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Culture Bactérienne de Plats d'Agar

L'information sur la croissance des cultures bactériennes à l'aide des plats de culture d'agar

Table des matières :

Plat d'agar et medias d'agar dépannant et sujets de forum

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Quel est agar - définition ?

L'agar ou l'agar-agar (d'une signification malaise "légume" de mot), la substance qui est utilisée en préparant un genre de milieu de culture plein pour le travail bactériologique, est un pro tuyau préparé à partir de diverses algues trouvées près de l'Océan Indien et dans les eaux chinoises et japonaises. Ce type d'algue a plusieurs noms communs, comme mousse de la Ceylan ou du Jaffna, ichtyocolle du Bengale, etc... De diverses espèces sont utilisées pour la nourriture et le commerce est considérable.

Fond et histoire sur la microbiologie à l'aide du bouillon et des plats nutritifs d'agar

Payen, un -(about français de chimiste 1859), a obtenu la gelée d'agar de l'algue, corneum de Gelidium, de la façon suivante : On a permis à l'l'algue de se tenir pendant un certain temps dans une solution diluée froide d'acide chlorhydrique ; l'acide a été éliminé en rinçant plusieurs fois avec de l'eau, puis l'algue a été placée dans une solution diluée froide de l'ammoniaque ; ensuite l'ammoniaque a été éliminée par le rinicage répété avec de l'eau froide. Pendant ce processus, l'algue a détruit 53% de son poids dans les sels minéraux, la matière de coloration, et les constituants organiques. La partie restante a été bouillie dans l'eau, pendant laquelle le processus la gelée végétale a été extraite. La solution ainsi obtenu a été versée hors fonction, laissant le sédiment inutile derrière. Cette gelée est la même en composition que qui existant dans les tissus végétaux ; elle n'a pas été changée chimiquement, de même que collagène dans la préparation de la gélatine. L'agar commercial est préparé le plus probablement en évaporant cette solution à sec par différents moyens.

L'agar hérite habituellement les mains du bacteriologist en tant que longtemps, minces, grisâtre-blanches bandes, ou en tant que blocs, ou plus spécialement ces dernières années, sous forme de der gris-blanc de prisonnier de guerre de fabrication européenne.

L'agar, contrairement à la gélatine, est un hydrate de carbone, c.-à-d., il se compose d'une combinaison de carbone, d'hydrogène et d'oxygène seulement. Les traces de l'azote sont présentes comme impuretés. Les déterminations qualitatives ci-dessus de ses uents élémentaires de constit ont été faites par Payen, par Parumbaru et par Hueppe, qui a fait leurs déterminations sur l'agar à partir de différentes sources. Dans la mesure où peut être assuré, son formule empirique n'a pas été encore étudiée tant soit peu.

Comme la gélatine, cependant, l'agar est un colloïde réversible. Il absorbe en eau froide, se dissout dans l'eau chaude après une longue ébullition à une solution claire insipide et inodore, et les ifies pleins lors du refroidissement à l'davantage ou à moins de gelée opaque. Son solution aqueuse est neutre ou presque point mort à la phtaléine de phénol ; toujours, une baisse ou deux du vingtième hydrate normal de sodium est suffisant pour rendre la couleur rose perceptible.

Les propriétés colloïdales de l'agar ne sont pas détruites par un chauffage long-continué à température élevée, ni par l'action des micro-organismes ordinaires de même que ceux de la gélatine. Les propriétés ci-dessus, cependant, sont influencées et peuvent être complètement altérées par la réaction du liquide dans lequel l'agar est dissous.

La réaction du liquide, c.-à-d., si elle est acide ou alkaline, influence l'agar quant à sa solubilité, solidité, couleur, transparent, filtrabilité et quantité de l'eau de tion de condensa. Si l'agar est dissous dans un liquide d'une acidité équivalente à 0.1% HC1, l'agar se dissout très aisément, filtre rapidement, le filtrat résultant étant une solution jaune-clair, transparente, glissante, aqueuse qui ne solidifie pas lors du refroidissement. Si un plus petit pourcentage d'acide chlorique hydraulique est utilisé, la solidification se produit (en-dessous de 40 C.) mais la gelée "ne se lèvera pas" et est donc inutile pour des cultures de tube oblique ou de plat d'agar. Une grande quantité de l'eau trompeuse de densation est présente également.

Si l'agar est dissous dans un bouillon alkalin ou neutre faible, un liquide épais, brun-rougeâtre, visqueux est qui filtre lentement et solidifie rapidement à 40 C., à une gelée très pleine, opaque, sèche, avoir obtenu mais peu d'eau de condensation ; il maintient sa forme bien dans les pentes et dans des plats. Ainsi la valeur de l'agar comme milieu de culture plein est augmentée ou abaissée selon le cjegree de l'alcalinité ou de l'acidité.

