tasse de mesure sous l'entonnoir.

3. Tendez l'infusion de viande par la gaze propre, extrayant complètement tout le jus. 1.5 litre devrait être récupéré. Si n'importe quelle perte se produit faites jusqu'à 1500 c.c., en utilisant l'eau du robinet.

Ce fluide sanguineous résultant contient les albumines solubles de la viande, des sels solubles, des extractifs et de la matière de coloration, principalement hémoglobine.

4. Placez 500 c.c. de l'infusion de viande dans chacun de trois flacons erlenmeyer 1 Stériles de litre. Substituez les prises, et les chauffez dans l'autoclav à 120 C. pendant trente minutes. C'est un procédé plus sûr que le chauffage pendant un plus long temps en vapeur débordante.

Pendant ce chauffage les albumines coagulables par la chaleur sont précipitées.

_ avoir être trouver nécessaire et aussi plus commode pour préparer et stériliser viande infusion avant procéder avec le préparation le différent support dans qui être utiliser,

* Approximativement 500 c.c. de l'eau à chaque livre de viande.

PRÉPARATION DU BOUILLON NUTRITIF 29

à cause des organizations génératrices de spores résistantes qui sont presque universellement présentes dans la viande hachée ; l'économie du temps est également une considération. À moins que stérilisé l'immedi ately, infusion de viande se décompose rapidement dû à l'abondance et à la diversité de la flore microbienne saisie pendant les divers processus de la préparation pour le marché.

L'infusion faite à partir du boeuf maigre fraîchement coupé changera dans l'acidité entre une plus pleine échelle +15 et +25. Si la réaction est nettement inférieure ou plus haute, l'action microbienne a lieu, qui est, ou peut être, nuisible à la valeur nutritive du support dans lequel l'infusion de viande est utilisée.

L'infusion contient la matière albumineuse très petite et consiste principalement en sels solubles du muscle, des certains extractifs, et des sujets de coloration modifiés avec de légères traces de protéine non coagulées par la chaleur.

EXERCICE 7. PRÉPARATION DE BOUILLON NUTRITIF

Le bouillon nutritif est le liquide standard utilisé pour les micro-organismes tivating de cul. C'est pratiquement une peptone taining trompeuse de thé de boeuf. La peptone, une protéine soluble non coagulable par la chaleur, est ajoutée pour substituer les substances albumineuses coagulées qui précipitent quand l'infusion de viande est stérilisée. Du sel est ajouté pour remplacer les phosphates et les carbonates, dont certains sont précipités sur ajuster l'acidité du support par l'hydroxyde de sodium.

La réaction des medias nutritifs ordinaires est ajustée sur environ +15 avec de la phénol-phtaléine comme indicateur, car on le constate que la plupart des micro-organismes se développent mieux sur un neutre moyen ou légèrement alkalin au tournesol.

Quand on l'exige que les medias nutritifs soient clairs, l'albumen d'oeufs réduit à une pâte lisse avec de l'eau (ou le blanc battu par bien d'un oeuf) est ajouté. Par coagulation, l'albumen d'oeufs retire mécaniquement toutes les petites particules suspen dedans le sion qui autrement traverserait le papier filtre.

30 GÉNÉRAL MICROBIOLOGIE

Ce processus est le plus efficace quand les lates de coagu d'albumen d'oeufs lentement.

Car l'albumen d'oeufs commence à se coaguler à environ 57 C. il est absolument impératif pour les résultats de bon que le moyen soit refroidi à 40-50 C. avant l'ajout de l'albumen d'oeufs.

Bien que l'albumen d'oeufs contienne un peu de la matière uble de solénoïde non coagulable par la chaleur, comme sucre, des extractifs et la matière minérale, qui servira de nourriture microbienne, son but dans des medias nutritifs est principalement pour sa action fying de clari.

