Fixation

Des fixatifs et les préservatifs sont employés pour préserver des tissus pour leur étude. Fixatifs communs tels que la formaline mise en mémoire tampon neutre (formaldéhyde de 10% dans salin tamponné aux phosphates (PBS)) sont également utilisés pour étudier les structures de la cellule, et les organelles de cellules trouvées dans les différentes cellules (par exemple, noyau, bonnet endoplasmique rugueux, et mitochondries). Les tissus doivent des premiers stabiliser mécaniquement et biochimiquement dans un fixatif. Il est important de considérer qu'un fixatif ne devrait pas être trop toxique à son dérouleur, et il ne devrait pas endommager le tissu étant préservé.

Table des matières de fixation

Introduction à la fixation et à l'histologie de tissu

Quand un tissu est retiré d'une condition vivante, plusieurs changements sont lancés de ses cellules. Les bactéries commencent à mtiltiply et les détruisent. Également l'autolyse (individu-digestion), un lysis ou une dissolution des cellules par les enzymes contenues, place dedans. Les enzymes semblent renverser leur action ; au lieu de synthétiser des acides aminés dans des protéines de cellules, ils commencent à couper des protéines en acides aminés. Ces acides aminés répandent hors des cellules, et car les protéines d'un sult de Re ne sont plus coagulables par les réactifs chimiques. Les modifications ci-dessus mènent à de soi-disant conditions post mortem. Aux fins de l'examen d'éloquence de laboratoire il est nécessaire de traiter le tissu pour empêcher ces effets post mortem ; il est également nécessaire de convertir les pièces de cellules en matériaux qui demeureront insolubles pendant le traitement ultérieur, et de protéger les cellules contre la déformation et le rétrécissement une fois soumis aux fluides tels que les alcools et la paraffine chaude. Encore d'autres objectifs importants de préparation de tissu sont d'améliorer le potentiel de souillure des pièces de tissu et de changer leurs indices de réfraction vers la visibilité améliorée. Le procédé employé pour répondre aux exigences ci-dessus s'appelle la fixation et les fluides s'appellent les fixatifs ou les solutions de fixation. Les solutions de fixation devraient répondre aux principaux objectifs suivants :

But de fixation :

Le but de la fixation est :

1. Pénétrez rapidement pour empêcher les modifications post mortem.
2. Coagulez le contenu de cellules dans les substances insolubles.
3. Protégez le tissu contre le rétrécissement et la déformation pendant la déshydratation, encastrant et sectionnant.
4. Permettez aux pièces de cellules de devenir sélectivement et clairement visibles au moyen de colorants et indices de réfraction améliorés.

Fixatifs

Dans certains cas le fixatif peut exercer (combinant insoluble) un effet de mordançage sur le tissu, réunissant de ce fait les deux dans une action de souillure et aidant dans la connexion des colorants et des protéines entre eux.

Des tissus doivent être placés aussitôt que possible dans les fixatifs après la mort. Si, cependant, le retard est inévitable, ils est placé dans un réfrigérateur, de ce fait ramener l'autolyse et la putréfaction à un minimum jusqu'au fixa tive peut être appliqué. Un produit chimique simple possède rarement toutes les qualités requises d'un bon fixatif ; une solution de fixation donc se compose rarement de seulement un produit chimique. Une exception familière est formaline. D'autres fixatifs fiables escroquent le tain un ou plusieurs produits chimiques pour coaguler les protéines des cellules, et un ou plusieurs produits chimiques pour rendre les protéines insolubles sans actu allient les coaguler.

Les fixatifs de coagulant changent le spongework des protéines en mailles par lesquelles la paraffine peut facilement passer, ainsi ing de forme un tissu de l'uniformité appropriée pour le sectionnement. En outre, les pro liaisons de tein sont renforcées par des coagulants contre la décomposition pendant des procédures postérieures. Seul utilisé, cependant, des coagulants ayez les tages disadvan du fait ils peuvent former un réseau trop brut pour le meilleur détail cytologique. En outre, la coagulation tend à induire la formation des structures artificielles (objets façonnés). Les fixatifs de Noncoagulant produisent peu d'objets façonnés mais si seul utilisé ont l'inconvénient de donner au tissu un sistency pauvre d'escroquerie pour encastrer.

Il suit donc que le fluide idéal de fixation est une combinaison d'un ou plusieurs coagulants de protéine et d'un ou plusieurs non coagulants. Les solutions les plus efficaces sont de cette nature, et combinent si possible tous les types d'action. Ceci exclut ceux conçus pour la fixation d'un certain composant spécifique de cellules, tel que des chromosomes, glycogène, mitochondries.

Protocoles de fixation

Puisqu'ils contiennent les ingrédients qui agissent sur l'un l'autre, beaucoup de mélanges sont les plus efficaces quand frais composé.

Cependant, les différentes pièces habituellement peuvent se composer en tant que solutions courantes et être mélangées ensemble au moment de l'emploi. Parmi les produits chimiques fréquemment utilisés sont l'aldéhyde de forme, l'alcool éthylique, l'acide acétique, l'acide picrique, le dichromate de potassium, le chlorure mercurique, l'acide chromique et le tétroxyde d'osmium.

Puisque chaque produit chimique possède son propre ensemble d'avantages et d'inconvénients, chaque composant de solution devrait, autant que possible, compenser un défaut dans un autre composant. Par exemple, dans le cas du fixatif employé couramment, la solution de Bouin : 1. Le formaldéhyde fixe le cytoplasme mais de façon qu'il retarde la pénétration de paraffine. Il fixe la chromatine mal et rend le cytoplasme basiphilic. 2. L'acide picrique coagule le plasma de cyto de sorte qu'il admette la paraffine, laisse le tissu mou, fixe la chromatine et rende le cytoplasme acidophilique, mais il rétrécisse et rende des produits chimiques de chroma utilisés généralement en étain des solutions de fixation 5 acidophilique. 3. L'acide acétique compense les les deux les derniers défauts. Aucune règle dure et rapide n'existe au sujet du choix d'un fixatif ; la sélection de gen vraiment est déterminée par le type de recherche.

S'il y a n'importe quelle question quant aux plans futurs pour un tissu, la formaline est un choix sûr ; elle permet secondaire ou la poteau-fixation. Quelques suggestions peuvent être incluses. Si l'anatomie globale du tisstie est satisfaisante, les fixatifs de rotitine peuvent être utilisés : formaline, Siisa, Zenker, Helly, ou Bouin. Les fixatifs spéciaux pour des inckisions de cellules sont Carnoy, Flemming, Champy, Helly, Schaudinn, Regand, et d'autres. Pour l'histochimie le chercheur est limité à la formaline, à l'acétone, ou à l'alcool éthylique. La plupart des solutions de fixation sont baptisées du nom de la personne les lançant ; Zenker et Bouin sont des exemples. Si le même homme lançait plus d'une combinaison des produits chimiques, des moyens supplémentaires de les indiquer ont été utilisés. Les solutions faibles et fortes de Flemming, les séries du B3 d'Allen, de l'Ely, le fluide etc. Susa ont été baptisés par Heidenhain du nom des deux premières lettres de deux mots : sublimez et faites sauter.

Articles de fixation de tissu

Fixation

Fixation glaciaire de tissu d'acide acétique

Solution de fixation d'acétone

Solution de fixation de trioxyde de chrome

Méthodes relatives d'histologie

Histologie

Protocoles d'histologie

Protocoles de Microdissection de saisie de laser

Échantillon de tissu sectionnant des protocoles

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