Il doit noter en outre, cependant, que quand une fois la propriété de solidification de l'agar est détruite par la présence d'un excès d'acide dans sa solution, cette propriété peut ne jamais être regagnée par neutralisation avec de l'alcali ; l'acide par manently détruit la réversibilité du colloïde.

Le melting-point de l'agar (de 1.5% dans la solution neutre) est 97 C. et bien que son point de solidification soit à 40 C., quand une fois qu'il a solidifié il se lèvera dans le thermostat à une température de 50 C. Pour des buts bactériologiques, seulement on peut utiliser cette forme de l'agar qui reste liquide à de 38 à 40 C. Agar qui reste liquide seulement à une température au-dessus de ce point serait trop chaud quand dans un état liquide pour l'usage ; la vitalité des organizations présentées serait altérée ou détruite par la haute température.

Avantages et inconvénients comme agar en tant que medias nutritifs

Des difficultés sont rencontrées dans la préparation d'un milieu de culture plein de l'agar, due à sa solubilité lente, viscosité et filtrabilité lente conséquente. Sa solution (digestion) est effectuée, comme mentionné au-dessus de, par un long chauffage sur un bain d'eau, un stérilisateur de vapeur, un autoclav, ou un excédent une flamme libre. La durée exigée pour la digestion complète dépend de trois choses : La réaction du liquide dans lequel l'agar est dissous, la teneur en pour cent de l'agar, et la méthode de dissolution. L'influence de la réaction des solutions d'agar a été traitée ci-dessus. Pour l'usage général de culture, cependant, l'agar ordinaire est fait à une plus pleine échelle +15 (l'agar solidifie avec la difficulté au-dessus d'une plus pleine échelle +30).

L'agar d'un pour cent est beaucoup plus facilement soluble dans des conditions identiques qu'un pour cent plus élevé. Un et un demi de pour cent est la quantité utilisée dans des medias ordinaires d'agar, donnant une gelée en quelque sorte plus raide et ainsi plus souhaitable.

L'agar est assimilé le plus rapidement au-dessus d'une flamme libre. Si non de chauffage suffisamment, après la filtration et la stérilisation de l'agar par la méthode intermittente, un itate floconneux de precip apparaît fréquemment dans le support précédemment clair. Ceci peut être fait pour disparaître dans la plupart des cas par la soumission à la température de l'autoclav (120 C. 15 Ibs.).

L'agar pour des milieux de culture devrait être entièrement clair quand liquide, et homogènement opaque-translucide quand solide ; il devrait avoir une translucidité suffisamment pour permettre les colonies profondes des plats ou des cultures de coup à observer aisément ; il ne devrait pas contenir le matériel, le sédiment, ou les morceaux floconneux de coton ou de papier filtre, comme ceux-ci gênent le développement typique de colonie des micro-organismes et, à l'inexpérimenté, peuvent quelques fois être confondus avec des colonies.

Selon les premières méthodes jamais utilisées pour faire des milieux de culture d'agar, au lieu de filtrer l'agar chaud à l'aide du papier filtre, du coton absorbant, ou de l'amiante, on lui a permis de se refroidir, pendant lequel le processus le sédiment arrangé au bas ; quand le solide le sédiment a été découpé. Cette méthode n'était pas souhaitable, car la clarté de l'agar résultant dépendrait de la cadence du refroidissement ; plus le refroidissement est lent, plus complètement sédimentation aurait lieu.

 

L'agar n'est pas un aliment pour des micro-organismes en général, c.-à-d., il n'est pas affecté par les enzymes digestives de la plupart des bactéries, de même que gélatine. Cependant, on connaît quelques bactéries qui ont la puissance de l'agar de liquéfaction, parmi laquelle sont les espèces du gelaticus n. de B. (gran) et le Bad. Nenckii, dont tous les deux sont trouvés, comme seraient prévues, en eau de mer. Cette inertie tive de compara de l'agar le rend valable pour la préparation, des medias synthétiques pleins, dont la valeur peut être en hanced en soumettant l'agar commercial à la fermentation normale pendant quel processus toutes les traces des substances capables de nourriture de résultat sont employé vers le haut par les micro-organismes présents. (Beijerinck.)

L'agar est utile spécial dans le travail bactériologique dans lequel la culture des micro-organismes doit être conduite à une température au-dessus du melting-point de la gélatine. Ce dispositif a rendu les grands pas possibles qui ont été pris en bactériologie médicale, autant de bactéries pathogènes peut être isolé et développé seulement avec la difficulté aux tures de tempera au-dessous de cela du corps.