Appareil. infusion stérile de viande de 500 c.c. ; eau du robinet de 500 c.c. ; 10 gms. Peptone, Witte ; 5 gms. Sel ; 10 gms. Albumen d'oeufs (ou un oeuf) ; seau de 3.5 agate-articles de litre ; appareillage de titration ; NacOh N/20 ; NacOh de N/l ; phénol-phtaléine (indicateur) ; eau distillée ; pipette de 5 c.c. ; grande tige d'agitation ; équilibres bruts ; grand brûleur à gaz ; grand entonnoir ; papier filtre tressé ; entonnoir remplissant ; tubes à essai stériles ; ballon stérile de 1 litre ; appareil pour la stérilisation de vapeur -.

Méthode. 1. Mettez le contenu d'un flacon de l'infusion de viande (500 c.c.) dans un seau d'agate et ajoutez 500 c.c. de l'eau du robinet.

2. Ajoutez 1% de la peptone de Witte et 0.5% de sel.

3. Ajoutez 10 gms. De l'albumen d'oeufs qui a été bien mélangé à 100 c.c. de l'eau du robinet. (mis l'albumen d'oeufs dans un culbuteur et ajoutez assez d'eau pour former une pâte. Remuez jusqu'à ce que lisse. Ajoutez alors l'eau restante. Un oeuf * bon battu peut être substitué.) Mélangez tous complètement.

4. La chaleur en vapeur débordante pendant des minutes forty-five ou dans l'autoclav à 120 C. pendant trente minutes.

5. Titrez avec du NacOh N/20.

6. Ajustez la réaction du support sur +15 avec du NacOh normal ou le HC1 normal. Retitrate et s'ajustent encore au besoin.

7. Le contrepoids et notent le poids.

8. Bouillez quinze minutes au-dessus d'une flamme libre, remuant contre stantly.

* Il n'est pas nécessaire d'ajouter l'eau à l'oeuf.

GÉLATINE 31

9. Contrebalancez et restaurez n'importe quelle perte par évaporation avec de l'eau distillée.

10. Filtrez tandis que le papier filtre tressé traversant chaud d'ébullition lavait juste précédemment avec le litre de 1/2 d'eau bouillante.

11. Passez le filtrat par le même papier jusqu'à ce qu'il soit lumineux et clair.

12. Remplissez trente tubes à essai stériles, en utilisant approximativement 8 c.c. de ce support pour chaque tube. Mettez le bouillon restant dans un grand, stérile flacon.

13. Chauffez les tubes et le contenu à essai en vapeur débordante vingt minutes trois jours successifs.

14. Pour stériliser un grand flacon de bouillon, chauffez pendant vingt minutes pendant quatre jours en succession.

GÉLATINE

La gélatine est l'un des outils du microbiologiste. En tant que tels, elle atteint deux objectifs : en tant qu'un milieu de culture plein, un dispositif technique par lesquels l'isolement de l'des espèces simples de micro-organisme est rendu possible, et, à ces organizations qui sécrètent les enzymes protéolytiques, eux sert de matériel azoté de nourriture.

La gélatine soutient la distinction d'être la première substance utilisée pour un milieu de culture plein. Ce support était origi nated en 1882 par Robert Koch et a depuis a révolutionné la science de la microbiologie. Avant l'introduction des medias pleins, l'isolement de l'des espèces simples de micro-organisme a impliqué beaucoup de difficulté et presque toujours une certaine mesure d'incertitude. Pour citer de Jordanie : "ce ne peut pas être une seule coïncidence que les grandes découvertes en bactériologie ont suivi rapidement sur les talons de cette amélioration technique importante, et elle est peut-être pas trop pour réclamer que l'élévation de la bactériologie de l'des congeries d'inachevé bien que les observations importantes dans la position d'une science biologique moderne devraient être datées environ de cette période (1882)."

Les premiers plats de Koch ont été faits par versant liquéfiés

32 GÉNÉRAL MICROBIOLOGIE

gélatine nutritive sur les morceaux stériles et plats de verre. L'étudiant sur se familiariser avec les difficultés d'éplucher pré les plats satisfaisants avec l'utilisation de la "boîte de Pétri" appréciera ceux rencontrés dans des premiers plats de la gélatine de Koch.

