Analyse d'ELISA

Table des matières d'ELISA

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Quel est un ELISA ?

L'analyse Enzyme-Jointe d'immunosorbant, ou l'ELISA, est une technique biochimique employée principalement en immunologie pour détecter la présence d'un anticorps ou d'un antigène dans un échantillon. L'ELISA a été utilisé comme outil diagnostique dans la médecine et la pathologie des plantes, aussi bien qu'un contrôle de qualité signent de diverses industries. En termes simples, dans ELISA par quantité inconnue d'antigène est apposé sur une surface, et alors un anticorps spécifique est lavé au-dessus de la surface de sorte qu'il puisse lier à l'antigène. Cet anticorps est lié à une enzyme, et dans l'étape finale une substance est ajoutée que l'enzyme peut convertir en un certain signal discernable. Ainsi dans le cas de la fluorescence ELISA, quand la lumière est brillée sur l'échantillon, tous les complexes d'antigène/anticorps brilleront par fluorescence de sorte que la quantité d'antigène dans l'échantillon puisse être mesurée.

L'exécution d'un ELISA implique au moins un anticorps de la spécificité pour un antigène particulier. L'échantillon avec une quantité inconnue d'antigène est immobilisé sur un support plein (habituellement un plat de micro-titre de polystyrène) non spécifique (par l'intermédiaire de l'adsorption sur la surface) ou spécifiquement (par l'intermédiaire de la saisie par un autre détail d'anticorps au même antigène, dans un « sandwich » ELISA). Après que l'antigène soit immobilisé l'anticorps de détection est ajouté, formant un complexe avec de l'antigène. L'anticorps de détection peut être en covalence lié à une enzyme, ou peut elle-même être détecté par un anticorps secondaire qui est lié à une enzyme par le bioconjugation. Entre chaque étape le plat est typiquement lavé avec une solution détersive douce pour éliminer tous les protéines ou anticorps qui ne sont pas spécifiquement liés. Après que l'étape finale de lavage le plat soit développée en ajoutant un substrat enzymatique pour produire un signal visible, qui indique la quantité d'antigène dans l'échantillon. ELISAs plus ancien utilisent les substrats chromogènes, bien que de plus nouvelles analyses utilisent les substrats fluorogenic avec une sensibilité beaucoup plus élevée.

Applications d'analyse d'ELISA

Puisque l'ELISA peut être exécuté pour évaluer la présence de l'antigène ou la présence de l'anticorps dans un échantillon, c'est un outil utile pour déterminer des concentrations en anticorps de sérum (comme avec l'essai d'HIV [1] ou virus de West Nile) et également pour détecter la présence de l'antigène. Il a également trouvé des applications dans l'industrie alimentaire en détectant les allergènes potentiels de nourriture tels que le lait, des arachides, des noix, des amandes, et des oeufs. [2] ELISA peut également être utilisé en toxicologie comme écran présumé rapide pour certaines classes des drogues.

L'essai d'ELISA, ou l'immunoessai d'enzymes (l'EIE), était le premier test de dépistage généralement utilisé pour HIV. Il a une sensibilité élevée. Dans un essai d'ELISA, le sérum d'une personne est le fois 400 dilué et appliqué à un plat auquel des antigènes d'HIV ont été fixés. Si les anticorps à HIV sont présents dans le sérum, ils peuvent lier à ces antigènes d'HIV. Le plat est alors lavé pour retirer tous autres composants du sérum. « Un anticorps secondaire » particulièrement préparé - un anticorps qui lie aux anticorps humains - est alors appliqué au plat, suivi d'autre Washington. Cet anticorps secondaire est chimiquement lié à l'avance à une enzyme. Ainsi le plat contiendra l'enzyme proportionnellement à la quantité d'anticorps secondaire liée au plat. Un substrat pour l'enzyme est appliqué, et la catalyse par l'enzyme mène à un changement de couleur ou de fluorescence. Des résultats d'ELISA sont enregistrés comme nombre ; l'aspect le plus controversé de cet essai détermine le point de « coupure » entre un résultat positif et négatif.

Une méthode de déterminer un point de coupure est par comparaison avec une norme connue. Par exemple, si un essai d'ELISA sera utilisé dans le criblage de drogue de lieu de travail, on préparera une concentration de coupure (par exemple, 50 ng/mL de drogue) sera établie et un échantillon qui contient cette concentration d'analyte. Des inconnus qui produisent d'un signal qui est plus positif que l'échantillon connu s'appellent « positif » et ceux qui produisent d'un positif de signal moins que l'échantillon connu s'appellent le « négatif.

ELISA

Avant le développement de l'EIA/ELISA, la seule option pour conduire un immunoessai était radioimmunoanalyse, une technique utilisant les antigènes radioactif-étiquetés ou des anticorps. Dans la radioimmunoanalyse, la radioactivité fournit le signal qui indique si un antigène ou un anticorps spécifique est présent dans l'échantillon. La radioimmunoanalyse a été décrite la première fois dans un papier par Rosalyn Sussman Yalow et Solomon Berson édité en 1960 [3].

Puisque la radioactivité constitue une menace de santé, une alternative plus sûre a été recherchée. Une alternative appropriée à la radioimmunoanalyse substituerait un signal non radioactif au lieu du signal radioactif. Quand certaines enzymes (telles que la peroxydase) réagissent avec les substrats appropriés (tels qu'ABTS ou 3.3 ', 5.5 ' - Tetramethylbenzidine), elles peuvent avoir comme conséquence les changements de la couleur, qui peut être utilisée comme signal. Cependant, le signal doit être associé à la présence de l'anticorps ou de l'antigène, qui est pourquoi l'enzyme doit être liée à un anticorps approprié. Ce processus joignant a été indépendamment développé par Stratis Avrameas et G.B. Pierce [4]. Puisqu'il est nécessaire d'éliminer n'importe quel anticorps ou antigène non lié par le lavage, l'anticorps ou l'antigène doit être fixé sur la surface du récipient, c.-à-d. l'immunosorbant doit être préparé. Une technique pour accomplir ceci a été éditée près au loin et Porath en 1966 [5]

En 1971, Peter Perlmann et Eva Engvall à l'université de Stockholm en Suède, comme Anton Schuurs et Bauke van Weemen aux Pays Bas, ont indépendamment édité les documents qui ont synthétisé cette connaissance dans des méthodes pour exécuter EIA/ELISA [6] [7]

Protocole d'ELISA

Vidéos d'analyse d'Elisa

Vidéo d'analyse d'ELISA

Vidéo d'analyse d'ELISA. La détermination de Chlorpyriphos méthyle dans des échantillons de blé par l'enzyme a joint l'analyse ELISA d'immunosorbant de zuhaitz77.

Ajouté par : oBWhat
Étiquettes : immunosorbant joint par enzyme elisay d'analyse
Date : 2008-05-04

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