 

 

EXERCICE 9. PRÉPARATION DE L'AGAR NUTRITIF

Appareil. seau de 3.5 agate-articles de litre ; 15 gms. Agar ; 10 gms. Peptone ; 5 gms. Sel ; 10 gms. Albumen d'oeufs (ou un oeuf) ; infusion stérile de viande de 500 c.c. ; eau du robinet de 500 c.c. ; appareillage de titration ; NacOh N/20 ; NacOh de N/l ; phtaléine de phénol (indicateur) ; eau distillée ; grand entonnoir ; papier filtre tressé ; entonnoir remplissant ; tubes à essai stériles ; ballon stérile de litre ; équilibres bruts ; grand brûleur à gaz ; tasse de mesure de 1 litre ; appareil pour la stérilisation de vapeur.

Méthode. 1. Dans des gms d'un endroit 15 de seau d'articles d'agate de 3 litres. De l'agar dans 500 c.c. de l'eau du robinet.

2. Lavez l'agar bien, en séparant les lambeaux et l'ing de squeez il par les mains.

3. Décantez l'eau modifiée, mesurant la quantité versée

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MICROBIOLOGIE GÉNÉRALE

outre de ; substituez avec la même quantité d'eau du robinet propre.

Répétez.

4. Dissolvez au-dessus d'une flamme et d'une ébullition libres pendant cinq minutes, remuant constamment. Le tion de solu doit être entièrement exempt des morceaux de l'agar.

5. Ajoutez la peptone de 1% Witte et 0.5% sel à l'agar d'ébullition.

6. À 500 c.c. de la viande dans la fusion ajoutez 10 gms. d'Al d'oeufs bumen qui a été bien mélangé à 100 c.c. de l'eau du robinet. (mis l'albumen d'oeufs dans un culbuteur et ajoutez assez d'eau pour former une pâte. Remuez jusqu'à lisse et puis ajoutez l'eau d'ing de rester. Un oeuf ; puits battu,

Fig. 9. L'entonnoir d'eau chaude pour peut être substitué.) Mélangez tout l'agar ou gélatine de filtrage. Complètement

7. Versez le mélange fondu d'agar lentement dans l'infusion de viande, remuant constamment. La chaleur dans l'autoclav à 120 C. pendant des minutes forty-five ou pendant une heure en vapeur débordante.

Note. Le moment pour ce chauffage ne peut être rallongé à l'avantage, mais se raccourcir jamais. Si l'agar n'a pas été chauffé suffisamment avant filtration, un précipité floconneux formera dans les tubes lors de la chauffage en vapeur débordante. Dans la plupart des cas ceci peut être provoqué pour disparaître par la chauffage pendant une courte période dans l'autoclav à 15 Ibs.

8. Titrez avec du NacOh N/20.

9. Ajustez la réaction du support sur +15 avec du NacOh normal ou le HC1 normal. Retitrate et rajustent la réaction au besoin.

10. Le contrepoids et notent le poids.

11. Bouillez quinze minutes au-dessus d'une flamme libre, remuant contre stantly,

SOLUTION 43 DE LA PEPTONE DE DUNHAM

12. Contrebalancez et composez n'importe quelle perte dans le poids avec de l'eau distillée d'ébullition.

13. Filtrez le papier filtre tressé traversant chaud d'ébullition juste précédemment lavé avec l'eau bouillante. Passez le filtrat par le même papier jusqu'à ce que clair.

14. Tubes à essai stériles du remplissage 60 à 70, en utilisant approximativement 8 c.c. du support pour chaque tube.

15. Chauffez en vapeur débordante vingt minutes trois jours cessive de suc.

16. À l'extrémité du chauffage final, placez les tubes de l'agar dans une position inclinée pour solidifier (ne laissez pas le support toucher la prise) de sorte qu'une grande surface soit sented pré pour la culture des micro-organismes. Ceux-ci s'appellent les tubes obliques d'agar.

Note. Si des tubes d'agar doivent être utilisés seulement pour des tubes obliques d'agar, moins de support est nécessaire dans le tube que quand elles doivent être utilisées pour l'électrodéposition.

17. Pour stériliser un grand flacon d'agar, la chaleur pendant trente minutes quatre jours successifs.

 

 

 

Références pour la culture bactérienne d'agar

SMITH, ERWIN F. : Bactéries par rapport aux maladies d'usine. Vol.. I,

pp 31-36. Plusieurs illustrations. SCHULTZ, N. K. : Einiger Nahrsubstrate de Bereitung de der de von de Zur Frage.

Cent. F. Bakt. I. Orig., Bd. 10, 1891, p. 57.