La gélatine est une protéine, c.-à-d., un matériel azoté de nourriture. Elle contient pendant que ses éléments essentiels carbone, hydrogène, oxygène, et azote (d'autres éléments, cependant, comme le soufre, le phosphore, etc., peuvent être présents). Son formule empirique selon Schiitzenberger et bourgeois est C7eHi24N24O29, mais une telle formule fournit seulement l'information des constituants en chef et permet à on de former une certaine idée de la taille énorme de la molécule ; aucune idée de la structure de la molécule n'est donnée. Cependant, par l'assimilation avec de l'acide sulfurique dilué, la gélatine décompose de la même manière que les protéines, rapportant le glycin, le leucin et d'autres acides aminés gras.

La gélatine est une protéine animale, mais fait chaud se produisent comme gélatine dans les tissus animaux. Elle existe là comme collagène de minoid d'albu qui est le constituant plein principal du tissu connectif fibreux, étant trouvé également, mais dans un plus petit pourcentage, dans le cartilage, l'os et le ligament. Le collagène de ces diverses sources n'est pas identique en composition et la gélatine change également, par exemple, la gélatine du cartilage diffère de celle d'autres sources parce qu'elle contient un pourcentage inférieur de l'azote.

La gélatine, le corps résultant de l'hydrolyse du collagène, est également une albuminoïde. (Hofmeister considère cette hydrolyse comme procédant selon l'équation :

collagène + eau = gélatine

mais en faisant face aux substances d'une telle composition variable,

les formules empiriques de cette sorte n'ont aucune grande signification).

Commercialement, elle est préparée à partir de certains genres d'os

et parties de peau. Celles-ci sont choisies, lavées et extraites

GÉLATINE 33

par l'eau et avec de l'acide dilué (chlorhydrique), avec le rela tively peu d'exposition à la chaleur, de sorte que seulement possible des produits liquides de désintégration des actions soient formés et la puissance gelante de la solution résultante n'est pas détruite.

La gélatine de limite est dérivée du gelare latin de verbe, pour congeler, et appelle pour s'occuper de l'attribut principal de cette substance, celui de sa propriété de raidissement ou gelante.

La gélatine appartient à cette classe intéressante des substances appelées les colloïdes. C'est un exemple typique de la classe, et présente les propriétés caractéristiques de la classe. Les colloïdes, dans le contraste marqué aux cristalloïdes, ne se cristallisent pas, aisément ne répandent pas et sont imperméables entre eux. Les particules finales des colloïdes sont beaucoup plus petites que ce que nous nommerions d'habitude une subdivision physique, mais les molécules un peu plus en grande partie que chimiques ; le diamètre des plus petites particules dans une solution colloïdale, par exemple, or colloïdal rouge, qui ont été comptées au moyen de la portée ultra-micro, est 6 millimicrons ou 6 millièmes d'un micron. Un micron est un millième d'un millimètre. (les bactéries sont beaucoup plus grandes, le plus petit visible à l'aide du microscope ordinaire étant de de 0.3 à 1.0 micron de diamètre.) En conséquence leurs réactions se tiennent intermédiaires entre l'examen médical et les changements chimiques de la matière, comme peut être vu en considérant les propriétés de la gélatine.

La gélatine absorbera une quantité considérable de l'eau chaude (elle est presque insoluble en eau froide) et gonfle vers le haut, rapportant une gelée qui, sur l'application de la chaleur, fond à une solution visqueuse et collante qui gélatinise encore lors du refroidissement. Le nom de l'hydrogel est appliqué aux colloïdes montrant cette propriété. Les medias ordinaires de gélatine pour le travail microbiologique contiennent la gélatine de 12% à de 15%. Une fois sèche aux peratures moyens de tem, la gélatine peut encore être redissoute et redried dedans certainement. De cette propriété ce s'appelle un colloïde réversible pour la distinguer d'autres colloïdes qui, quand leur état physique est une fois changé, sont insolubles, par exemple, caséine et acide silicique.

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Si superdried à environ 130 C., ou surchauffé quand dans l'état gélatineux pendant une courte période à une température au-dessus de 100 C., ou pendant longtemps à 100 C., comme dans la stérilisation mittent inter, la gélatine est ainsi modifié que sa puissance redissolvante ou resolidifying respectivement est détruite. Dans superdrying, la perte de la propriété redissolvante est étendue au contact trop étroit des particules constitutives, un changement de l'état physique ; dans la gélatine surchauffée, la perte de la puissance resolidifying est probablement due au tion de disintegra de la molécule de gélatine, un phénomène plus purement chimique. Cette perte de la propriété gélatinisante est également provoquée par les activités enzymatiques de beaucoup de micro-organismes et est également un processus de désintégration.

