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L'immunofluorescence est l'écriture de labels des anticorps ou des antigènes avec les colorants fluorescents. Cette technique est employée souvent pour visualiser la distribution sous-cellulaire des biomolécules d'intérêt. des sections ou les cultures Immunofluorescent-étiquetées de tissu sont étudiées utilisant un microscope de fluorescence ou par microscopie confocal.
Le plus généralement, l'immunofluorescence utilise deux ensembles d'anticorps : un anticorps primaire est utilisé contre l'antigène d'intérêt ; on introduit un anticorps ultérieur, secondaire, teindre-couplé qui identifie l'anticorps primaire. De cette fa4con le chercheur peut créer plusieurs anticorps primaires qui identifient de divers antigènes, mais, parce qu'ils tous partagent une région constante commune, peut être reconnu par un anticorps teindre-couplé simple. Typiquement ceci est fait en utilisant des anticorps faits dans différentes espèces. Par exemple, un chercheur pourrait créer les anticorps dans une chèvre qui identifient plusieurs antigènes, et puis emploie les anticorps teindre-couplés de lapin qui identifient la région constante d'anticorps de chèvre (anti-chèvre dénotée de lapin). Ceci permet la réutilisation des anticorps teindre-couplés parfabrication dans des expériences multiples.
Dans certains cas, il est avantageux d'utiliser les anticorps primaires directement étiquetés avec un fluorophore. Cette écriture de labels directe diminue le nombre d'étapes du procédé de souillure et, d'une manière primordiale, évite souvent des problèmes d'activité hétérospécifique et de fond élevé. L'écriture de labels fluorescente peut être exécutée en moins d'une heure avec les lots d'étiquettes facilement disponibles.
Beaucoup d'utilisations de l'immunofluorescence ont été démodées par le développement des protéines de recombinaison contenant des domaines fluorescents de protéine, par exemple la protéine fluorescente de vert (GFP). L'utilisation de tels les protéines « étiquetées » permet une localisation bien meilleure et moins d'interruption de fonction de protéine.
Les applications de l'immunofluorescence incluent :
Comme avec la plupart des techniques de fluorescence, un problème significatif avec l'immunofluorescence photobleaching. La perte d'activité provoquée par photobleaching peut être contrôlée en réduisant l'intensité ou la période de l'exposition à la lumière, en augmentant la concentration des fluorophores, ou en utilisant des fluorophores plus robustes qui sont moins à de blanchiment enclin (par exemple Alexa Fluors ou DyLight Fluors).
Puisqu'ils contiennent les ingrédients qui agissent sur l'un l'autre, beaucoup de mélanges sont les plus efficaces quand frais composé.
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Vidéo d'immunofluorescence
Immunofluorescence. Ce vidéo explique comment employer l'immunofluorescence pour souiller différentes parties de la cellule en juin Cheng.
Ajouté par : oBWhat
Étiquettes : cellules de tache d'immunofluorescence
Date : 2008-05-04
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