La gélatine possède un point de liquéfaction qui, cependant, change considérablement dans différentes conditions. D'habitude, les medias contenant la gélatine de 12% à de 15% liquéfieront ou fondre à une température à proximité de 24 à 26 C., solidifient l'ing encore à 8 à 10 C. à une gelée claire et transparente. Par conséquent, des medias de gélatine peuvent être utilisés seulement pour les organizations qui n'exigent pas une température plus élevée que 22 à 24 C. pour le développement. La surchauffe en cours de préparation ou stérilisation causera un abaissement considérable du point de liquéfaction, peut-être finalement tellement bas que le support sera liquide à la température ambiante (20 à 21 C.) On le verra aisément comment le dernier support de gélatine ne pourrait pas maniablement être utilisé pour le tion d'isola des organizations. Quelques données aideront à fixer ceci à l'esprit.

La propriété de solidification de la gélatine change dans la proportion inverse avec de la période de la chauffage pendant le processus de la stérilisation ; son point de liquéfaction est abaissé sur une moyenne de 2 C. pour chaque heure de la chauffage à 100 C. Ceci fait clairement pourquoi un tel soin doit être pris dans la préparation d'un support de gélatine, dans la stérilisation fractionnaire de ce support en vapeur coulante, et pourquoi le refroidissement immédiat est aftei nécessaire ; chaque fractionnement en cours de sa préparation.

GÉLATINE 35

Bien que les températures au-dessus de 100 C. soient beaucoup plus destructives à la propriété de solidification que celle de 100 C., il est possible de stériliser un support contenant 12% à 15% de gélatine dans l'autoclav (7 à 8 Ibs. Pressure) à 112 à 113 C. pendant vingt minutes ou à 15 Ibs. Pressure (120 C. pendant cinq minutes) sans altérer son utilité comme milieu de culture plein.

Cette utilisation de vapeur sous pression (vapeur sèche) est presque nécessaire dans le cas d'un support de gélatine pour effectuer le zation de sterili, puisque gélatine, de sa source, de méthode de préparation, et de responsabilités postérieures à la contamination, est presque sûre de contenir ou soutenir sur sa surface un grand nombre de spores très résistantes. Le chauffage à 100 C. pendant trente minutes trois ou même quatre ou cinq jours consécutifs n'est pas toujours efficace, car ces spores ne germent pas toujours dans un délai de vingt-quatre heures après le chauffage et, se rapportant aux données ci-dessus, lui est aisément vu que l'abaissement du point de faction de lique ne doit pas être considéré comme négligeable en cours de stérilisation intermittente.

La gélatine possède une autre propriété qui le rend valable pour le travail bactériologique : c.-à-d., dans la gélatine le plat ne cultive aucune eau de condensation se rassemble d'habitude sur la couverture de la boîte de Pétri (comme avec l'agar) plus tard pour relâcher sur la surface de la gélatine et pour effacer ainsi des formes des colonies et pour faire devenir les colonies d'isolement souillées avec le voisin. Le stock de ce support dans des tubes à essai ou dans des plats, stérile ou inoculé, est ainsi rendu beaucoup plus simple qu'avec l'agar.

RÉFÉRENCE

VAN DERHEIDE, C.C. : Der Nahrgelatine, voûte de Verflussigungspunkt d'und de Gelatinose Losungen. F. Hyg., Bd. 30, 1897, pp 82-115.

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EXERCICE 8. PRÉPARATION DE GÉLATINE NUTRITIVE

Appareil. infusion stérile de viande de 500 c.c. ; eau du robinet de 500 c.c. ; 150 gms. Gélatine ; 10 gms. Peptone, Witte ; 5 gms. Sel ; 10 gms. Albumen d'oeufs (ou un oeuf) ; bain d'eau ; thermomètre ; seau de 3.5 de litre articles d'agate ; longue tige d'agitation lourde ; appareillage de titration ; NacOh N/20 ; NacOh de N/l ; phénol-phtaléine (indicateur) ; eau distillée ; ances bruts de BAL ; grand brûleur à gaz ; grand entonnoir ; papier filtre tressé ; entonnoir remplissant ; tubes à essai stériles ; 500 c.c stériles. Flacons erlenmeyer ; appareil pour la stérilisation de vapeur ; bain ou réfrigérateur de l'exécuter-eau.

Méthode. 1. Mettez le contenu d'un flacon de l'infusion de viande (500 c.c.) dans un seau d'agate et ajoutez 500 c.c. de l'eau du robinet.

2. Ajoutez la gélatine de 15%, la peptone de 1% Witte, et 0.5% sel au mélange.

3. Chauffez ce mélange sur un bain d'eau pour dissoudre la gélatine, la peptone et le sel, remuant de temps en temps.

4. Refroidissez à 40-50 C. C'est impératif.

5. Ajoutez alors 10 gms. De l'albumen d'oeufs qui a été bien mélangé à 100 c.c. de l'eau du robinet. (mis l'albumen d'oeufs dans un culbuteur, ajoutez assez d'eau pour former une pâte et pour remuer jusqu'à ce que lisse ; ajoutez alors l'eau restante. Un oeuf bien battu peut être substitué.) Mélangez tous complètement.

6. La chaleur en vapeur débordante pendant des minutes forty-five ou dans l'autoclav à 105 C. pendant trente minutes.

7. Titrez avec du NacOh N/20.

8. Ajustez la réaction du support sur +15 avec du NacOh normal ou le HC1 normal. Re titrez et ajustez encore au besoin.

9. Le contrepoids et notent le poids.

10. Bouillez quinze minutes au-dessus de la flamme libre, remuant contre stantly.

11. Contrebalancez et restaurez n'importe quelle perte par évaporation avec de l'eau distillée.

12. Filtrez tout en bouillant le papier filtre tressé traversant chaud

AGAR 37

juste précédemment lavé avec l'eau bouillante de litre de 1/2. Passez le filtrat par le même papier jusqu'à ce qu'il soit lumineux et clair.

13. Remplissez trente tubes à essai stériles, en utilisant approximativement 8 c.c. du support pour chaque tube. Divisez le reste en deux parties égales et le placez dans des flacons erlenmeyer Stériles de litre de 1/2.

14. Chauffez en vapeur débordante vingt minutes trois jours successifs.

15. Refroidissez la gélatine dans un bain de l'exécuter-eau, juste après chaque chauffage. Le soin doit être pris pour chauffer la gélatine le moins possible, puisqu'une partie de la puissance de solidification de la gélatine est détruite avec chaque application de la chaleur.

16. Pour stériliser un grand flacon de gélatine nutritive, la chaleur pendant vingt minutes quatre jours en succession.

AGAR

L'agar ou l'agar-agar (d'une signification malaise "table de mot de vege"), la substance qui est utilisée en préparant un genre de milieu de culture plein pour le travail bactériologique, est un pro tuyau préparé à partir de diverses algues trouvées près de l'Océan Indien et dans les eaux chinoises et japonaises. Ce type d'algue a plusieurs noms communs, comme mousse de la Ceylan ou du Jaffna, ichtyocolle du Bengale, etc... De diverses espèces sont utilisées pour la nourriture et le commerce est considérable.

Payen, un -(about français de chimiste 1859), a obtenu la gelée d'agar de l'algue, corneum de Gelidium, de la façon lowing de fol : On a permis à l'l'algue de se tenir pendant un certain temps dans une solution diluée froide d'acide chlorhydrique ; l'acide a été éliminé en rinçant plusieurs fois avec de l'eau, puis l'algue a été placée dans une solution diluée froide de l'ammoniaque ; ensuite l'ammoniaque a été éliminée par le rinicage répété avec de l'eau froide. Pendant ce processus, l'algue a détruit 53% de son poids dans les sels minéraux, la matière de coloration, et les constituants organiques. La partie restante a été bouillie dans l'eau,

38 GÉNÉRAL MICROBIOLOGIE

pendant quel processus la gelée végétale a été extrait. La solution ainsi obtenu a été versée hors fonction, laissant le sédiment inutile derrière. Cette gelée est la même en composition que qui existant dans les tissus végétaux ; elle n'a pas été changée chimiquement, de même que collagène dans la préparation de la gélatine. L'agar commercial est préparé le plus probablement en évaporant cette solution à sec par différents moyens.

L'agar hérite habituellement les mains du bacteriologist en tant que longtemps, minces, grisâtre-blanches bandes, ou en tant que blocs, ou plus spécialement ces dernières années, sous forme de der gris-blanc de prisonnier de guerre de fabrication européenne.

L'agar, contrairement à la gélatine, est un hydrate de carbone, c.-à-d., il se compose d'une combinaison de carbone, d'hydrogène et d'oxygène seulement. Les traces de l'azote sont présentes comme impuretés. Les déterminations qualitatives ci-dessus de ses uents élémentaires de constit ont été faites par Payen, par Parumbaru et par Hueppe, qui a fait leurs déterminations sur l'agar à partir de différentes sources. Dans la mesure où peut être assuré, son formule empirique n'a pas été encore étudiée tant soit peu.

Comme la gélatine, cependant, l'agar est un colloïde réversible. Il absorbe en eau froide, se dissout dans l'eau chaude après une longue ébullition à une solution claire insipide et inodore, et les ifies pleins lors du refroidissement à l'davantage ou à moins de gelée opaque. Son solution aqueuse est neutre ou presque point mort à la phtaléine de phénol ; toujours, une baisse ou deux du vingtième hydrate normal de sodium est suffisant pour rendre la couleur rose perceptible.

Les propriétés colloïdales de l'agar ne sont pas détruites par un chauffage long-continué à température élevée, ni par l'action des micro-organismes ordinaires de même que ceux de la gélatine. Les propriétés ci-dessus, cependant, sont influencées et peuvent être complètement altérées par la réaction du liquide dans lequel l'agar est dissous.

La réaction du liquide, c.-à-d., si elle est acide ou alkaline, influence l'agar quant à sa solubilité, solidité, couleur, transparent, filtrabilité et quantité de l'eau de tion de condensa. Si l'agar est dissous dans un liquide d'une acidité

AGAR 39

l'équivalent à 0.1% HC1, l'agar se dissout très aisément, filtre rapidement, le filtrat résultant étant une solution jaune-clair, transparente, glissante, aqueuse qui ne solidifie pas lors du refroidissement. Si un plus petit pourcentage d'acide chlorique hydraulique est utilisé, la solidification se produit (en-dessous de 40 C.) mais la gelée "ne se lèvera pas" et est donc inutile pour des cultures de tube oblique ou de plat d'agar. Une grande quantité de l'eau trompeuse de densation est présente également.

Si l'agar est dissous dans un bouillon alkalin ou neutre faible, un liquide épais, brun-rougeâtre, visqueux est qui filtre lentement et solidifie rapidement à 40 C., à une gelée très pleine, opaque, sèche, avoir obtenu mais peu d'eau de condensation ; il maintient sa forme bien dans les pentes et dans des plats. Ainsi la valeur de l'agar comme milieu de culture plein est augmentée ou abaissée selon le cjegree de l'alcalinité ou de l'acidité.

Il doit noter en outre, cependant, que quand une fois la propriété de solidification de l'agar est détruite par la présence d'un excès d'acide dans sa solution, cette propriété peut ne jamais être regagnée par neutralisation avec de l'alcali ; l'acide par manently détruit la réversibilité du colloïde.

Le melting-point de l'agar (de 1.5% dans la solution neutre) est 97 C. et bien que son point de solidification soit à 40 C., quand une fois qu'il a solidifié il se lèvera dans le thermostat à une température de 50 C. Pour des buts bactériologiques, seulement on peut utiliser cette forme de l'agar qui reste liquide à de 38 à 40 C. Agar qui reste liquide seulement à une température au-dessus de ce point serait trop chaud quand dans un état liquide pour l'usage ; la vitalité des organizations présentées serait altérée ou détruite par la haute température.

Des difficultés sont rencontrées dans la préparation d'un milieu de culture plein de l'agar, due à sa solubilité lente, cosity de force et filtrabilité lente conséquente. Sa solution (digestion) est effectuée, comme mentionné au-dessus de, par un long chauffage sur un bain d'eau, un stérilisateur de vapeur, un autoclav, ou un excédent une flamme libre. La durée exigée pour la digestion complète dépend de trois choses : La réaction du

40 GÉNÉRAL MICROBIOLOGIE

liquide dans lequel l'agar est dissous, la teneur en pour cent de l'agar, et la méthode de dissolution. L'influence de la réaction des solutions d'agar a été traitée ci-dessus. Pour l'usage général de culture, cependant, l'agar ordinaire est fait à une plus pleine échelle +15 (l'agar solidifie avec la difficulté au-dessus d'une plus pleine échelle +30).

L'agar d'un pour cent est beaucoup plus facilement soluble dans des conditions identiques qu'un pour cent plus élevé. Un et un demi de pour cent est la quantité utilisée dans des medias ordinaires d'agar, donnant une gelée en quelque sorte plus raide et ainsi plus souhaitable.

L'agar est assimilé le plus rapidement au-dessus d'une flamme libre. Si non de chauffage suffisamment, après la filtration et la stérilisation de l'agar par la méthode intermittente, un itate floconneux de precip apparaît fréquemment dans le support précédemment clair. Ceci peut être fait pour disparaître dans la plupart des cas par la soumission à la température de l'autoclav (120 C. 15 Ibs.).

L'agar pour des milieux de culture devrait être entièrement clair quand liquide, et homogènement opaque-translucide quand solide ; il devrait avoir une translucidité suffisamment pour permettre les colonies profondes des plats ou des cultures de coup à observer aisément ; il ne devrait pas contenir le matériel, le sédiment, ou les morceaux floconneux de coton ou de papier filtre, comme ceux-ci gênent le développement typique de colonie des micro-organismes et, à l'inexpérimenté, peuvent quelques fois être confondus avec des colonies.

Selon les premières méthodes jamais utilisées pour faire les milieux de culture d'agar, au lieu de filtrer l'agar chaud à l'aide du papier filtre, du coton absorbant, ou de l'amiante, on lui a permis de se refroidir, ing de dur qui traitent le sédiment arrangé au bas ; quand le solide le sédiment a été découpé. Cette méthode n'était pas souhaitable, car la clarté de l'agar résultant dépendrait de la cadence du refroidissement ; plus le refroidissement est lent, plus complètement sédimentation aurait lieu.

L'agar n'est pas un aliment pour des micro-organismes en général, c.-à-d., il n'est pas affecté par les enzymes digestives de la plupart des bactéries, de même que gélatine. Cependant, on connaît quelques bactéries qui ont la puissance de l'agar de liquéfaction, parmi laquelle sont B.

PRÉPARATION DE L'AGAR NUTRITIF 41

des espèces du gelaticus n. (gran) et le Bad. Nenckii, dont tous les deux sont trouvés, comme serait prévu, en eau de mer. Cette inertie tive de compara de l'agar le rend valable pour la préparation, des medias synthétiques pleins, dont la valeur peut être en hanced en soumettant l'agar commercial à la fermentation normale pendant quel processus toutes les traces des substances capables de nourriture de résultat sont employé vers le haut par les micro-organismes présents. (Beijerinck.)

L'agar est utile spécial dans le travail bactériologique dans lequel la culture des micro-organismes doit être conduite à une température au-dessus du melting-point de la gélatine. Ce dispositif a rendu les grands pas possibles qui ont été pris en bactériologie médicale, autant de bactéries pathogènes peut être isolé et développé seulement avec la difficulté aux tures de tempera au-dessous de cela du corps.

RÉFÉRENCES

SMITH, ERWIN F. : Bactéries par rapport aux maladies d'usine. Vol.. I,

pp 31-36. Plusieurs illustrations. SCHULTZ, N. K. : Einiger Nahrsubstrate de Bereitung de der de von de Zur Frage.

Cent. F. Bakt. I. Orig., Bd. 10, 1891, p. 57.

EXERCICE 9. PRÉPARATION DE L'AGAR NUTRITIF

Appareil. seau de 3.5 agate-articles de litre ; 15 gms. Agar ; 10 gms. Peptone ; 5 gms. Sel ; 10 gms. Albumen d'oeufs (ou un oeuf) ; infusion stérile de viande de 500 c.c. ; eau du robinet de 500 c.c. ; appareillage de titration ; NacOh N/20 ; NacOh de N/l ; phtaléine de phénol (indicateur) ; eau distillée ; grand entonnoir ; papier filtre tressé ; entonnoir remplissant ; tubes à essai stériles ; ballon stérile de litre ; équilibres bruts ; grand brûleur à gaz ; tasse de mesure de 1 litre ; appareil pour la stérilisation de vapeur.

Méthode. 1. Dans des gms d'un endroit 15 de seau d'articles d'agate de 3 litres. De l'agar dans 500 c.c. de l'eau du robinet.

2. Lavez l'agar bien, en séparant les lambeaux et l'ing de squeez il par les mains.

3. Décantez l'eau modifiée, mesurant la quantité versée

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MICROBIOLOGIE GÉNÉRALE

outre de ; substituez avec la même quantité d'eau du robinet propre.

Répétez.

4. Dissolvez au-dessus d'une flamme et d'une ébullition libres pendant cinq minutes, remuant constamment. Le tion de solu doit être entièrement exempt des morceaux de l'agar.

5. Ajoutez la peptone de 1% Witte et 0.5% sel à l'agar d'ébullition.

6. À 500 c.c. de la viande dans la fusion ajoutez 10 gms. d'Al d'oeufs bumen qui a été bien mélangé à 100 c.c. de l'eau du robinet. (mis l'albumen d'oeufs dans un culbuteur et ajoutez assez d'eau pour former une pâte. Remuez jusqu'à lisse et puis ajoutez l'eau d'ing de rester. Un oeuf ; puits battu,

Fig. 9. L'entonnoir d'eau chaude pour peut être substitué.) Mélangez tout l'agar ou gélatine de filtrage. Complètement

7. Versez le mélange fondu d'agar lentement dans l'infusion de viande, remuant constamment. La chaleur dans l'autoclav à 120 C. pendant des minutes forty-five ou pendant une heure en vapeur débordante.

Note. Le moment pour ce chauffage ne peut être rallongé à l'avantage, mais se raccourcir jamais. Si l'agar n'a pas été chauffé suffisamment avant filtration, un précipité floconneux formera dans les tubes lors de la chauffage en vapeur débordante. Dans la plupart des cas ceci peut être provoqué pour disparaître par la chauffage pendant une courte période dans l'autoclav à 15 Ibs.

8. Titrez avec du NacOh N/20.

9. Ajustez la réaction du support sur +15 avec du NacOh normal ou le HC1 normal. Retitrate et rajustent la réaction au besoin.

10. Le contrepoids et notent le poids.

11. Bouillez quinze minutes au-dessus d'une flamme libre, remuant contre stantly,

SOLUTION 43 DE LA PEPTONE DE DUNHAM

12. Contrebalancez et composez n'importe quelle perte dans le poids avec de l'eau distillée d'ébullition.

13. Filtrez le papier filtre tressé traversant chaud d'ébullition juste précédemment lavé avec l'eau bouillante. Passez le filtrat par le même papier jusqu'à ce que clair.

14. Tubes à essai stériles du remplissage 60 à 70, en utilisant approximativement 8 c.c. du support pour chaque tube.

15. Chauffez en vapeur débordante vingt minutes trois jours cessive de suc.

16. À l'extrémité du chauffage final, placez les tubes de l'agar dans une position inclinée pour solidifier (ne laissez pas le support toucher la prise) de sorte qu'une grande surface soit sented pré pour la culture des micro-organismes. Ceux-ci s'appellent les tubes obliques d'agar.

Note. Si des tubes d'agar doivent être utilisés seulement pour des tubes obliques d'agar, moins de support est nécessaire dans le tube que quand elles doivent être utilisées pour l'électrodéposition.

17. Pour stériliser un grand flacon d'agar, la chaleur pendant trente minutes quatre jours successifs.